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認(rèn)證類型：個(gè)人認(rèn)證

認(rèn)證主體：王**（實(shí)名認(rèn)證）

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IP屬地：湖北 上傳時(shí)間：2023-10-09 格式：DOC 頁(yè)數(shù)：5 大小：34.54KB 積分：6 舉報(bào) 版權(quán)申訴

小鼠非酒精性脂肪肝實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒⒌淖罴扬暳吓浔确桨改康奶接懡⑿∈蠓蔷凭灾靖蝿?dòng)物模型的最佳飼料配比方案，為進(jìn)一步開展脂肪肝及其治療的相關(guān)研究提供有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。方法80只KM小鼠隨機(jī)分為4組，甲、乙、丙為模型組，丁組為對(duì)照組。模型組給予不同梯度的高脂飲食，對(duì)照組給予正常飲食。在造模后每1周分別取模型組動(dòng)物各5只處死，觀察其病理模型形成情況，做血液指標(biāo)檢測(cè)及病理切片；采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)生化指標(biāo)；取肝臟，制肝勻漿，測(cè)定LTG、LTC。結(jié)果造模過(guò)程中，模型組動(dòng)物乙組造模后體重增長(zhǎng)較正常對(duì)照組及模型組甲組、丙組迅速。至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，甲組體重較正常組平均重7.62%，乙組體重較正常組平均重16.76%，丙組體重較正常組平均重11.14%，模型動(dòng)物體重及肝指數(shù)均較正常組顯著增加（P＜0.01）。生化指標(biāo)檢測(cè)顯示模型組小鼠的TC、TG、ALT、AST、LDL-C、LTG、LTC水平，均有一定程度的降低（P＜0.01），HDL-C水平顯著升高（P＜0.01），其中乙組小鼠的變化幅度最大（P＜0.01）。在病理方面，造模組1周后乙組小鼠最早出現(xiàn)了輕度的肝脂肪變，造模2周乙組小鼠多呈中度脂肪變。造模4周乙組小鼠呈中重度的大泡性脂肪變。結(jié)論適當(dāng)?shù)母咧吣懝檀寂浔蕊嬍呈且环N快速有效的脂肪肝模型制作方法。標(biāo)簽：非酒精性脂肪性肝炎；動(dòng)物模型；肝指數(shù)；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)Non-alcoholicfattyliverinmiceexperimentalmodelsofoptimalfeedratioofprogramsYAOPeng，QIAn-long，ZHANGYu，etal.TianjinMedicalUniversitySchoolofClinicalMedicine，Tianjin300270，China【Abstract】ObjectiveExploretheestablishmentofnon-alcoholicfattyliverinmiceanimalmodelsoffeedratioofthebestprograms.Methods80KMmicewererandomlydividedinto4groupsA，B，Casamodelgroup，Dasthecontrolgroup.Modelgroupweregivendifferentgradientofhigh-fatdiet，normaldietcontrolgroup.Theninanotherweekwecollectedfiveeachfromthefivemodelgrouprandomly.Andthenkilledthemtoobservetheformationofpathologicalmodel，todobloodtestinganddobiopsy，anddetectedbybiochemicalanalysisofserumbiochemicalindicatorsandtheliver，liverhomogenatesystemmeasuredLTG，LTC.Theresultsofthemodelingprocess，themodelgroupBincreasedthefastestthantheotherss.Comparedwiththeaverageweightofthenormal，totheendoftheexperiment，groupAwere7.62%heavier，groupBwere16.76%，groupCwere11.14%，themodelanimalweightandliverindexincreasedsignificantlycomparedwiththenormalgroup(P＜0.01).BiochemicaltestsshowedthemodelgroupmiceTC，TG，ALT，AST，LDL-C，LTG，LTClevel，thereisacertaindegreeofreduction(P＜0.01)，HDL-Clevelsweresignificantlyincreased(P＜0.01)，wherethesharpestchangeingroupBmice(P＜0.01).Inpathology，afteraweekthegroupBfirstappearedinthemildhepaticsteatosis，groupB，2weeksafter，mostlyappearmoderatefattychange.Modelingfor4weeksingroupBmiceshowedseveremacrovesicularfattychange.ConclusionTheratiooftheappropriatehigh-fathigh-cholesteroldietisafastandefficientproductionmethodoffattylivermodel.