款冬花質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的安全性分析

款冬花質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的安全性分析

款冬花是薔薇科植物的款冬花蕾。它被記錄在《神農(nóng)本草經(jīng)》中。它是一個(gè)普通的產(chǎn)品，在《中華人民共和國(guó)藥典》（以下簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》）的2015年版中。具有潤(rùn)肺、益氣、止咳、粘液等功效。長(zhǎng)期咳嗽、哮喘、粘液、疲勞和咳嗽?？疃ㄊ浅Ｓ弥兴幉?，為“古今方用溫肺治嗽之最”?！吨袊?guó)藥典》2015年版一部收載的以款冬花為組方藥材的有二母安嗽丸、川貝雪梨膏、止咳橘紅口服液、止咳橘紅丸、止嗽化痰丸、咳喘順丸、桔梗冬花片、潤(rùn)肺止嗽丸、清肺化痰丸、橘紅丸、橘紅片、橘紅膠囊、橘紅顆粒，以及小兒肺咳顆粒14種中成藥款冬花分布廣泛，主產(chǎn)于我國(guó)東北、華北、華東、西北地區(qū)，湖北、湖南、江西、貴州、云南、西藏等地也有分布，其他國(guó)家如印度、伊朗、巴基斯坦、俄羅斯、西歐和北非也有分布，常生于山谷濕地或林下1as的母核結(jié)構(gòu)PAs廣泛存在于多種植物中，據(jù)統(tǒng)計(jì)，世界上約有3%的有花植物即6000余種植物含有PAs。迄今為止，PAs已在13個(gè)科的植物中檢出，多數(shù)屬于紫草科、菊科千里光族和豆科PAs屬于酯類物質(zhì)，由千里光酸和千里光次堿構(gòu)成，其中千里光次堿的雙稠吡咯環(huán)結(jié)構(gòu)為PAs的母核結(jié)構(gòu)。一般情況下，千里光次堿基都在C-1位置連附1個(gè)羥甲基基團(tuán)，并在C-7位置連附1個(gè)羥基基團(tuán)。羥基基團(tuán)與千里光次酸酯化后，形成單酯、開(kāi)鏈二酯或巨環(huán)二酯生物堿。PAs主要是不飽和千里光次堿基的酯類物質(zhì)，根據(jù)堿基的不同，PAs還可分為倒千里光裂堿型（retronecine-type）、天芥菜定型（heliotridine-type）和奧索千里光裂堿型（otonecinetype），而前兩者在C-7位置上手性不同為非對(duì)映異構(gòu)體1.1冬季花卉中的pas1976年，澳大利亞科研人員目前報(bào)道的款冬花中的PAs有13種，除克式千里光寧堿外，還有千里光寧堿（2,senecionine)1.2胎鼠體內(nèi)收縮壓千里光寧堿是肝毒性大環(huán)吡咯烷啶生物堿，亦是款冬花中常見(jiàn)的生物堿之一，在菊科如千里光屬植物中廣泛存在。千里光寧堿所具有的肝毒性與干擾膽汁酸代謝穩(wěn)態(tài)有關(guān)。小鼠連續(xù)口服給藥40d后，肝內(nèi)膽汁酸淤積，?；悄懰?、牛磺脫氧膽酸和?；切苋パ跄懰崴椒謩e高出對(duì)照組8.1、6.0和7.9倍，結(jié)合膽汁酸和游離膽汁酸的總量也顯著增加千里光寧堿還能從母體血液通過(guò)胎盤(pán)屏障進(jìn)入胎兒體內(nèi)，導(dǎo)致胎兒的肝出現(xiàn)退化性病變。給孕鼠注射千里光堿，可致胎鼠的肝臟細(xì)胞質(zhì)形成空泡，細(xì)胞膨脹，細(xì)胞核消失，血管和竇狀膨脹充血。反復(fù)對(duì)孕鼠給藥會(huì)導(dǎo)致著床失敗，子宮內(nèi)和產(chǎn)后胎鼠死亡率增加倒千里光堿可抑制肝細(xì)胞損傷后的增殖再生。小鼠注射倒千里光堿且被切除肝臟后，肝細(xì)胞增殖量低，而對(duì)照組肝細(xì)胞正常增殖。倒千里光堿還具有胚胎毒性，在體外測(cè)定給藥大鼠母體肝臟、胎盤(pán)和胎肝細(xì)胞中倒千里光堿的基礎(chǔ)代謝活性，并研究其在胎鼠體內(nèi)的毒性和生物活性，發(fā)現(xiàn)倒千里光堿可通過(guò)滲透胎盤(pán)屏障進(jìn)入胎兒循環(huán)，引起胎兒生長(zhǎng)遲緩，以及胎盤(pán)和胎兒肝損傷根據(jù)世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)2017年公布的致癌物清單分類，款冬花中含有的毛果天芥菜堿屬于2B類致癌物（對(duì)人可能致癌），此類致癌物對(duì)人致癌性證據(jù)有限，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物致癌性證據(jù)并不充分；或?qū)θ祟愔掳┬宰C據(jù)不足，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物致癌性證據(jù)充分；克氏千里光堿、千里光寧堿、千里光菲寧堿和倒千里光堿屬于3類致癌物（對(duì)人類致癌性可疑，尚無(wú)充分的人體或動(dòng)物數(shù)據(jù)）?？