規(guī)?；半u場(chǎng)產(chǎn)蛋期雞新城疫、禽流感免疫程序及效果評(píng)價(jià)

規(guī)?；半u場(chǎng)產(chǎn)蛋期雞新城疫、禽流感免疫程序及效果評(píng)價(jià)

新城病（nd）是由新城病病毒引起的雞和各種鳥類的急性、高度接觸性感染的。強(qiáng)毒感染易感家禽常呈敗血癥經(jīng)過,以呼吸困難、下痢、神經(jīng)機(jī)能紊亂、黏膜和漿膜出血等為特征。目前出現(xiàn)的雞新城疫發(fā)病率一般在10%~25%,死亡率在15%~35%,產(chǎn)蛋率下降30%左右,是危害養(yǎng)禽業(yè)的一種主要傳染病。禽流感(AI)則是由A型流感病毒引起的一種禽類急性、熱性、敗血性、高度接觸性傳染病,不僅給畜牧業(yè)造成了巨大的損失,而且給人民的身體健康帶來嚴(yán)重威脅。我國(guó)政府將其列為一類動(dòng)物疫病,家禽一旦感染高致病性禽流感病毒,死亡率為100%。2010年以來我國(guó)禽流感防控形勢(shì)平穩(wěn),但局部地區(qū)仍有疑似低致病性禽流感(主要是H9亞型)和非典型禽流感出現(xiàn)。目前,疫苗免疫接種和嚴(yán)格的生物安全措施相結(jié)合是預(yù)防和控制新城疫、禽流感發(fā)病的主要措施。筆者通過對(duì)洛陽(yáng)某規(guī)模化蛋雞場(chǎng)產(chǎn)蛋期雞群進(jìn)行跟蹤調(diào)查,定期進(jìn)行新城疫、禽流感(H5、H9亞型)抗體水平檢測(cè),對(duì)免疫程序及效果進(jìn)行分析評(píng)價(jià),為新城疫、禽流感的防控提供參考。1材料表面1.1試驗(yàn)設(shè)備電子天平、注射器、離心機(jī)、高壓鍋蒸氣滅菌鍋、pH計(jì)、冰箱、各種量程的移液器、恒溫箱、96孔V型反應(yīng)板等。1.2測(cè)試雞組挑選飼養(yǎng)管理規(guī)范、衛(wèi)生條件良好的洛陽(yáng)某規(guī)?；a(chǎn)蛋期雞場(chǎng)飼養(yǎng)規(guī)模1萬(wàn)羽、品種為羅斯褐的健康雞群。1.3lpbs液的配制3.8%檸檬酸鈉,阿氏液及pH值為7.2的0.01mol/LPBS液均按說明書配制;禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原、陽(yáng)性血清,禽流感病毒H9亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原、陽(yáng)性血清,新城疫血凝抑制試驗(yàn)抗原、陽(yáng)性血清,均購(gòu)自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司。1.4上清液及底層白砂糖的制備采集未免疫禽流感、新城疫等疫苗的3只健康公雞血液,加到含有抗凝劑的滅菌試管內(nèi)(按每毫升血液加入3.8%滅菌檸檬酸鈉0.2mL做抗凝劑),迅速混勻。如果當(dāng)時(shí)不用,可采血放入阿氏液內(nèi)(阿氏液2份,血液1份)于4℃冰箱可保存2周。再用pH值7.2的0.01mol/LPBS液2000r/min離心10min,反復(fù)離心洗滌3次,每次去掉上清液及上層白細(xì)胞;最后用該P(yáng)BS液配成濃度為1%的紅細(xì)胞懸液,4℃保存?zhèn)溆谩?方法2.1新城疫系和pcr的肌肉注射110~120日齡:新-支-減-流(新城疫、傳染性支氣管炎、減蛋綜合征、禽流感H9亞型)四聯(lián)滅活疫苗肌肉注射,0.5mL/只;2倍量肌肉注射新城疫Ⅰ系;禽流感H5亞型肌肉注射,0.5mL/只。160日齡:新城疫Ⅳ系5倍量飲水;新-支-流(H9亞型)油苗肌肉注射,0.5mL/只;禽流感H5亞型肌肉注射,0.5mL/只。以后每隔40~50d用新城疫Ⅳ系5倍量飲水免疫1次;每隔2.5~3.0個(gè)月用新-支-流(H9亞型)油苗肌肉注射,0.5mL/只;禽流感H5亞型肌肉注射,0.5mL/只,加強(qiáng)免疫1次。2.2血清離心質(zhì)的測(cè)定從2012年9月份雞群20周齡開始,每周進(jìn)行翅靜脈采血,每次隨機(jī)采集30份,將其編號(hào),待樣品凝固后自然析出血清或?qū)⒀簶悠?000~3000r/min離心10min,用移液器吸取血清加入滅菌的0.5mL離心管中。若需較長(zhǎng)時(shí)間保存血清,可置于-20℃冰箱。2.3pbs液制備用pH值7.2的0.01mol/LPBS液2mL溶解抗原,溶解后用0.5mL離心管分裝,-20℃凍存,隨用隨取,切勿反復(fù)凍融。