【Keywords】Non-alcoholicsteatohepatitis；Animalmodel；Liverindex；Animalexperiments目前，非酒精性脂肪性肝炎的發(fā)病率為1.2%～4.8%，隨著人民物質(zhì)生活的改善，非酒精性脂肪性肝病的發(fā)病率將逐年上升。在某些地區(qū)脂肪肝已超過(guò)病毒性肝炎而成為第一大肝病。非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholicfattyliverdisease，NAFLD)在歐美地區(qū)、亞太地區(qū)很多國(guó)家內(nèi)引起慢性肝功能異常隱源性肝酶升高最為常見的原因，也幾乎是至少60%的病因迄今不明的肝硬化病例的基礎(chǔ)病因。非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholicsteatohepatitis，NASH)是NAFLD的一種病理類型，是進(jìn)展性疾病，可以發(fā)展為肝硬化、肝功能衰竭和肝癌等終末期肝病，其病理生理機(jī)制尚不完全清楚。疾病的發(fā)病機(jī)制只有通過(guò)與疾病相似的合適動(dòng)物模型才可以得到闡明，本課題采用了高脂飲食復(fù)制非酒精性脂肪性肝炎的動(dòng)物模型，觀察非酒精性脂肪性肝炎的動(dòng)物模型的病理變化特點(diǎn)和探討最佳的飼料配比方案。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物KM小鼠，清潔級(jí)，小鼠體重為（25.3±1.8）g。1.2實(shí)驗(yàn)試劑膽固醇(上海源聚生物科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：080502)；膽酸（中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司，批號(hào)：20070120）；豬油、蛋黃粉、普通飼料（市購(gòu)）；生理鹽水。1.3實(shí)驗(yàn)儀器美國(guó)貝克曼CX5PRO全自動(dòng)生化分析儀，尼康YS100和尼康E200顯微鏡、加拿大顯微攝像系統(tǒng)PL-B681CU，上海良平儀器儀表公司JA3003電子天平，沈陽(yáng)龍首電子儀器公司LS-2055AT+全自動(dòng)石蠟切片機(jī)1.4動(dòng)物分組及處理50日齡以上雌鼠200只，隨機(jī)取其中80只，并把KM80只小鼠隨機(jī)分為甲、乙、丙、丁四組各20只。甲、乙、丙為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M，丁組為正常對(duì)照組，甲、乙、丙三組給予不同梯度高脂飲食復(fù)制非酒精性脂肪性肝炎模型。見表1。高脂飲食由普通飼料加豬油，蛋黃粉，膽固醇，膽酸組成。在造模后每1周分別取模型組動(dòng)物各5只處死，觀察其病理模型形成情況，做血液指標(biāo)檢測(cè)及病里切片。分別在第2周。第4周末將小鼠用2%戊巴比妥鈉（45mg/kg）腹腔注射，麻醉后下腔靜脈取血，將血標(biāo)本離心后用于血脂檢測(cè)；取肝左葉，用10%中性福爾馬林溶液固定，石蠟包埋切片，作肝組織病理學(xué)觀察。1.5觀察指標(biāo)及檢測(cè)1.5.1一般項(xiàng)目觀察動(dòng)物的體重、飲食、毛發(fā)、活動(dòng)情況、肝/體重比等。1.5.2血脂檢測(cè)動(dòng)物處死前，采取各組動(dòng)物血液分離血清，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。1.5.3病理學(xué)觀察取新鮮肝組織左葉，用10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋5μm切片，HE染色作肝組織病理學(xué)觀察，了解肝組織脂肪變性、炎癥活動(dòng)程度。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1動(dòng)物的一般情況實(shí)驗(yàn)期間正常組動(dòng)物精力充沛，靈活好動(dòng)，飲食正常，皮毛整潔，體重緩慢增加；模型組飲食量大，嗜睡，毛色偏黃，個(gè)體較大，體重增長(zhǎng)較正常組快，模型組動(dòng)物乙組造模后體重增長(zhǎng)較正常對(duì)照組及模型組甲組、丙組迅速，至2周時(shí)，甲組體重較正常組平均重6.21%，乙組體重較正常組平均重12.41%，丙組體重較正常組平均重9.85%，至4周時(shí)，甲組體重較正常組平均重7.62%，乙組體重較正常組平均重16.76%，丙組體重較正常組平均重11.14%。模型組小鼠有不同程度的精神萎靡，活動(dòng)減少，其中乙組小鼠尤為嚴(yán)重。2.2體重和肝指數(shù)四組小鼠體重、肝指數(shù)變化情況，模型組乙組較正常組和模型組甲、丙兩組體重及肝指數(shù)均顯著增加（P＜0.01）。