實訓指導(dǎo)滅菌

實訓指導(dǎo)實訓內(nèi)容高壓滅菌鍋的使用實訓目的與要求目的：（1）了解高壓蒸汽滅菌的基本原理及應(yīng)用范圍（2）熟練掌握高壓蒸汽滅菌的操作方法及注意事項要求：（1）每人均會使用高壓滅菌鍋（2）完成實訓報告一份實訓原理高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加熱滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時由于蒸氣不能溢出，而增加了滅菌器內(nèi)的壓力，從而使沸點增高，得到高于100℃的溫度，導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達到滅菌的目的。在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否完全極為重要，因為空氣的膨脹壓大于水蒸汽的膨脹壓，所以，當水蒸汽中含有空氣時，在同一壓力下，含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。實訓過程一、實訓材料與試劑LB培養(yǎng)基其他培養(yǎng)皿、試管、三角瓶、移液管，高壓蒸汽滅菌鍋滅菌鍋的構(gòu)造操作步驟加水將內(nèi)層鍋取出，再向外層鍋內(nèi)緩慢加入適量的水使水。（未加水時滅菌鍋會報警，當水加到適宜的水位后會停止報警）。裝鍋放回內(nèi)層鍋，并裝入待滅菌物品。加蓋將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層鍋的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。（本次使用的高壓滅菌鍋，當蓋上蓋子時會自動鎖住，直至消毒結(jié)束后才可打開，故在鎖蓋之前務(wù)必放入所有需要滅菌的物品）。加熱、排氣打開放氣閥，同時接通電源，進行加熱，待鍋內(nèi)水沸騰并有大量水蒸氣從排氣閥冒出時，維持3-5min以排除鍋內(nèi)的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。保溫保壓當鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間。出鍋滅菌所需的時間到后，關(guān)閉電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當壓力表降至“0”時，溫度下降到70攝氏度時，打開放氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。保養(yǎng)滅菌完畢取出物品后，將鍋內(nèi)余水倒出，以保持內(nèi)壁及內(nèi)膽干燥，蓋好鍋蓋。無菌檢查將取出的滅菌培養(yǎng)基放入37℃溫箱培養(yǎng)24h，經(jīng)檢查若無雜菌生長，即可待用。結(jié)果與分析（一）注意事項1．切勿忘記加水，同時加水量不可過少，以防滅菌鍋燒干而引起炸裂事故。2．壓力一定要降到“0”時，才能打開排氣閥，開蓋取物。否則就會因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染，甚至灼傷操作者。（二）思考題1．高壓蒸汽滅菌開始之前，為什么要將鍋內(nèi)冷空氣排盡？滅菌完畢后，為什么要待壓力降低為“0”時才