疃ㄖ兴腜As具有明確的肝腎毒性，并可通過(guò)胎盤(pán)對(duì)胎兒造成較大傷害，成年人應(yīng)避免長(zhǎng)期服用，孕婦和幼兒應(yīng)謹(jǐn)慎使用。2冬季花卉中的pas檢驗(yàn)方法款冬花中PAs的檢測(cè)方法目前報(bào)道大多為液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，其他個(gè)別的有采用毛細(xì)管電泳法、高效液相色譜法和薄層色譜法等。2.1膠凝劑的富集和凈化由于款冬花中化學(xué)成分較為復(fù)雜，PAs含量較低，并且還存在大量的倍半萜、黃酮、咖啡?？鼘幩犷惓煞?，檢測(cè)前一般需要通過(guò)陽(yáng)離子固相萃取柱進(jìn)行富集、除雜后再進(jìn)行分析檢測(cè)。Mroczek等2.2分子印跡技術(shù)由于款冬花中的PAs含量較低，并且紫外吸收較弱，常規(guī)的液相色譜法難以直接進(jìn)行含量測(cè)定，采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)就成為檢測(cè)PAs的首選方法。PAs容易形成正電荷，LC-MS檢測(cè)時(shí)，在正離子模式下具有很高的靈敏度，檢測(cè)限可低于1ppb水平。Smyrska-Wieleba等Jiang等除檢測(cè)款冬花外，Chen等分子印跡技術(shù)是將某一特定的目標(biāo)分子作為模板，制備對(duì)該分子具有特異選擇定聚合物的過(guò)程，該技術(shù)具備特異識(shí)別性和構(gòu)效預(yù)定性等優(yōu)勢(shì)，分子印跡聚合物的吸附性良好，選擇性高，常用于目標(biāo)分子的識(shí)別、富集、分離和檢測(cè)液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)具有極高的靈敏度和較強(qiáng)的結(jié)構(gòu)鑒定能力，是目前測(cè)定PAs的主要手段，目前有多篇文獻(xiàn)報(bào)道。Q-TOF-MS由于能給出高分辨離子碎片，較適合用于結(jié)構(gòu)確證和未知成分的推測(cè)，強(qiáng)項(xiàng)在于定性研究，用于定量時(shí)準(zhǔn)確性和精密度不如QQQ-MS。目前款冬花中多篇文獻(xiàn)采用Q-TOF-MS測(cè)定其含量，其數(shù)據(jù)可靠性較低。QQQ-MS由于其較高的靈敏度和精密度，更加適合于款冬花中PAs的定量研究，但該方法也存在著儀器昂貴，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員技術(shù)水平要求較高等特點(diǎn)。2.3款冬花中pas的含量高效液相色譜法目前已經(jīng)極為普及，是中藥材檢測(cè)的主流手段，和液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)相比，具有操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確度高等特點(diǎn)?？疃ㄖ蠵As含量較高的成分克氏千里光堿和千里光寧堿分子結(jié)構(gòu)上具有共軛雙鍵，在紫外光燈220nm下具有最大吸收峰。Mroczek等2.4毛細(xì)管電泳法毛細(xì)管電泳又稱高效毛細(xì)管電泳（highperformancecapillaryelectrophoresis,HPCE），是一類以毛細(xì)管為分離通道，高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，依據(jù)樣品中各組分的淌度和分配行為的不同而實(shí)現(xiàn)分離的一種分離技術(shù)，具有操作簡(jiǎn)單、試樣量少、分離快速、成本低等優(yōu)點(diǎn)，并可和紫外、質(zhì)譜等串聯(lián)使用，提高微量成分檢測(cè)的靈敏度毛細(xì)管電泳法在PAs的檢測(cè)中具有一定的應(yīng)用前景，但和HPLC法和LC-MS法相比，存在著重現(xiàn)性較差、線性范圍較窄和靈敏度較低等不足，使其推廣使用受到較大限制。2.5pas的定性薄層色譜法成本低廉，操作簡(jiǎn)便，是中藥材檢驗(yàn)的傳統(tǒng)方法，可用于定性鑒別和有毒成分限量檢查等。早期的PAs檢測(cè)多用薄層色譜法，用碘化鉍鉀試劑進(jìn)行顯色。通過(guò)薄層掃描技術(shù)，Mroczek等3