氧氟沙星系列藥物有關(guān)物質(zhì)控制探討

欄目化藥藥物評(píng)價(jià)＞＞化藥質(zhì)量控制欄目氧氟沙星系列藥物有關(guān)物質(zhì)控制探討張立雯成海平審評(píng)三部摘要】本文總結(jié)了國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中氧氟沙星、左氧氟沙星、鹽酸左氧氟沙星、乳酸左氧氟沙星、甲磺酸左氧氟沙星系列藥物的有關(guān)物質(zhì)控制方

法，分析了該類(lèi)藥物注冊(cè)申報(bào)中有關(guān)物質(zhì)控制存在的問(wèn)題，希望能為研發(fā)者提供幫助?！娟P(guān)鍵詞】氧氟沙星、左氧氟沙星、有關(guān)物質(zhì)、概況

氧氟沙星(Ofloxacin)為合成的第三代廣譜氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥，對(duì)大多數(shù)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌均有明顯的抑制作用。臨床上主要用于敏感菌所致的呼吸系統(tǒng)感染、泌尿生殖系統(tǒng)感染。氧氟沙星由日本第一制藥株式會(huì)社研發(fā)，于1985年在日本、德國(guó)上市，制劑為口服片劑、注射劑等。目前國(guó)內(nèi)已上市的氧氟沙星制劑有片劑、膠囊劑、顆粒劑、緩釋制劑、小針、葡萄糖注射液和氯化鈉注射液等。左氧氟沙星(Levofloxacin)為氧氟沙星的左旋體，具有抗菌譜廣、抗菌作用強(qiáng)的特點(diǎn)。日本第一制藥株式會(huì)社于1993年在日本上市銷(xiāo)售左氧氟沙星原料及片劑，并現(xiàn)已在英國(guó)、美國(guó)等多國(guó)上市。目前國(guó)內(nèi)上市的左氧氟沙星制劑主要有片劑、小針、葡萄糖注射液和滴眼劑等。另外，

國(guó)內(nèi)已批準(zhǔn)上市的左氧氟沙星還有其鹽酸鹽、乳酸鹽和甲磺酸鹽，三種加酸根的左氧氟沙星均有片劑、膠囊劑、注射制劑等多種劑型上市。二、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)控制方法比較氧氟沙星系列藥物的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)大多采用HPLC法，列表比較見(jiàn)表1。表1氧氟沙星系列藥物的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法與限度的比較

活性戰(zhàn)品名冇法.限度要求適用性試單個(gè)雜辰中國(guó)藥典動(dòng)"年版.氧氟華星■方法為0.2%0J%I氧氟沙星片方法血0.5%1.0%I氧氟進(jìn)星膠菠方法盤(pán)□5%1.0%I星眼育無(wú)有關(guān)物.茴項(xiàng)氧氟沙星氟化鈉注射液方法血0.2%0.5%I氧氟密星滴耳喩萬(wàn)話△1.0%2.0%I細(xì)氟詳星滴眼複■方法血L.Ci%2.0%I進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)率氟沙星■方法E0.3%0.5%—MMJT星注射液訪■法百—0.5%-—英國(guó)藥典2007年版筆氟沙星方法A（雜質(zhì)0.2%0.5%IITLC〔雜JRA/□.2%美國(guó)藥典加版氧亂濁星方法EDesfluoroofloxacin匚i.2%0.5%一頁(yè)他-3玄曰能藥周方1.3版筆氟從星?方迭A0.2%0.5%II左氧気沙星進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)古氧氟沙星方法C0.2%0.6%I左氧氟沙星片無(wú)有關(guān)物辰項(xiàng)