2.4血清抗體水平禽流感病毒H5亞型和H9亞型HI抗體檢測(cè),按GB/T18936—2003高致病性禽流感診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法進(jìn)行血清抗體水平的測(cè)定;新城疫HI抗體檢測(cè)按照GB/T16550—2008新城疫診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法進(jìn)行測(cè)定。2.5陽(yáng)性對(duì)照孔效價(jià)以完全抑制4個(gè)血凝單位抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI效價(jià),只有陰性對(duì)照孔效價(jià)不大于2lb,陽(yáng)性對(duì)照孔效價(jià)誤差不超過1lb時(shí),并且所有陰、陽(yáng)血清都不發(fā)生自凝的情況下,HI試驗(yàn)結(jié)果才有效。按照農(nóng)業(yè)部相關(guān)標(biāo)準(zhǔn),禽流感HI效價(jià)≥4lb、新城疫HI效價(jià)≥5lb判為免疫合格。3結(jié)果與分析3.1抗體檢測(cè)時(shí)間每次隨機(jī)采集30份樣品,每周定期進(jìn)行新城疫、禽流感HI抗體檢測(cè),連續(xù)檢測(cè)40多周。在抗體檢測(cè)期間,抗體效價(jià)都能達(dá)到6lb以上,其HI抗體平均效價(jià)及抗體消長(zhǎng)規(guī)律見圖1。3.2抗體效價(jià)變化由圖1可知,蛋雞20~65周齡期間新城疫和禽流感的抗體效價(jià)一直保持比較平穩(wěn)的消長(zhǎng)曲線,由于經(jīng)過多次免疫接種,抗體均維持在較高水平;新城疫和H9亞型禽流感抗體效價(jià)一直維持在8~11lb之間,而H5亞型禽流感抗體效價(jià)相對(duì)偏低,但抗體效價(jià)都維持在6~9lb之間,抗體效價(jià)在免疫保護(hù)臨界值(4lb)以上。針對(duì)H5亞型禽流感使用重組禽流感H5亞型二價(jià)滅活疫苗(H5N1,Re-4株+Re-6株)進(jìn)行免疫,H5亞型禽流感Re-4和Re-6效價(jià)消長(zhǎng)規(guī)律基本相同。H5亞型禽流感和H9亞型禽流感免疫次數(shù)相同,但是35周之后禽流感H5亞型抗體效價(jià)比H9亞型低2lb左右。4新城疫和致病性抗體效價(jià)HA、HI試驗(yàn)是目前我國(guó)各地對(duì)新城疫、禽流感等疾病進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查、疫病診斷、防疫監(jiān)測(cè)、免疫程序制定等工作的主要依據(jù),該方法具有經(jīng)濟(jì)、快速、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。但是抗原配制、操作不規(guī)范等因素也會(huì)影響到試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。雞群健康狀況是影響疫苗免疫效果的重要因素,當(dāng)雞群感染某些疾病,尤其是一些免疫抑制性疾病如雞傳染性法氏囊和雞傳染性貧血等疫病時(shí),會(huì)嚴(yán)重干擾疫苗的免疫效果?？贵w檢測(cè)結(jié)果顯示,雞群從20周齡一直到65周齡(淘汰),新城疫和禽流感抗體效價(jià)均維持在抗體保護(hù)臨界值以上,且抗體消長(zhǎng)規(guī)律平穩(wěn);該雞場(chǎng)未見新城疫和禽流感疫情,這也得益于嚴(yán)格規(guī)范的管理方案、科學(xué)的生物安全措施。一般認(rèn)為成年雞HI效價(jià)在6lb時(shí)便需進(jìn)行免疫接種;而有條件的雞場(chǎng),可以半個(gè)月或一個(gè)月隨機(jī)采集樣品做一次抗體檢測(cè),只要開產(chǎn)雞ND、AI的抗體低于8lb就進(jìn)行疫苗的加強(qiáng)防疫;相比之下,H5亞型禽流感抗體效價(jià)偏低,從免疫程序上應(yīng)適當(dāng)增加H5的免疫密度,通過不斷地進(jìn)行抗體檢測(cè),可對(duì)免疫程序進(jìn)行科學(xué)的評(píng)估和調(diào)整,減少不必要的免疫應(yīng)激和資金投入,不僅可以提高雞群的生產(chǎn)性能,還能增加經(jīng)濟(jì)效益。由于新城疫疫苗的開發(fā)以及免疫方案的改進(jìn),近年來新城疫沒有大規(guī)模的流行,臨床上多以非典型的形式出現(xiàn),且常與大腸桿菌、沙門菌、傳染性支氣管炎等混合或繼發(fā)感染,給該病的診斷帶來困難,在臨診時(shí)需詳細(xì)收集資料,進(jìn)行綜合分析,予以鑒別。由于對(duì)禽流感普遍采取強(qiáng)制免疫措施,臨床癥狀逐漸表現(xiàn)出非典型的特點(diǎn),且毒