河南科技大學(xué)微生物工程學(xué)課件第二章4節(jié)保藏、PPT幻燈片

①菌種連續(xù)傳代導(dǎo)致自發(fā)突變或回復(fù)突變是菌種發(fā)生退化的直接原因。由于連續(xù)傳代使培養(yǎng)物經(jīng)常處于旺盛的生長狀態(tài)，且每次傳代時營養(yǎng)和環(huán)境等培養(yǎng)條件都是不斷變化的，與處于休眠狀態(tài)的培養(yǎng)物相比，細(xì)胞的自發(fā)突變率要高的多。菌株經(jīng)過連續(xù)傳代后，含突變基因的個體在數(shù)量上逐漸占優(yōu)勢，退化現(xiàn)象就逐漸顯露出來。1.菌種衰退的原因③菌種生長的條件要求沒有得到滿足，或是遇到不利的條件，或是失去某些需要的條件。②菌種保藏方法不當(dāng)。各種菌種的保藏法對阻止菌種變異的效果不盡相同，用效果較差的條件保藏菌種時，菌種就較易發(fā)生退化。保藏操作不當(dāng)也會影響保藏效果，會影響到菌種的變異。2.防止菌種衰退的措施（1）控制傳代次數(shù)（2）創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件（3）利用不易衰退的細(xì)胞傳代（4）采用有效的菌種保藏方法

盡量避免不必要的移種和傳代，并將必要的傳代降低到最低限度，以減少細(xì)胞分裂過程中所產(chǎn)生的自發(fā)突變幾率。

如：在赤霉素生產(chǎn)菌G.fujikuroi的培養(yǎng)基中，加入糖蜜、天冬酰胺、谷氨酰胺、5‘-核苷酸或甘露醇等豐富營養(yǎng)物時，有防止衰退效果。

對于放線菌和霉菌，菌絲細(xì)胞常含有幾個細(xì)胞核，因此用菌絲接種就易出現(xiàn)衰退，而孢子一般是單核的，用于接種就可避免這種現(xiàn)象。三、菌種的保藏

一個優(yōu)良的菌種被選育出來以后，要保持其生產(chǎn)性能的穩(wěn)定、不污染雜菌、不死亡，這就需要對菌株進行保藏。盡量減少傳代次數(shù)，防止菌種衰退。1.菌種保藏的原理菌種保藏主要是根據(jù)菌種的生理、生化特性，人工創(chuàng)造條件使菌體的代謝活動處于休眠狀態(tài)。保藏時，一般利用菌種的繁殖體和休眠體（孢子、芽胞等），創(chuàng)造最有利于休眠狀態(tài)的環(huán)境條件，如低溫、干燥、隔絕空氣或氧氣、缺乏營養(yǎng)物質(zhì)等，使菌體的代謝活性處于最低狀態(tài)，同時也應(yīng)考慮到經(jīng)濟、簡便方法。由于微生物種類繁多，代謝特點各異，對各種外界環(huán)境因素的適應(yīng)能力不一致，一個菌種選用何種方法保藏較好，要根據(jù)具體情況而定。2.菌種保藏方法7種常用菌種保藏方法的比較方法主要措施適宜菌種保藏期評價冰箱保藏法（斜面）低溫（4℃）各大類約1～6月簡便冰箱保藏法（半固體）低溫（4℃），避氧細(xì)菌，酵母菌約6～12月簡便石蠟油封藏法*低溫（4℃），阻氧各大類**約1～2年簡便甘油懸液保藏法－20℃－－70℃低溫，保護劑（20％甘油）各大類約10年較簡便砂土保藏法干燥，無營養(yǎng)產(chǎn)孢子的微生物約1～10年簡便有效冷凍干燥保藏法干燥、低溫、無氧，有保護劑各大類>5~15年繁而高效液氮保藏法超低溫（－196℃），有保護劑各大類>15年繁而高效*用斜面或半固體穿刺培養(yǎng)物均可，一般置于4℃下。**對于可利用石油作碳源的微生物不適宜。3.菌種保藏的注意事項菌種在保藏前所處的狀態(tài)菌種保藏所用的基質(zhì)操作過程對細(xì)胞結(jié)構(gòu)的損害4.主要的菌種保藏機構(gòu)①從事原始菌株的保藏，進行有關(guān)保藏的研究；②提供保藏菌種的品種目錄，定期（或不定期）出刊溝通信息；③提供菌種，促進微生物菌種的交流。作用：國內(nèi)

1979年7月，我國在國家科委和中國科學(xué)院主持下，召開了第一次全國菌種保藏工作會議，在會上成立了中國微生物菌種保藏管理委員會（ChinaCommitteeforCultureCollectionofMicroorganisms，CCCCM），下設(shè)六個菌種保藏管理中心：1、普通微生物菌種保藏管理中心真菌、細(xì)菌病毒中國科學(xué)院微生物研究所（北京）中國科學(xué)院武漢病毒研究所（武漢）2、農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所（北京）3、工業(yè)微生物菌種保藏管理中心輕工業(yè)部食品發(fā)酵工業(yè)科學(xué)研究所（北京）4、醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心真菌中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病研究所（南京）細(xì)菌衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所（北京）病毒中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒研究所（北京）5、抗生素菌種保藏管理中心中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院抗生素研究所（北京）四川抗生素工業(yè)研究所（成都）華北藥廠抗生素研究所（石家莊）新抗生素菌種生產(chǎn)用抗生素菌種6、獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)藥品監(jiān)察所研究所（北京）微生物菌種保藏機構(gòu)名稱和縮寫

中國縮寫名稱縮寫名稱ACCC中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心ISF中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所SH上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所CACC抗菌素菌種保藏管理中心IA中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院抗菌素研究所SIA四川抗菌素工業(yè)研究所CGMCC普通微生物菌種保藏管理中心AS中國科學(xué)院微生物研究所AS-IV中國科學(xué)院武漢病毒研究所CFCC林業(yè)微生物菌種保藏管理中心CAF中國林業(yè)科學(xué)院菌種保藏管理中心CICC工業(yè)微生物菌種保藏管理中心IFFI輕工業(yè)部食品發(fā)酵工業(yè)科學(xué)研究所CMCC醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心ID中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病研究所NICPB衛(wèi)生部藥品生物制品監(jiān)察所IV中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒研究所CVCC獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心CIVBP中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所YM云南省微生物研究所國外重要菌種保藏機構(gòu)1、ATCC：美國模式培養(yǎng)物（菌