氟沙星WS.-(^-121)-20042鹽験左氧氟沙■星氯化鈉注射液■?方法D一1.0%IWS^QC-OISJ-JOO^Z鹽酸左氧氟沙星洼射液.方法D一1.0-%I中國(guó)藥典200拜版煩傑増補(bǔ)本鹽釀左氧氟沙星'?方法D一0.^I鹽酸左氧氟沙星片無(wú)有關(guān)籾質(zhì)項(xiàng)鹽醱左氧氟沙星膠棗無(wú)有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)乳酸左孚麗左氧氟沙昆洼肘液（小針）方法D—0.嗨I甲璜酸左氧氟沙星WS-7&3(X-689)^000申磺醸左氧氟沙昆方法F一0L孩IWS-439(^-367)-'2002Cl)甲磺酸左氧氟沙星注射液方法F—1W—WS-784(X-690)-2000甲隕釀左氧爲(wèi)0星片無(wú)有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)這些方法有很多相似的地方，如均采用ODS柱，色譜條件與含量測(cè)定色譜條件相同，按照主成分自身稀釋對(duì)照法定量等。但也有一些不同的地方值得關(guān)注，作者從以下三個(gè)方面來(lái)對(duì)這些國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法的不同之處進(jìn)行比較。1、流動(dòng)相按照流動(dòng)相的不同，作者將有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法分為六種，具體如下：方法A：醋酸銨高氯酸鈉溶液（取醋酸銨和高氯酸鈉，加水1300ml使溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.2）-乙腈（85:15）為流動(dòng)相，在294nm下檢測(cè)；方法B：略；方法C：略；方法D：己烷磺酸鈉［取己烷磺酸鈉，加磷酸鹽緩沖溶液（取磷酸二氫鉀，加水溶解并稀釋至1000ml，加0.05mol/L磷酸約500ml，使pH為2.4）］-甲醇（3:1）為流動(dòng)相，在293nm下檢測(cè)；方法E：磷酸緩沖溶液（溶解27.2磷酸二氫鉀在1000ml水中，用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.4）-乙腈（90：10）為流動(dòng)相，在294nm下檢測(cè)；方法F：己烷磺酸鈉［取己烷磺酸鈉，加磷酸鹽緩沖溶液（取磷酸二氫鉀，加水溶解并稀釋至1000ml，加0.05mol/L磷酸約500ml，使pH為2.4）］-甲醇（65:35）為流動(dòng)相，在230nm下檢測(cè)。六種流動(dòng)相的共同特點(diǎn)是：組成均是酸性緩沖溶液加有機(jī)溶劑（甲醇或乙腈）。方法A、B、E未加表面活性劑，方法C、D加有表面活性劑己烷磺酸鈉。除方法F在230nm下檢測(cè)外，其他方法均在294或293nm下檢測(cè)。2、主要雜質(zhì)英國(guó)藥典收載了氧氟沙星雜質(zhì)A、B、C、D、E、F共6個(gè)已知雜質(zhì)，依次分別為去哌嗪環(huán)、去羧基、去氟、氟取代位置不同、去甲基以及氮氧化的化合物物。英國(guó)藥典氧氟沙星原料藥采用TLC法控制雜質(zhì)A,采用HPLC法控制其他已知和未知雜質(zhì)。美國(guó)藥典重點(diǎn)關(guān)注了雜質(zhì)

desfluoroofloxacin,日本藥局方重點(diǎn)關(guān)注了ofloxacindemethylsubstanee,均與英國(guó)藥典的雜質(zhì)E相同，是氧氟沙星的去甲基化合物，該化合

物為氧氟沙星的主要降解產(chǎn)物,光照下極易產(chǎn)生。美國(guó)藥典給出了desfluoroofloxacin的相應(yīng)因子為1.13。中國(guó)藥典沒(méi)有明確已知雜質(zhì),但有關(guān)

物質(zhì)檢查時(shí)采用以下光照降解法進(jìn)行特殊系統(tǒng)適用性試驗(yàn),光照試驗(yàn)中產(chǎn)生的雜質(zhì)即為氧氟沙星、左氧氟沙星的主要雜質(zhì)。美國(guó)藥典中desfluoroofloxacin按加校正因子的主成分自身稀釋對(duì)照法定量，美國(guó)藥典氧氟沙星其他雜質(zhì)和其他國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中氧氟沙星或左氧氟沙星所有雜質(zhì)按不加校正因子的主成分自身稀釋對(duì)照法定量。有關(guān)物質(zhì)限度的要求詳見(jiàn)表1。3、特殊系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

氧氟沙星、左氧氟沙星及其鹽的含量測(cè)定和有關(guān)物質(zhì)檢查方法的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)除通常的進(jìn)樣精密度、記錄時(shí)間、理論塔板數(shù)等的要求外尚有一項(xiàng)較為特殊的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，其他標(biāo)準(zhǔn)方法采用丨法，日本藥局方采用II法，詳述如下：特殊系統(tǒng)適用性試驗(yàn)丨（光照降解法）：取供試品溶液于無(wú)色試管中，用日光燈（2500lux或3500lux）或紫外燈（254nm）照射1小時(shí)或3

