生肉中多環(huán)芳烴的檢測方法研究

生肉中多環(huán)芳烴的檢測方法研究

多環(huán)芳烴（pahs）是環(huán)境和食物中的一種嚴(yán)重污染物。1材料和方法1.1標(biāo)準(zhǔn)品及標(biāo)準(zhǔn)溶液試劑:環(huán)己烷、乙酸乙酯(TEDIA)、乙腈(Merck)為色譜純。生肉樣品為市售食品。儀器:凝膠滲透色譜儀(LCTech),高效液相色譜儀-熒光檢測器(Agilent1200系列),超聲波清洗儀(ElmaD-78224型),高速離心機(jī)(Sigma2-16KL型),渦旋振蕩器(IKA),電子分析天平(MettlerToledo,萬分之一)。標(biāo)準(zhǔn)品為14種歐盟優(yōu)控PAHs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(Dr.Ehrenstorfer公司):苯并(a)蒽、、5-甲基-1,2-苯并菲、苯并(b)熒蒽、苯并(j)熒蒽、苯并(k)熒蒽、苯并(a)芘、二苯并(a,h)蒽、苯并(g,h,i)苝、茚并(1,2,3-cd)芘、二苯并(a,e)芘、二苯并(a,h)芘、二苯并(a,i)芘、二苯并(a,l)芘,每種物質(zhì)為10μg/mL的乙腈溶液。苯并(c)芴標(biāo)準(zhǔn)溶液(Dr.Ehrenstorfer公司),10μg/mL的乙腈溶液。-18℃下保存。1.2方法1.2.1色譜-質(zhì)譜條件快速GPC凈化分離柱,填充劑:Bio-BeadsS-X3,填充量:25g,色譜柱規(guī)格:300mm×20mm。洗脫液:環(huán)己烷-乙酸乙酯(1∶1)。流速:4.5mL/min。進(jìn)樣量:5mL。收集16～43min流出組分,在線濃縮近干,1mL乙腈復(fù)溶后供HPLC測定。1.2.2流動相及洗脫程序色譜柱:PAHC18鍵合固定相色譜柱(Waters,250mm×4.6mm,5μm)。流動相:A溶劑為水,B溶劑為乙腈,梯度洗脫程序見表1。進(jìn)樣體積:20μL。柱溫35℃。熒光檢測器檢測,檢測波長見表2。1.2.3標(biāo)準(zhǔn)系列的制備標(biāo)準(zhǔn)系列工作液:吸取15種PAHs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(20.0ng/mL)0.10、0.25、0.5、1.0、2.5、5.0、10mL,乙腈定容至10mL,得到質(zhì)量濃度為0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0ng/mL標(biāo)準(zhǔn)系列。在設(shè)定色譜條件下,分別進(jìn)樣20μL,以濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸。1.3有機(jī)溶劑提取將生肉樣品可食部分勻漿。稱取2.00g勻漿,置于15mL具塞離心管中,加入10mL環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶劑(1∶1),渦旋振蕩30s,超聲提取15min,離心半徑9.5cm,8000r/min離心5min,吸取上清液約10mL置于GPC進(jìn)樣瓶中凈化濃縮。HPLC進(jìn)樣量20μL,記錄色譜圖,以保留時間定性,采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。2結(jié)果2.1柱溫條件下pahs分離效果采用PAHC18鍵合固定相(反相色譜模式)進(jìn)行分離?；诒狙芯繄F(tuán)隊(duì)之前研究考察20℃、25℃、30℃、35℃、40℃柱溫條件下15種PAHs分離效果。PAHs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(2.0ng/mL)不同溫度分別進(jìn)樣6次,保留時間隨溫度升高而減小,在35℃時具有最好的分離效果和進(jìn)樣精密度(RSD=2.1%)。因此設(shè)定柱溫為35℃。2.3相對分子質(zhì)量凝膠滲透色譜的柱填料為凝膠,是一種含有許多不同尺寸孔穴的表面惰性物質(zhì)。當(dāng)試樣中大小不同的組分分子隨流動相經(jīng)凝膠顆粒時,大分子受到空間位阻障礙不能進(jìn)入微孔,分子越小則進(jìn)入微孔越深,因而滯留時間不同。試樣中大分子的油脂、生物堿、聚合物等先淋洗出來,PAHs等相對分子質(zhì)量較小,后淋洗出。因此棄去0～16min流出組分2.4方法的線性范圍、檢出限和定量限本方法采用外標(biāo)法定量,按方法1.2.3配制標(biāo)準(zhǔn)系列,20μL進(jìn)樣,以峰面積A和對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)系列濃度C繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,15種PAHs在質(zhì)量濃度0.2～20.0ng/mL范圍內(nèi)[苯并(j)熒蒽:0.5～20.0ng/mL]相關(guān)性良好(r值均>0.998)。以信噪比S/N=3和S/N=10確定15種PAHs測定方法檢出限(LOD)為0.04～0.49μg/kg,定量限(LOQ)為0.12～1.51μg/kg。分別在生魚肉、雞肉、豬肉和牛肉4種基質(zhì)中加入0.5、2.0、10.0μg/kg3個水平混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,計(jì)算加標(biāo)回收率和RSD(n=6)?；厥章省SD范圍:魚肉中為61.4%～97.3%、0.4%～11.5%,雞肉中為62.5%～98.4%、0.5%～8.2%,豬肉中為63.5%～101.7%、0.6%～9.7%,牛肉中為61.0%～100.6%、2.0%～9.5%。2.5樣品測定結(jié)果將市售新鮮生肉樣品(10份)可食部分勻漿處理,按方法1.2.4進(jìn)行樣品測定,結(jié)果顯示,樣品多含有1～2種PAHs,為分子量較小的苯并(c)芴和苯并(a)蒽,含量均<1.0μg/kg。3pahs的同時檢測方法PAHs具有慢性毒性和致癌、致畸、致突變作用,或作為致癌過程中的增效劑本文采用凝膠滲透色譜凈化-定量濃縮與高效液相色譜熒光法檢測相結(jié)合技術(shù),建立了用于生肉中歐盟優(yōu)控的15種PAHs同時檢測方法。通過優(yōu)化提取過程、GPC凈化濃縮和HPLC分離條件,可以實(shí)現(xiàn)15種歐盟優(yōu)控PAHs的有效分離和準(zhǔn)確定量測定。本法與常規(guī)離線方法相比,減少了實(shí)驗(yàn)操作誤差,靈敏度高,重現(xiàn)性好,可以滿足定量分析的要求,對生肉樣品中PAHs的監(jiān)控有參考意義。2.2pahs提取溶劑的選擇PAHs具有親脂性,容易蓄積在脂肪組織內(nèi),隨著苯環(huán)數(shù)量的增加脂溶性越強(qiáng)。肉類樣品基質(zhì)復(fù)雜且富含脂肪,PAHs提取溶劑的選擇非常重要。比較環(huán)己烷、正己烷-丙酮(1∶1