農(nóng)產(chǎn)品中抗菌類藥物檢測方法的改進(jìn)

農(nóng)產(chǎn)品中抗菌類藥物檢測方法的改進(jìn)

由于它促進(jìn)生長和預(yù)防疾病，抗菌藥物被廣泛用于一體化動物、牲畜和飼料行業(yè)，包括一些抗生素。據(jù)統(tǒng)計(jì),2013年中國使用抗生素達(dá)16.2萬噸,其中52%為獸用抗生素。獸用抗生素中約40%用于畜禽養(yǎng)殖的抗菌促生長作用。由于抗菌類藥物的濫用現(xiàn)象比較嚴(yán)重,而且其休藥期的制定和執(zhí)行也比較困難,故而抗菌類藥物及其代謝物可能會或多或少地殘留在畜禽產(chǎn)品中。如果消費(fèi)者食用了抗菌類藥物殘留量超標(biāo)的畜禽產(chǎn)品,可能造成慢性中毒,引起機(jī)體損害,甚至癌變等健康風(fēng)險(xiǎn)。此外,抗菌類藥物在水體和環(huán)境中殘留,也會增加微生物耐藥性和生物多樣性改變的風(fēng)險(xiǎn)。市售生鮮動物性產(chǎn)品的抗菌類藥物殘留問題是一直是人們關(guān)注的焦點(diǎn)之一。雖然經(jīng)過持續(xù)的公眾科普,相關(guān)的問題也已經(jīng)有法規(guī)進(jìn)行規(guī)范,但是,關(guān)于抗菌類藥物濫用的相關(guān)報(bào)道對公眾的影響仍十分巨大,也對養(yǎng)殖業(yè)造成了沉重的打擊。為了消費(fèi)者食用動物源性食品的安全,提高我國動物源性食品抗生素監(jiān)測水平,使用同時(shí)檢測不同類型多藥物殘留的方法來篩查生鮮動物性產(chǎn)品中的抗菌類藥物,調(diào)查其使用情況就顯得十分重要和緊迫。1材料和方法1.1生鮮豬產(chǎn)品樣品的采集采集屠宰生豬組織樣品(以豬肝為主)情況見表1。為了保證采集樣品的廣度和代表性,樣品主要來源于屠宰環(huán)節(jié)和流通環(huán)節(jié),總共抽取生鮮豬產(chǎn)品樣品659份,其中豬肝655份,豬腎1份,豬肉3份。1.2基于高效液體質(zhì)量分析的多殘余檢測方法1.2.1.儀器、試劑與材料液相色譜串聯(lián)四級桿質(zhì)譜儀:ABSciexExionLCTM,購自美國Sciex公司;ABSciexTripleQuadTM4500質(zhì)譜儀,購自美國Sciex公司;N-EVAP-24型全自動氮吹儀,購自美國OA-SYS公司;旋渦混合器,購自德國IKA公司;PL602E型天平,購自梅特勒-托利多儀器有限公司;Sigma3-30KS離心機(jī),購自德國SIGMA公司;Milli-QIntegral3型超純水儀,購自美國密理博公司。乙腈(色譜純),購自美國默克公司;乙二胺四乙酸二鈉(分析純),購自西隴化工股份有限公司;疏水性PTFE針式濾器,購自上海安普科技股份有限公司;MAS-Q鹽包,購自安捷拉公司;乙二胺四乙酸二鈉鹽(Na1.2.2樣品的制備和保存取適量豬肝,絞碎并使均勻,-20℃以下冰箱中貯存?zhèn)溆谩?.2.3mas-q鹽包的制備準(zhǔn)確稱取勻漿試樣5.00g(精確至0.01g)于50mL具塞離心管中,加入1mLEDTA和9mL乙腈,渦旋30s,超聲15min,8000r/min冷凍離心5min。取5mL上清液,加入MAS-Q鹽包,振搖1min。8000r/min冷凍離心5min后取4mL上清液氮吹至近干,30%乙腈水溶液定容至1mL,過0.22μm聚醚砜濾膜,待測。1.3高效液鉻聯(lián)盟質(zhì)量分析1.3.1柱溫度和洗脫程序色譜柱:PhenomenexAnalyticalColumn,Kinetex2.6μmF5100?,50×3.0mm(P/N00B-4723-Y0)。柱溫:室溫;進(jìn)樣體積:5μL;梯度洗脫程序:(1)流動相:A相為水(含0.1%甲酸),B相為乙腈(含0.1%甲酸)。(2)流動相:A相為水(含0.1%甲酸),B相為甲醇。