專題2《細(xì)胞工程》：2.2.2《動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體》課件新人教版選修3.新

動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體榆樹(shù)市第一高級(jí)中學(xué)生物任成蘭復(fù)習(xí)提問(wèn)

植物體細(xì)胞雜交的過(guò)程

自學(xué)與思考：1、什么叫動(dòng)物細(xì)胞融合？2、動(dòng)物細(xì)胞融合的過(guò)程？3、依據(jù)原理是什么？4、誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法有哪些?5、動(dòng)物細(xì)胞融合完成的標(biāo)志是什么？6、動(dòng)物細(xì)胞融合的有什么意義和用途？7、植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合有哪些異同？

(一)動(dòng)物細(xì)胞融合1、動(dòng)物細(xì)胞融合概念是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。也叫細(xì)胞雜交。2、動(dòng)物細(xì)胞融合的過(guò)程A細(xì)胞B細(xì)胞誘導(dǎo)融合雜交細(xì)胞有絲分裂多個(gè)雜交細(xì)胞*膜融合質(zhì)融合核融合4、誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法

3、依據(jù)原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性物理法：離心、振動(dòng)、電激化學(xué)法：聚乙二醇（PEG）生物法：滅活的病毒（滅活的仙臺(tái)病毒）【易誤警示】

(1)常用的病毒誘導(dǎo)劑有仙臺(tái)病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等，其中仙臺(tái)病毒最常用。(2)用做誘導(dǎo)劑的病毒必須事先滅活，使病毒的感染活性、增殖能力喪失但不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)。過(guò)程：5、動(dòng)物細(xì)胞融合完成的標(biāo)志是什么？雜交細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂(1)意義:細(xì)胞融合技術(shù)突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能6、動(dòng)物細(xì)胞融合的意義和用途(2)用途：主要用于制備單克隆抗體7、比較植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理融合前處理誘導(dǎo)方法用途細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性用纖維素酶、果膠酶去壁用胰蛋白酶使細(xì)胞分散物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)、生物方法獲得雜種植株主要用于制備單克隆抗體

回顧1、抗體的化學(xué)本質(zhì)？2、抗體由什么細(xì)胞產(chǎn)生？3、抗體的作用特點(diǎn)？4、抗體的分布？（二）單克隆抗體的制備思考：如何獲取某種特定抗體？1、抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法再?gòu)膭?dòng)物血清中分離抗體該法制備抗體的特點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。輸入漿細(xì)胞動(dòng)物體內(nèi)

某抗體

某抗原思考與探究：如何獲得大量化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？一個(gè)B淋巴細(xì)胞——只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞——能無(wú)限增殖雜交瘤細(xì)胞既能分泌一種特異性抗體又能無(wú)限增殖1975年英國(guó)科學(xué)家米爾斯坦和柯勒設(shè)想：2、單克隆抗體的制備過(guò)程

自學(xué)與思考：1）在從小鼠體內(nèi)取B淋巴細(xì)胞前應(yīng)對(duì)小鼠作何種處理？

為什么要這樣處理？2）從小鼠何處獲取B淋巴細(xì)胞？3）如只考慮兩兩融合，可能出現(xiàn)哪些融合類型細(xì)胞？4）是否所有雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生某一特定抗體？5）由特定的B淋巴細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合成的雜交瘤細(xì)胞具有什么特點(diǎn)？6）最后可以通過(guò)哪些途徑大量獲取抗體？2單克隆抗體的制備過(guò)程雜交細(xì)胞滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞經(jīng)免疫的小鼠提取雜交瘤細(xì)胞第一次篩選用特定的選擇性培養(yǎng)基第二次篩選能產(chǎn)生特定抗體、培養(yǎng)條件下能無(wú)限增殖的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔提取單克隆抗體整個(gè)制備過(guò)程要經(jīng)過(guò)兩次篩選第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種），第二次篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞

雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)既能迅速大量增殖又能產(chǎn)生特異性抗體

※知識(shí)拓展：如何進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測(cè)及克隆化培養(yǎng)？

融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞，通常用“有限稀釋法”來(lái)選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過(guò)一個(gè)，通過(guò)培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測(cè)各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體（常用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法），那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽(yáng)性孔。陽(yáng)性孔中的細(xì)胞還不能保證是來(lái)自單個(gè)細(xì)胞，挑選陽(yáng)性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋，一般需進(jìn)行3～4次，直至確信每個(gè)孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。該過(guò)程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。單克隆抗體：特異性強(qiáng)、靈敏度高，并可大量制備。3、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)4、單克隆抗體的應(yīng)用

(1)

可用于作為診斷試劑：

有準(zhǔn)確，高效，簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)(2)可用于疾病治療和運(yùn)載藥物

“生物導(dǎo)彈”＝單克隆抗體＋藥物（有導(dǎo)向作用）例題1下列關(guān)于單克隆抗體的制備和應(yīng)用的敘述中，不正確的是

（）A．B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合，一般需要滅活的仙臺(tái)病毒或聚乙二醇誘導(dǎo)B．融合后形成的雜交瘤細(xì)胞既能無(wú)限增殖，又能產(chǎn)生單克隆抗體C．體外培養(yǎng)時(shí)，一個(gè)B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生一種抗體，但不能無(wú)限增殖D．單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，特異性強(qiáng)，靈敏度高，優(yōu)越性明顯B例題2關(guān)于單克隆抗體，下列敘述不正確的是（

）

A．可以制成診斷盒，用于疾病的診斷B．可以在生物體內(nèi)生產(chǎn)，不能體外生產(chǎn)C．可以利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)

D．可以與藥物結(jié)合，用于病變細(xì)胞的定向治療B

[變式練習(xí)]右圖為細(xì)胞融合的簡(jiǎn)略過(guò)程，請(qǐng)據(jù)圖回答：⑴若A、B是植物細(xì)胞，在細(xì)胞融合之前已用

處理，除去了

；A、B到細(xì)胞C的過(guò)程中，常用的物理方法是

。⑵若A、B是植物細(xì)胞，則形成的D細(xì)胞還要應(yīng)用

技術(shù)把D培養(yǎng)成植株。⑶若A、B是動(dòng)物細(xì)胞，一般取自

，然后用

，使其分散開(kāi)來(lái)，A、B到C的過(guò)程中，常用的不同于植物細(xì)胞的手段是

，所形成的D稱為

。⑷若該過(guò)程是制備單克隆抗體，A為小鼠，那么，在獲得此細(xì)胞之前，小鼠已被注射了

。注射后小鼠身體產(chǎn)生了相應(yīng)的

。圖中B為

。⑸若該過(guò)程仍是制備單克隆抗體，在A、B到C的過(guò)程中，所形成的C有

種，用來(lái)培養(yǎng)的D細(xì)胞應(yīng)該是

。從中選擇出它的方法是

培養(yǎng)。獲得D后，常用的培養(yǎng)方法是

。纖維素酶和果膠酶細(xì)胞壁離心、振動(dòng)、電激植物組織培養(yǎng)幼齡動(dòng)物的組織或胚胎胰蛋白酶滅活的病毒雜交瘤細(xì)胞特定抗原蛋白B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞3雜交瘤細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基小鼠腹腔和培養(yǎng)液培養(yǎng)※課堂小結(jié)一種誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一種新細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)滅活病毒雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)一、動(dòng)物細(xì)胞的融合1、概念2、過(guò)程3、原理4、誘導(dǎo)融合方法5、意義和用途二、單克隆抗體1、概念2、制備過(guò)程3、優(yōu)點(diǎn)4、應(yīng)用人有了知識(shí)，就