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文檔簡介
顯微鏡的成像原理顯微鏡和放大鏡起著同樣的作用,就是把近處的微小物體成一放大的像,以供人眼觀察。只是顯微鏡比放大鏡可以具有更高的放大率而已。 圖2是物體被顯微鏡成像的原理圖。圖中為方便計,把物鏡L1和目鏡12均以單塊透鏡表示。物體AB位于物鏡前方,離開物鏡的距離大于物鏡的焦距,但小于兩倍物鏡焦距。所以,它經(jīng)物鏡以后,必然形成一個倒立的放大的實像A'B'。A'B'位于目鏡的物方焦點F2上,或者在很靠近F2的位置上。再經(jīng)目鏡放大為虛像A''B''后供眼睛觀察。虛像A''B''的位置取決于F2和A'B'之間的距離,可以在無限遠處(當A'B'位于F2上時),也可以在觀察者的明視距離處(當A'B'在圖中焦點F2之右邊時)。目鏡的作用與放大鏡一樣。所不同的只是眼睛通過目鏡所看到的不是物體本身,而是物體被物鏡所成的已經(jīng)放大了一次的像。顯微鏡的重要光學技術參數(shù)在鏡檢時,人們總是希望能清晰而明亮的理想圖象,這就需要顯微鏡的各項光學技術參數(shù)達到一定的標準,并且要求在使用時,必須根據(jù)鏡檢的目的和實際情況來協(xié)調各參數(shù)的關系。只有這樣,才能充分發(fā)揮顯微鏡應有的性能,得到滿意的鏡檢效果。顯微鏡的光學技術參數(shù)包括:數(shù)值孔徑、分辨率、放大率、焦深、視場寬度、覆蓋差、工作距離等等。這些參數(shù)并不都是越高越好,它們之間是相互聯(lián)系又相互制約的,在使用時,應根據(jù)鏡檢的目的和實際情況來協(xié)調參數(shù)間的關系,但應以保證分辨率為準。1.數(shù)值孔徑數(shù)值孔徑簡寫NA,數(shù)值孔徑是物鏡和聚光鏡的主要技術參數(shù),是判斷兩者(尤其對物鏡而言)性能高低的重要標志。其數(shù)值的大小,分別標刻在物鏡和聚光鏡的外殼上。 數(shù)值孔徑(NA)是物鏡前透鏡與被檢物體之間介質的折射率(n)和孔徑角(u)半數(shù)的正弦之乘積。用公式表示如下:NA=nsinu/2孔徑角又稱〃鏡口角〃,是物鏡光軸上的物體點與物鏡前透鏡的有效直徑所形成的角度??讖浇窃酱?,進入物鏡的光通亮就越大,它與物鏡的有效直徑成正比,與焦點的距離成反比。 顯微鏡觀察時,若想增大NA值,孔徑角是無法增大的,唯一的辦法是增大介質的折射率n值?;谶@一原理,就產(chǎn)生了水浸物鏡和油浸物鏡,因介質的折射率n值大于1,NA值就能大于1。數(shù)值孔徑最大值為1.4,這個數(shù)值在理論上和技術上都達到了極限。目前,有用折射率高的漠萘作介質,漠萘的折射率為1.66,所以NA值可大于1.4。這里必須指出,為了充分發(fā)揮物鏡數(shù)值孔徑的作用,在觀察時,聚光鏡的NA值應等于或略大于物鏡的NA值。數(shù)值孔徑與其他技術參數(shù)有著密切的關系,它幾乎決定和影響著其他各項技術參數(shù)。它與分辨率成正比,與放大率成正比,與焦深成反比,NA值增大,視場寬度與工作距離都會相應地變小。
2?分辨率顯微鏡的分辨率是指能被顯微鏡清晰區(qū)分的兩個物點的最小間距,又稱〃鑒別率〃。其計算公式是。二入/NA式中。為最小分辨距離;入為光線的波長;NA為物鏡的數(shù)值孔徑??梢娢镧R的分辨率是由物鏡的NA值與照明光源的波長兩個因素決定。NA值越大,照明光線波長越短,則。值越小,分辨率就越高。要提高分辨率,即減小。值,可采取以下措施(1)降低波長入值,使用短波長光源。(2)增大介質n值以提高NA值(NA=nsinu/2)。(3)增大孔徑角u值以提高NA值。(4)增加明暗反差。3.放大率和有效放大率由于經(jīng)過物鏡和目鏡的兩次放大,所以顯微鏡總的放大率r應該是物鏡放大率p和目鏡放大率r1的乘積:r=6r1顯然,和放大鏡相比,顯微鏡可以具有高得多的放大率,并且通過調換不同放大率的物鏡和目鏡,能夠方便地改變顯微鏡的放大率。 放大率也是顯,此時即使過度地增大放大清的圖像,稱為無效放大倍足,則顯微鏡雖已具備分辨視見。所以為了充分發(fā)揮顯大倍率合理匹配。微鏡的重要參數(shù),但也不能盲目相信放大率越高越好。顯微鏡放大倍率的極限即有效放大倍率。分辨率和放大倍率是兩個不同的但又互有聯(lián)系的概念。有關系式:500NA<r<1000NA當選用的物鏡數(shù)值孔徑不夠大,即分辨率不夠高時,顯微鏡不能分清物體的微細結構倍率,得到的也只能是一個輪廓雖大但細節(jié)不率。反之如果分辨率已滿足要求而放大倍率不的能力,但因圖像太小而仍然不能被人眼清晰微鏡的分辨能力,應使數(shù)值孔徑與顯微鏡總放,此時即使過度地增大放大清的圖像,稱為無效放大倍足,則顯微鏡雖已具備分辨視見。所以為了充分發(fā)揮顯大倍率合理匹配。4?焦深焦深為焦點深度的簡稱,即在使用顯微鏡時,當焦點對準某一物體時,不僅位于該點平面上的各點都可以看清楚,而且在此平面的上下一定厚度內,也能看得清楚,這個清楚部分的厚度就是焦深。焦深大,可以看到被檢物體的全層,而焦深小,則只能看到被檢物體的一薄層,焦深與其他技術參數(shù)有以下關系:焦深與總放大倍數(shù)及物鏡的數(shù)值孔徑成反比。焦深大,分辨率降低。 由于低倍物鏡的景深較大,所以在低倍物鏡照相時造成困難。在顯微照相時將詳細介紹。5?視場直徑(FieldOfView)觀察顯微鏡時,所看到的明亮的圓形范圍叫視場,它的大小是由目鏡里的視場光闌決定的。視場直徑也稱視場寬度,是指在顯微鏡下看到的圓形視場內所能容納被檢物體的實際范圍。視場直徑愈大,愈便于觀察。有公式F=FN/p式中F:視場直徑,F(xiàn)N:視場數(shù)(FieldNumber,簡寫為FN,標刻在目鏡的鏡筒外側),p:物鏡放大率。由公式可看出:視場直徑與視場數(shù)成正比。增大物鏡的倍數(shù),則視場直徑減小。因此,若在低倍鏡下可以看到被檢物體的全貌,而換成高倍物鏡,就只能看到被檢物體的很小一部份。
6?覆蓋差顯微鏡的光學系統(tǒng)也包括蓋玻片在內。由于蓋玻片的厚度不標準,光線從蓋玻片進入空氣產(chǎn)生折射后的光路發(fā)生了改變,從而產(chǎn)生了相差,這就是覆蓋差。覆蓋差的產(chǎn)生影響了顯微鏡的成響質量。 國
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