生物化學(xué)與生物制藥技術(shù)省名師優(yōu)質(zhì)課賽課獲獎(jiǎng)?wù)n件市賽課一等獎(jiǎng)?wù)n件

PolymerasechainreactionprinciplePCR原理微課名稱：PCR技術(shù)課程名稱：生物化學(xué)與生物制藥技術(shù)主講：肖懷秋所屬單位：制藥與生物工程系PCR步驟PolymerasechainreactionproceduresPCR應(yīng)用與知識(shí)拓展Polymerasechainreactionapplicationsandexpendedknowledge第1頁(yè)P(yáng)CR應(yīng)用背景案例第2頁(yè)P(yáng)CR定義PCR，其英文全稱是polymerasechainreaction，即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，為DNA體外擴(kuò)增技術(shù)，是模擬DNA在體內(nèi)復(fù)制過程，用于放大擴(kuò)增特定DNA片段。PCR原理第3頁(yè)P(yáng)CR步驟1變性：雙鏈DNA在94℃變性為單鏈.2退火：反應(yīng)體系溫度降至50–65℃，維持20–40s。3延伸：DNA聚合酶基于模板DNA鏈堿基序列合成一條互補(bǔ)DNA鏈，延伸時(shí)間取決于DNA聚合酶和DNA所需擴(kuò)增片段長(zhǎng)度。第4頁(yè)P(yáng)CR示意圖PCR擴(kuò)增以2n級(jí)擴(kuò)增。230=1.07×109（十億）225=3.4×107（百萬）220=1.05×107（百萬）第5頁(yè)3PCR應(yīng)用（1)遺傳病產(chǎn)前診療用胎兒羊膜細(xì)胞，羊水或懷孕母體血液樣本可檢驗(yàn)胎兒性別及診療與性染色體關(guān)聯(lián)遺傳病。一些高發(fā)性遺傳病，如地中海貧血病、鐮刀形細(xì)胞貧血病、凝血因子缺乏病等均可經(jīng)過PCR技術(shù)進(jìn)行確診。糖尿病、高血脂癥等老年性疾病以及部分腫瘤也能夠經(jīng)過PCR進(jìn)行檢驗(yàn)。第6頁(yè)3PCR應(yīng)用

(2)致病病原體檢測(cè)當(dāng)前包含細(xì)菌、病毒、原蟲及寄生蟲、霉菌、立克次體、衣原體和支原體等大部分致病病原體均可經(jīng)過PCR進(jìn)行檢測(cè)?？勺鰡卧蚨嘣虏〔≡w檢測(cè)，且檢測(cè)靈敏度和特異性遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)免疫法，對(duì)難于培養(yǎng)病毒（如乙肝病毒），細(xì)菌（如結(jié)核桿菌）和原蟲（如梅毒螺旋體）等更為適合。第7頁(yè)3PCR應(yīng)用（3）癌基因檢測(cè)和診療當(dāng)前，臨床上已將PCR技術(shù)應(yīng)用于白血病殘留細(xì)胞定量（包含慢粒和急粒），肺癌中P53及Rb等抗癌基因失活，神經(jīng)質(zhì)瘤N-myc基因激活和表示等方面。第8頁(yè)3PCR應(yīng)用（4）法醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)如肌紅蛋白小衛(wèi)星基因，β-珠蛋白基因、ApoB基因等多肽性和重復(fù)次數(shù)差異都被應(yīng)用于法醫(yī)檢驗(yàn)和案情分析與判定，其靈敏度已到達(dá)一根頭發(fā)、一個(gè)細(xì)胞、一個(gè)精子取得個(gè)體DNA特征物理圖譜。第9頁(yè)3PCR應(yīng)用（5）動(dòng)植物檢疫經(jīng)過PCR技術(shù)可檢驗(yàn)進(jìn)出口岸人員、動(dòng)、植物（種畜、種籽）等是否攜帶烈性傳染?。ㄈ鏗IV、動(dòng)物病毒、植物病毒等）等致病病原體以及檢驗(yàn)食品或飼料等是否攜帶沙門氏菌等。第10頁(yè)3PCR應(yīng)用（6）基因工程中應(yīng)用如在轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物中檢驗(yàn)植入基因是否存在。PCR還可應(yīng)用于基因拼接、測(cè)序等領(lǐng)域。第11頁(yè)4知識(shí)拓展維基百科:Polymerasechainreaction

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1.PCR操作技術(shù)視頻

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