電針對(duì)大鼠下丘腦室旁核區(qū)單胺類(lèi)遞質(zhì)的影響

電針對(duì)大鼠下丘腦室旁核區(qū)單胺類(lèi)遞質(zhì)的影響

經(jīng)絡(luò)與腸道的關(guān)系是經(jīng)絡(luò)理論的核心。我們于21世紀(jì)初應(yīng)用基因芯片技術(shù)研究了針刺心經(jīng)、肺經(jīng)、小腸經(jīng)干預(yù)急性心肌缺血模型大鼠的下丘腦差異表達(dá)基因,結(jié)果發(fā)現(xiàn)大量的單胺類(lèi)相關(guān)基因發(fā)生了差異性的表達(dá),基于此我們提出了經(jīng)脈臟腑相關(guān)與腦聯(lián)系的研究是中西醫(yī)學(xué)理論結(jié)合的突破口,進(jìn)一步從下丘腦的單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量的角度研究針刺不同經(jīng)穴的相對(duì)特異性物質(zhì)基礎(chǔ)。研究表明,下丘腦可通過(guò)對(duì)自主神經(jīng)功能、血管加壓素合成和釋放、壓力感受器反射等的調(diào)控來(lái)調(diào)節(jié)心血管功能活動(dòng)。其中諸多神經(jīng)遞質(zhì)均可通過(guò)改變自主神經(jīng)活動(dòng)引起心血管反應(yīng)。本研究通過(guò)觀察電針手厥陰心包經(jīng)絡(luò)穴“內(nèi)關(guān)”、手少陰心經(jīng)原穴“神門(mén)”、手太陰肺經(jīng)原穴“太淵”對(duì)心肌缺血模型大鼠下丘腦室旁核區(qū)單胺類(lèi)遞質(zhì)含量的影響,探究下丘腦在針刺抗心肌缺血過(guò)程中的作用機(jī)制及其物質(zhì)基礎(chǔ),研究經(jīng)脈臟腑相關(guān)與腦聯(lián)系的中樞調(diào)控機(jī)制,以及電針不同經(jīng)穴效應(yīng)相對(duì)特異性的中樞物質(zhì)基礎(chǔ)。1材料和方法1.1動(dòng)物分組及飼養(yǎng)普通級(jí)健康成年SD大鼠80只,雌雄各半,體質(zhì)量(200±20)g,由南京安立默實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。室溫環(huán)境下普食喂養(yǎng)1周。按照隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)選擇10只大鼠作為正常對(duì)照組(簡(jiǎn)稱(chēng)正常組),其余大鼠進(jìn)行模型復(fù)制。將模型復(fù)制成功的大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組(簡(jiǎn)稱(chēng)模型組)、電針神門(mén)組(簡(jiǎn)稱(chēng)神門(mén)組)、電針內(nèi)關(guān)組(簡(jiǎn)稱(chēng)內(nèi)關(guān)組)、電針太淵組(簡(jiǎn)稱(chēng)太淵組),每組10只,剩余模型大鼠同等條件下飼養(yǎng)備用。存在心電圖異常、實(shí)驗(yàn)手術(shù)或記錄失敗、麻醉過(guò)量死亡、機(jī)能狀態(tài)不良或術(shù)中死亡者未列為實(shí)驗(yàn)分析對(duì)象。對(duì)動(dòng)物的處置遵守我國(guó)科技部頒布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)》規(guī)定。1.2儀器、試劑和儀器去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羥色胺(5-HT)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(RB公司)。Powerlab16導(dǎo)生理記錄儀(澳大利亞ADinstruments公司);PCE-A型程控電針治療儀(安徽天恒科技實(shí)業(yè)有限公司);ALLEGRA64R冷凍離心機(jī)(美國(guó)BECKMAN公司);ELX800UV酶標(biāo)儀(美國(guó)BIOTEK公司);針灸針(蘇州醫(yī)療用品廠)。1.3心肌缺血模型的建立模型復(fù)制前記錄正常心電圖,心電異常者剔除不用。