小時(shí)或4小時(shí)，取此液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，相對(duì)保留時(shí)間約為主峰1.2處應(yīng)能檢測(cè)出色譜峰。特殊系統(tǒng)適用性試驗(yàn)11（雜質(zhì)對(duì)照品法）：氧氟沙星和雜質(zhì)E（ofloxacinimpurityECRS，英國(guó)藥典）或氧氟沙星的去甲基物（ofloxacindemethylsubstanee）分離度不得低于2.0或2.5。由于缺少雜質(zhì)對(duì)照品，國(guó)內(nèi)氧氟沙星系列藥物的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定系統(tǒng)試驗(yàn)常常是采用光照降解法。也正是因?yàn)槿鄙匐s質(zhì)對(duì)照品，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)才顯得尤為重要，是考察系統(tǒng)分離能力的重要指標(biāo)。另外，左氧氟沙星及其鹽的原料和制劑均需檢查右旋異構(gòu)體，方法基本相同，均是采用硫酸銅一L異亮氨酸溶液一甲醇或硫酸銅一D苯丙氨酸溶液－甲醇為手性流動(dòng)相檢測(cè)，限度要求不得過(guò)0.8%或1.0%。在此就不詳加討論。三、注冊(cè)申報(bào)中存在問(wèn)題與探討1、不重視系統(tǒng)適用性試驗(yàn)氧氟沙星系列藥物的特殊系統(tǒng)適用性試驗(yàn)常常被忽視，其實(shí)卻非常重要。若不做該項(xiàng)試驗(yàn)，就不能保證所采用的系統(tǒng)能將最難分離的相對(duì)保留時(shí)間1.2倍的色譜峰分離出來(lái)，就有可能得到錯(cuò)誤的結(jié)果。審評(píng)中曾發(fā)現(xiàn)申報(bào)鹽酸左氧氟沙星注射液的某廠家自測(cè)鹽酸左氧氟沙星含量較藥檢所檢驗(yàn)結(jié)果高約5％（含量測(cè)定色譜條件與有關(guān)物質(zhì)檢查致）。仔細(xì)審查其圖譜，發(fā)現(xiàn)未按鹽酸左氧氟沙星注射液的已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)用光照降解法進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，且色譜峰明顯拖尾。其測(cè)定結(jié)果偏高很可能是緊隨主峰之后的雜質(zhì)峰包裹進(jìn)了主峰。申請(qǐng)人往往會(huì)留意進(jìn)樣精密度、理論塔板數(shù)這樣的常規(guī)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，卻常常忽略了光照降解系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，此種現(xiàn)象在申報(bào)資料中占很大比例。究其原因，是試驗(yàn)人員沒(méi)有理解到此項(xiàng)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的目的和重要性，希望提醒申請(qǐng)人提高對(duì)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的重視程度。2、沒(méi)有雜質(zhì)個(gè)數(shù)與含量的詳細(xì)對(duì)比申報(bào)資料中雜質(zhì)對(duì)比研究通常的做法就是按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法檢驗(yàn)一下自制品和已上市對(duì)照藥品，若都在標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定范圍內(nèi)，就認(rèn)為自制品與已上市藥品質(zhì)量相當(dāng)。其實(shí)這樣的做法是對(duì)雜質(zhì)對(duì)比的目的和比什么不甚明了的表現(xiàn)。雜質(zhì)對(duì)比一方面要了解自己的產(chǎn)品與已上市品雜質(zhì)有哪些不同，另一方面要了解制劑過(guò)程中有沒(méi)有新產(chǎn)生的雜質(zhì)，若有新產(chǎn)生的雜質(zhì)，應(yīng)加以控制。所以比較就要落到列表對(duì)比雜質(zhì)的個(gè)數(shù)與含量上，泛泛地比較雜質(zhì)總量是不足以說(shuō)明問(wèn)題的。例如，申報(bào)鹽酸左氧氟沙星、乳酸左氧氟沙星的注射劑采用方法D測(cè)定的較為多見(jiàn)。在該色譜條件下，相對(duì)保留時(shí)間為0.23、0.43、1.2左右的雜質(zhì)峰較常見(jiàn)，其中相對(duì)保留時(shí)間為1.2的色譜峰是穩(wěn)定試驗(yàn)中含量有所增加的主要雜質(zhì)。另外，統(tǒng)計(jì)雜質(zhì)的個(gè)數(shù)時(shí)要注意"忽略限度"。英國(guó)藥典氧氟沙星有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下明確規(guī)定：Disregardanypeakwithanarealessthan0.1timestheareaoftheprincipalpeakinthechromatogramobtainedwithrefereneesolution(a),即忽略面積小于對(duì)照溶液主峰面積0.1倍的色譜峰0.02％）。中國(guó)藥典沒(méi)有這么詳細(xì)的規(guī)定，但從實(shí)際操作來(lái)看，為增強(qiáng)方法的嚴(yán)謹(jǐn)性和數(shù)據(jù)的可比性，建議申請(qǐng)人在統(tǒng)計(jì)雜質(zhì)個(gè)數(shù)時(shí)應(yīng)明確忽略限度。3、強(qiáng)力破壞試驗(yàn)降解程度不合適有關(guān)物質(zhì)檢查方法學(xué)驗(yàn)證的重要項(xiàng)目就是通過(guò)強(qiáng)力破壞試驗(yàn)考察方法的專(zhuān)屬性，但強(qiáng)力破壞試驗(yàn)破壞程度的掌握不盡合理。較容易出現(xiàn)的情況是破壞太輕微，酸、堿、氧化、光照破壞均幾乎未產(chǎn)生可檢測(cè)的雜質(zhì)，這樣就無(wú)法判斷所采用的色譜條件分離能力是否符合要求，破壞試驗(yàn)失去意義