羥苯磺酸鈣對糖尿病大鼠血肌酐的影響及機制

羥苯磺酸鈣對糖尿病大鼠血肌酐的影響及機制

肌腱是人體肌肉酸的代謝產(chǎn)物。正常人的肌肉代謝主要通過腎臟排出。血清肌酐的清除是評價腎功能的一個重要指標。近年來我院臨床資料證實羥本磺酸鈣有降低血肌酐、尿素氮、尿酸等作用，特別是降低血肌酐作用尤其顯著。其具體機制國內(nèi)外尚未見報道，為闡明羥本磺酸鈣對肌酐的作用機制，本組在糖尿病大鼠中進行了羥本磺酸鈣對血肌酐的實驗研究。現(xiàn)報告如下：1材料和方法1.1實驗濃度羥苯磺酸鈣由西安利君制藥提供，用蒸餾水稀釋至實驗濃度。鏈脲佐菌素（STZ）購自美國Sigma公司，以0.1mol/L,pH4.2枸椽酸緩沖液溶解新鮮配制。1.2單籠飼養(yǎng)，自由飲水40只雄性SD大鼠，體重200～250g（華中科技大學同濟醫(yī)學院動物中心提供）。大鼠飼養(yǎng)7d后隨機分為，正常對照組（A組，6只），正常給藥組（B組，6只）及實驗組。實驗組經(jīng)過高糖、高脂飲食28d后，分兩次小劑量腹腔注射STZ(30mg/kg）。第二次給藥72h后將血糖≥16.7mmol/L，尿糖強陽性，胰島素敏感指數(shù)（INS）下降選定為2型糖尿病實驗動物，再將其隨機分為2組，糖尿病對照組（C組，6只）、羥苯磺酸鈣治療組（D組，6只）。D組以羥苯磺酸鈣每日100mg/kg灌胃，A、C組同時灌服蒸餾水。動物單籠飼養(yǎng)，自由進食、飲水。給藥24周后收取24h尿液，麻醉后下腔靜脈取血，摘取雙側腎臟，稱重，取部分皮質(zhì)固定于4.0%的多聚甲醛，部分固定于3.7%戊二醛液。1.3血尿胱之比較血糖用美國強生公司血糖儀測定，全自動生化分析儀測定血肌酐（Scr）、尿肌酐（Ucr）。計算內(nèi)生肌酐清除率（Ccr）,Ccr=Ucr×尿量/Scr，并校正體重，尿蛋白采用雙縮脲法。1.4腎病理分析1.4.1組織學分析方法新鮮的腎臟去除包膜后，以10.0%中性福爾馬林固定24h，常規(guī)石蠟包埋切片，行HE,PASM,Masson染色，由專職病理醫(yī)生讀片分析。PASM切片用于形態(tài)學定量分析，每片隨機選取10個正切的腎小球，用多功能真彩色病理圖像分析系統(tǒng)進行分析，測定腎小球直徑和系膜區(qū)密度（系膜區(qū)面積/腎小球面積）。電鏡標本采用斷面寬度法測定腎小球基底膜（GBM）厚度。每組隨機取30條GBM，每條隨機取10個點測量厚度，以平均值表示該組GBM厚度。1.4.2免疫組化按試劑盒操作步驟，行免疫組化染色。PKC,TGF-β1.5質(zhì)譜分析技術采用美國菲根LCQDeltaXT質(zhì)子譜分析儀，抽取血透病人透析后廢水（病人未使用羥苯磺酸鈣），加入羥苯磺酸鈣原粉，由專業(yè)技術人員分析質(zhì)譜情況。1.6統(tǒng)計分析所有實驗數(shù)據(jù)以2結果2.1一般情況下C和D組大鼠實驗期間均出現(xiàn)多飲、多食、多尿及糖尿，明顯高于A和B組。2.2各組尿素氮的比較C和D組上述指標較A和B組明顯升高，C和D組間血肌酐差異非常顯著（P<0.01）、尿素氮差異顯著（P<0.05）,D組較C組明顯降低。C組和D組間的尿蛋白、血管緊張素II、尿量、腎重/體重、肌酐清除率無差異。A和B組間上述指標無顯著差異。見表1。2.3苯磺酸鈣對pmc、tgf-h的影響C和D組PKC,TGF-β2.4病理改變PASM染色光鏡顯示D組系膜區(qū)較C組明顯縮?。≒<0.05）。電鏡觀察到D組基底膜增厚較同期C組減輕（P<0.01）。見表3。2.5從分子量和比一個世界在分子量為301,691,545,559和579處形成峰值，且繼續(xù)敲擊，691,545,559和579可分解，都在301處形成一峰值。經(jīng)分析，分子量為301處是肌酐和羥苯磺酸基團結合物。但尿素氮和羥苯磺酸基團沒有形成峰值。3糖尿病大鼠腎損害是否同步問題本實驗采用分次STZ腹腔注射加上高糖、高脂飲食建立2型糖尿病大鼠模型，大鼠血糖、尿蛋白水平、相對腎重明顯升高，表明本研究建立的DM模型腎臟病變與大多數(shù)文獻報道的大鼠DN的表現(xiàn)較為吻合如前所述，肌酐是人體內(nèi)肌肉酸的代謝產(chǎn)物，肌酸生成后由血液循環(huán)帶到肌肉組織從Ccr來看，實驗組較正常對照組高，表明DM大鼠腎臟損害處于高濾過期。但糖尿病羥苯磺酸鈣治療組較糖尿病對照組無差異，由此也可說明羥苯磺酸鈣降低血肌酐水平不是通過高濾過作用引起的。從病理結果來看，本實驗結果顯示，2型DM大鼠24周后尿素氮、肌酐、尿蛋白、腎重/體重比增加、腎小球基底膜增厚，以腎小球系膜區(qū)為主的細胞外基質(zhì)積聚，說明本型已出現(xiàn)DN的典型病理改通過質(zhì)子譜分析儀的檢測可以得知，羥苯磺酸鈣分子結構為，它離解成2個基團，肌酐可以和1個基團結合生成一種新的物質(zhì)，這種新的物質(zhì)結合較牢固，它還可以繼續(xù)與其它中小分子結合。羥苯磺酸鈣和肌酐的結合勢必導致血肌酐水平有一定程度下降。基團和尿素氮沒有結合，這也說明羥苯磺酸鈣降低肌酐作用較降低尿素氮作用更明