參考本實(shí)驗(yàn)室對(duì)大鼠心肌缺血模型的改良方法進(jìn)行模型復(fù)制。大鼠乙醚麻醉后固定于手術(shù)臺(tái)上,左胸部備皮,常規(guī)消毒。沿胸骨左緣剪開(kāi)皮膚,用止血鉗游離大鼠左側(cè)的胸大肌,暴露左側(cè)第2、3、4肋,以便清晰地觀察到心臟暗影,用彎頭止血鉗沿胸骨左緣3、4肋間撐開(kāi)肋骨,擠出心臟,充分暴露心臟及其表面的血管,用4/0醫(yī)用縫合線(xiàn)在冠狀動(dòng)脈左前降支下1/3處快速結(jié)扎,心臟復(fù)位后立刻關(guān)閉胸腔。根據(jù)模型復(fù)制前后心電圖變化情況及眶下靜脈血血清酶學(xué)指標(biāo)肌酸激酶(creatinekinase,CK)和乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase,LDH)的改變?cè)u(píng)判心肌缺血模型復(fù)制成功與否。心肌血清酶學(xué)指標(biāo)檢測(cè)采用黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng),利用比色法測(cè)定吸光度,嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行,使用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定CK、LDH活性。1.4針內(nèi)推流式電針儀分別消毒各電針組大鼠左側(cè)“內(nèi)關(guān)”“神門(mén)”和“太淵”穴區(qū),用不銹鋼28號(hào)13mm長(zhǎng)毫針直刺入穴位,針柄連接PCE-A型程控電針治療儀輸出端,參考電極置于穴區(qū)沿經(jīng)脈縱向近端約2mm處,接電針儀的另一輸出端。刺激電壓5V,電流強(qiáng)度1.1mA,頻率為2Hz,波寬300ms,正負(fù)向交替方波刺激,每次刺激10min,造模后第3天開(kāi)始針刺治療,1次/d,電針3d。模型組大鼠只固定不電針。1.5動(dòng)物腦剖面準(zhǔn)備針刺治療結(jié)束后在大鼠麻醉狀態(tài)下活體取材,距第1次針刺時(shí)間50h左右。用10%水合氯醛(1mL/kg)腹腔麻醉所有大鼠,開(kāi)顱取出完整腦組織,參照Paxinos和Watson大鼠腦解剖圖譜,在冰上用無(wú)菌刀片切取下丘腦室旁核區(qū)2mm×2mm×2mm腦組織(經(jīng)病理證實(shí)此腦區(qū)包含室旁核),稱(chēng)重后立即標(biāo)記置于3mL凍存管,液氮冷藏保存,每只動(dòng)物取材時(shí)間不超過(guò)2min。采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)NE、DA和5-HT的含量。1.6數(shù)據(jù)分析工具統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)結(jié)果均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(xˉ±s)(xˉ±s)表示,使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。各組間均數(shù)比較采用單因素方差分析,組間均數(shù)的兩兩比較采用最小顯著法(LSD),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。2結(jié)果2.1大鼠心電圖結(jié)果通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)心電圖和血清CK、LDH活性改變判斷心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ蛷?fù)制是否成功。與正常組大鼠心電圖相比,造模后大鼠心電圖出現(xiàn)了明顯改變,可見(jiàn)T波倒置,J點(diǎn)抬高(見(jiàn)圖1);由圖2可知,模型大鼠血清CK和LDH較正常大鼠顯著升高(P<0.01)。提示心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ蛷?fù)制成功。