1.3.3質(zhì)量分析條件參數(shù)1.4標(biāo)準(zhǔn)工作曲線將混合標(biāo)準(zhǔn)溶液用空白樣品基質(zhì)配制成1.00、5.00、20.0、50.0、100、200、300μg/L濃度系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,供液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀測定,選取相關(guān)系數(shù)大于0.99的區(qū)間作為線性范圍。以空白豬肝為基質(zhì),選取適宜加標(biāo)濃度水平進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)和檢出限測定,記錄回收率范圍及計(jì)算各種藥物的檢出限。2結(jié)果2.1檢出限和回收率經(jīng)測定,大部分藥物在1.00~100μg/kg的濃度范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線的相關(guān)系數(shù)大于0.99。140種藥物的檢出限均在9.30μg/kg以下,且大部分檢出限在3.00μg/kg以下,大部分藥物回收率范圍在50%~130%之間。經(jīng)驗(yàn)證,本檢測方法具有較好的靈敏度與準(zhǔn)確度,而且快速、簡單,滿足在市售生鮮豬產(chǎn)品中抗菌類藥物使用情況調(diào)查中的應(yīng)用要求。2.2克氏原螯蝦抗菌藥物檢測建立了基于LC-MS/MS的多殘留的檢測方法,可以對多種抗菌類藥物進(jìn)行全面的定性定量,共完成659份樣品的檢測,檢測到金霉素、差向金霉素、土霉素、多西環(huán)素、磺胺二甲基嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲基異惡唑、磺胺氯噠嗪、磺胺嘧啶、甲氧卡氨嘧啶、培氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、氟甲喹、氯霉素、氟苯尼考、交沙霉素、林可霉素鹽酸鹽等19種抗菌類藥物。統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下表5所示,含有2種及以上抗菌類藥物的樣品共計(jì)33份樣品,占655份肝臟樣品總數(shù)的5.04%。2.3樣品及抗菌類藥物如表6所示,同時(shí)含有土霉素和多西環(huán)素的樣品有22份,同時(shí)含有磺胺二甲嘧啶和多西環(huán)素的樣品有3份,同時(shí)含有金霉素(差向金霉素)和磺胺二甲嘧啶的有3份。含有3種及以上抗菌類藥物的樣品共計(jì)5個(gè)。其中,同時(shí)含有3種抗菌類藥物的樣品為2個(gè),同時(shí)含有4種、5種和8種抗菌類藥物的樣品各1個(gè)。3生豬產(chǎn)品檢測分析(1)通過多殘留檢測方法-液質(zhì)聯(lián)用法檢測,發(fā)現(xiàn)市售生鮮豬產(chǎn)品存在多種抗菌類藥物同時(shí)使用的風(fēng)險(xiǎn),5.04%的樣品存在兩種及以上抗菌類藥物。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道(2)現(xiàn)有的檢測標(biāo)準(zhǔn)多為2009年之前制定,由于當(dāng)時(shí)的材料及儀器等條件限制,一次前處理只能檢測一類藥物,定性定量過程繁瑣復(fù)雜,耗時(shí)長,消耗了較多試劑及材料,無法滿足目前畜禽產(chǎn)品中存在的多類別藥物同時(shí)、快速檢測的要求。本檢測方法可以通過一次前處理方法,同時(shí)檢測多達(dá)140種的違禁藥物、獸藥及其代謝物殘留,相較于目前檢測技術(shù),前處理過程簡單易行,所需試劑量少,可減少對環(huán)境污染,還可以大大節(jié)約試劑耗材以及人力成本,提高檢測效率,適用于大批量篩查,為農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量與安全儲備技術(shù)力量。而且在實(shí)際應(yīng)用中,通過本檢測方法迅速發(fā)現(xiàn)生鮮豬產(chǎn)品中可能存在的風(fēng)險(xiǎn),大大提高了風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測水平