2.3血液指標(biāo)模型組乙組與正常組和模型組甲、丙兩組相比，HDL－C降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）TC、TG、ALT、AST、LDL-C、LTG、LTC明顯升高，差異具有顯著性（P＜0.01）。2.4肝臟病理學(xué)變化2.4.1肉眼觀察正常組小鼠肝臟形態(tài)正常，4周時(shí)無(wú)一例出現(xiàn)異常。模型組乙組小鼠造模2周起肝臟外形稍飽滿圓鈍，質(zhì)地較脆，色紅；3周肝臟體積增大，包膜緊張，色灰黃，切面油膩；4周時(shí)，模型組乙組動(dòng)物肝臟明顯增大，包膜緊張，邊緣較鈍，質(zhì)地略軟，色黃，表面呈花斑狀，觸之似泥塊并有油膩感，部分大鼠肝臟有黃白色的局灶性脂肪沉積。模型組甲、丙兩組，造模3周起肝臟外形稍飽滿圓鈍，質(zhì)地較脆，色灰紅；4周肝臟體積增大，包膜緊張，色澤灰白，切面油膩。2.4.2光鏡觀察（10×40倍HE染色）正常組肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列。無(wú)肝細(xì)胞腫脹及脂肪變(圖1)。模型組乙組肝組織HE染色顯示：造模2周后乙組小鼠肝臟即有輕微的肝細(xì)胞脂肪變性，標(biāo)本還出現(xiàn)匯管區(qū)及小葉內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和散在的點(diǎn)狀壞死。造模3周乙組小鼠多呈中度脂肪變，且炎癥活動(dòng)積分明顯高于造模1～3周小鼠，可見到小葉內(nèi)炎癥，炎癥細(xì)胞主要以單核細(xì)胞為主，炎癥程度明顯加重（圖3）。造模4周乙組小鼠呈中重度的大泡性脂肪變，脂滴分布密度增大，可見大部分肝細(xì)胞漿含大脂滴，部分脂滴形成大空泡，將細(xì)胞核擠壓至一邊，且以中央靜脈周圍為甚；肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，肝細(xì)胞排列不規(guī)整，并伴大量肝細(xì)胞腫脹。模型組甲、丙組肝組織HE染色顯示：造模3周后甲、丙兩組小鼠肝臟即有輕微的肝細(xì)胞脂肪變性，標(biāo)本還出現(xiàn)匯管區(qū)及小葉內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和散在的點(diǎn)狀壞死。造模4周小鼠多呈中度脂肪變，且炎癥活動(dòng)積分明顯高于造模1～3周小鼠，可見到小葉內(nèi)炎癥，炎癥細(xì)胞主要以單核細(xì)胞為主，炎癥程度明顯加重。3討論脂肪肝是一種多病因引起的、病變主體在肝小葉，以肝細(xì)胞內(nèi)中性脂肪異常沉積為主的臨床病理綜合征。近年來(lái)，人們對(duì)非酒精性脂肪性肝炎的研究日益增多，發(fā)現(xiàn)它不僅可以發(fā)展為肝纖維化、肝硬化并致一系列嚴(yán)重并發(fā)癥，甚至可以發(fā)展成肝癌，早期認(rèn)識(shí)并治療非酒精性脂肪性肝炎對(duì)阻止慢性肝病進(jìn)展和改善預(yù)后具有重要意義。眾所周知，脂肪肝的成因非常復(fù)雜，這為其病理模型的研究和治療帶來(lái)很大的難度。動(dòng)物模型在探索脂肪肝的發(fā)病機(jī)制、評(píng)價(jià)診斷方法、篩選防治藥物等領(lǐng)域均有重要作用。研究不同方法不同原因造成的脂肪肝動(dòng)物模型對(duì)闡明脂肪肝的發(fā)病機(jī)制和治療必然會(huì)產(chǎn)生積極影響。目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者們根據(jù)脂肪肝的病因，設(shè)計(jì)出多種造模方式，如高脂飼料喂養(yǎng)，酒精損害，毒物損傷（CCl4、乙硫氨酸），復(fù)合因素（乙醇-高脂飲食-CCl4）等。各種動(dòng)物模型的形成機(jī)制及病理改變各異，實(shí)驗(yàn)者可根據(jù)研究目的選擇合適的動(dòng)物模型。本研究選用的利用高脂飼料喂養(yǎng)建立的脂肪肝模型小鼠與人類疾病特征相似，病變有一定發(fā)展過(guò)程，同時(shí)形成率高，死亡率低，重復(fù)性好，造模方法簡(jiǎn)便易行。其主要通過(guò)改變高脂飼料喂養(yǎng)模型小鼠的飼料配比方案來(lái)進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，主要方法是通過(guò)改變豬油，蛋白粉，膽固醇，膽酸以及普通飼料的比例，來(lái)驗(yàn)證出一種利用高脂飼料制造動(dòng)物模型的最佳飼料配比方案。結(jié)果顯示乙組（10%豬油，10%蛋黃粉，4%膽固醇，1%膽酸，普通飼料75%）配方明顯比其他組配方更容易建立小鼠非酒精性脂肪肝實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀ｋm然此實(shí)驗(yàn)已經(jīng)成功，但小鼠與人在脂類代謝機(jī)制上有很多不同之處，因此，具體機(jī)制還有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)探討。參考文獻(xiàn)［1］張一琚.脂肪肝的臨床及流行病學(xué)特征.華人消化雜志，1998，6(特刊7)：442-443.［2］范建高.中國(guó)脂肪肝的研究.世界華人消化雜志,2001,9：6-10.［3］WangJT，LiuYL.Non-alcoholicfattyliverdisease：theproblemswearefacing.HepatobilPancreatDisInt，2003，2：334-337.［4］徐正婕，范建高，王國(guó)良，等