2.2各組內(nèi)關(guān)組、神門(mén)組電針后dna、da、5-ht含量比較見(jiàn)圖3。與正常組相比,模型組大鼠下丘腦室旁核區(qū)內(nèi)單胺類(lèi)遞質(zhì)(NE、DA、5-HT)含量明顯下降(P<0.01)。電針后,與模型組相比,內(nèi)關(guān)組、神門(mén)組NE、DA、5-HT含量均明顯升高(P<0.01);太淵組NE含量顯著升高(P<0.05),DA、5-HT含量與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。提示電針“神門(mén)”穴、“內(nèi)關(guān)”穴皆可促進(jìn)心肌缺血大鼠下丘腦室旁核區(qū)單胺類(lèi)遞質(zhì)含量恢復(fù),且二者的效果明顯優(yōu)于電針“太淵”穴。3針刺經(jīng)穴對(duì)心肌缺血的再灌注中樞單胺類(lèi)遞質(zhì)與心血管活動(dòng)有著極為密切的聯(lián)系。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),NE作用于中樞α受體可引起血壓下降和心率減慢,興奮中樞β受體則出現(xiàn)相反的效應(yīng)。劉俊嶺等采用家兔急性心肌缺血模型,胸髓蛛網(wǎng)膜下腔微量注射N(xiāo)E,發(fā)現(xiàn)NE能明顯加強(qiáng)電針“內(nèi)關(guān)”穴促進(jìn)心電圖ST段、T波恢復(fù)的作用。李氏等實(shí)驗(yàn)證實(shí)NE參與電針促急性心肌缺血恢復(fù)作用,電針可能通過(guò)興奮α受體、抑制β受體起作用。陳東風(fēng)等人發(fā)現(xiàn)電針“內(nèi)關(guān)”穴能加快急性心肌缺血ST段的恢復(fù),側(cè)腦室注射多巴胺受體阻滯劑氟哌啶醇可促進(jìn)電針“內(nèi)關(guān)”對(duì)心肌缺血的恢復(fù),提示中樞多巴胺受體參與電針“內(nèi)關(guān)”穴減輕心肌缺血損傷的作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,針刺不同經(jīng)穴對(duì)心肌缺血大鼠下丘腦室旁核區(qū)單胺類(lèi)遞質(zhì)含量變化的影響不同。電針“神門(mén)”穴、“內(nèi)關(guān)”穴可促進(jìn)下丘腦室旁核區(qū)NE、DA、5-HT的釋放。電針手少陰心經(jīng)穴“神門(mén)”、手厥陰心包經(jīng)穴“內(nèi)關(guān)”促進(jìn)下丘腦室旁核區(qū)單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量恢復(fù)的作用明顯優(yōu)于手太陰肺經(jīng)穴“太淵”。下丘腦室旁核區(qū)的單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)NE、DA、5-HT是電針抗心肌缺血損傷的中樞調(diào)控物質(zhì)。近年來(lái),關(guān)于針刺效應(yīng)與下丘腦不同核團(tuán)間關(guān)系的研究已有了大量的報(bào)道。鐘輝等的研究表明,電針兔“內(nèi)關(guān)”穴可以顯著抑制室性期前收縮(HVE);損毀弓狀核區(qū)后,電針“內(nèi)關(guān)”穴抑制HVE的效應(yīng)消失;在弓狀核區(qū)微量注射嗎啡能抑制HVE的發(fā)生;而在弓狀核區(qū)微量注射納絡(luò)酮后,電針“內(nèi)關(guān)”穴抑制HVE的效應(yīng)出現(xiàn)反轉(zhuǎn)。蔡玉穎等證實(shí)了電針“曲池”“足三里”等穴對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠HPA軸相關(guān)激素的調(diào)節(jié)具有相對(duì)特異性,電針經(jīng)穴通過(guò)調(diào)控腦缺血再灌注損傷大鼠HPA軸功能紊亂起到腦保護(hù)作用。王俊英等觀察了電針“足三里”-“陽(yáng)陵泉”鎮(zhèn)痛的累積效應(yīng),及大鼠下丘腦和海馬細(xì)胞蛋白激酶A(PKA)活性的變化,發(fā)現(xiàn)電針鎮(zhèn)痛有累積作用,其累積效應(yīng)可能與下丘腦、海馬