實驗三 葉綠體中色素的提取和分離

PAGEPAGE2葉綠體中色素的提取和分離方案一【實驗原理】（1）葉綠體中的色素能夠溶解在有機溶劑丙酮中，所以，可以通過研磨法用丙酮提取葉綠體中的色素(若無丙酮亦可用酒精代替)。

（2）紙層析法：層析液（在60℃～90【實驗器材】新鮮的綠色菠菜葉片，干燥的定性濾紙，燒杯，研缽，小玻璃漏斗，脫脂棉，載玻片，剪刀，小試管，培養(yǎng)皿蓋，藥勺，量筒，天平。丙酮，層析液，二氧化硅，碳酸鈣?！緦嶒炦^程】（一）提取綠色葉片中的色素：1、用天平稱取5g綠色的葉片，用剪刀剪碎，放入研缽中；2、向研缽中放入少許二氧化硅和碳酸鈣，再加入5ml丙酮。由于丙酮具有一定的毒性并且很容易揮發(fā)。為了盡量少的吸入丙酮，可以將一片濾紙蓋在研缽上，紙的中心穿一個洞，將杵棒套入洞口進行研磨?！鶠槭裁匆尤肷僭S少許二氧化硅和碳酸鈣？加入二氧化硅是為了研磨的更充分；加入少許碳酸鈣是為了保護葉綠體中的色素，為是由于碳酸鈣可以中和液泡破裂后釋放出的有機酸，調(diào)節(jié)液體的PH，防止或避免色素被破壞?！鶠槭裁匆尤氡?？丙酮是有機溶劑可以使色素溶解其中，作為色素的溶劑。3、將研磨液迅速倒入小玻璃漏斗中進行過濾（漏斗基部放一小團脫脂棉）。將濾液收集到一個小試管中，及時用塞將試管口塞緊。（以防止濾液中的丙酮揮發(fā)）※是否可以用濾紙來代替脫脂棉？不可以，濾紙對光合色素具有較強的吸附能力，使濾液的色素分子減少。（二）制備濾紙條：

取一塊預(yù)先干燥處理過的定性濾紙，將濾紙剪成長6cm、寬1cm的濾紙條，將濾紙條的一端剪去兩角，并在距這一端1cm處用鉛筆畫一條細(xì)的橫線。

※在剪裁定性濾紙時，盡量注意雙手不要接觸紙面，以免手上的油脂或其他臟物污染濾紙，影響色素在紙條上的擴散?！鶠槭裁匆羧V紙條的兩角？使層析液在濾紙條上的擴散更均勻。（三）畫濾液細(xì)線：

用滴管管吸取少量濾液，放置在一個載玻片上，用第二片載玻片推勻，第三個載玻片取液體沿鉛筆線均勻地畫出一條直的濾液細(xì)線。畫得越細(xì)越齊越好，但色素的量要多一些，否則色素帶的顏色較淺，不利于觀察。因此，為了增加色素的量，重復(fù)畫濾液細(xì)線二三次。※重復(fù)畫濾液細(xì)線時，應(yīng)在上一次干燥以后，再畫下一次。為什么？有利于色素分子保留在細(xì)線上，而不會出現(xiàn)擴散現(xiàn)象，使色素帶不均勻。（四）分離葉綠體中的色素：

將3ml層析液倒入燒杯中，將濾紙條（有濾液細(xì)線的一端朝下）略微斜靠燒杯的內(nèi)壁，輕輕地插入到層析液中，隨后用培養(yǎng)皿蓋蓋上燒杯。

※放置濾紙條時要特別注意，不能讓濾紙條上的濾液細(xì)線浸沒在層析液中。否則，層析液沒及濾液細(xì)線時，就會使濾液細(xì)線中的色素溶解在其中，影響實驗結(jié)果。（五）觀察實驗結(jié)果：

幾分鐘后，取出濾紙條。干燥后，就能看到色素的分層現(xiàn)象?！緦嶒灲Y(jié)果和結(jié)論】濾紙條上出現(xiàn)4條色素帶，說明葉綠體中含有四種色素,胡蘿卜素在最上端,呈橙黃色；其次是葉黃素，呈黃色；中間是藍(lán)綠色的葉綠素a；下端是黃綠色的葉綠素b。

結(jié)合實驗原理可以知道：溶解度最高的是胡蘿卜素，其它依次是：葉黃素、葉綠素a、葉綠素b?！局攸c提示】1、實驗成敗的幾個關(guān)鍵步驟：①選材：選材時應(yīng)注意選擇鮮嫩、色濃綠、無漿汁的葉片。如菠菜、棉花葉等。②研磨：光合色素分子存在于葉綠體內(nèi)囊狀結(jié)構(gòu)的薄膜上，只有充分研磨，破壞葉肉細(xì)胞的細(xì)胞壁、細(xì)胞膜以及葉綠體膜等，才能使色素被釋放出來，并溶解在丙酮中。③畫濾液細(xì)線：應(yīng)以細(xì)、直、均勻、顏色濃綠為標(biāo)準(zhǔn)，重復(fù)畫線時必須等上次畫線干燥后再進行，重復(fù)2—3次。④層析時，濾液細(xì)線不能沒入層析液中。⑤研磨前加入的物質(zhì)的量不能太多，一般用藥匙一勺即，加丙酮也不能太多，過多會使濾液濃度過低。2、保證安全的措施：①研磨過程中，為了盡量少吸入丙酮，可以將紙蓋在研缽上，紙中心穿一個洞，將杵棒套入洞口進行研磨。②由于層析液易揮發(fā)，所以層析時燒杯上應(yīng)蓋培養(yǎng)皿蓋，防止層析液揮發(fā)。③濾液過濾到試管后，應(yīng)用棉塞將試管口塞緊，以防止丙酮揮發(fā)和色素遇空氣氧化。3、若提取色素為淡綠色，可能原因有：①研磨不充分，色素末能充分提取出來。②丙酮加入量大多，稀釋了色素提取液；③末加或入加了碳酸鈣，葉綠素分子已被破壞。動手做：方案二：改變層析液：95%乙醇，觀察實驗結(jié)果，并比較兩次實驗結(jié)果。方案二觀察到的現(xiàn)象（色帶顏色的順序）：