中國海洋大學(xué)生命學(xué)院生化實(shí)驗(yàn)報(bào)告

中國海洋大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告第一部分、蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)，2、掌握通過相關(guān)的顏色反應(yīng)初步判斷蛋白質(zhì)所含基團(tuán)。二、實(shí)驗(yàn)原理蛋白質(zhì)分子中某種或某些基團(tuán)可與顯色劑作用，產(chǎn)生顏色。不同的蛋白質(zhì)由于所含的氨基酸不完全相同，顏色反應(yīng)亦不完全相同。顏色反應(yīng)也可作為一些常用蛋白質(zhì)定量測定的依據(jù)。三、實(shí)驗(yàn)儀器1、吸管2、滴管3、試管4、電爐5、pH試紙6、水浴鍋四、實(shí)驗(yàn)試劑1、卵清蛋白液2、0.5%苯酚3、Millon’s試劑4、尿素晶體5、1%CuSO46、10%NaOH7、濃硝酸8、0.1%茚三酮溶液9、冰醋酸10、濃硫酸五、實(shí)驗(yàn)步驟（一）

米倫（Millon’s）反應(yīng)1、苯酚實(shí)驗(yàn)：取0.5%苯酚溶液1ml于試管中，加Millon’s試劑0.5ml，電爐小心加熱觀察顏色變化。2、蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)：取2ml蛋白液，加Millon’s試劑0.5ml，出現(xiàn)白色的蛋白質(zhì)沉淀，小心加熱，觀察現(xiàn)象。（二）

雙縮脲反應(yīng)1、取少量尿素晶體放在干燥的試管中，微火加熱熔化，至重新結(jié)晶時(shí)冷卻。然后加10%NaOH溶液1ml，搖勻，再加2-4滴1%CuSO4溶液，混勻，觀察現(xiàn)象。2、取蛋白液1ml，加10%NaOH溶液1ml，搖勻，再加2-4滴1%CuSO4溶液，混勻，觀察現(xiàn)象。（三）

黃色反應(yīng)取一支試管，加入1ml蛋白液及濃硝酸5滴。加熱，冷卻后注意顏色變化。然后再加入10%NaOH溶液1ml，觀察顏色變化。（四）

茚三酮反應(yīng)取蛋白液1ml于試管中，加10滴茚三酮溶液，加熱至沸，觀察現(xiàn)象。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果（一）1、溶液即出現(xiàn)玫瑰紅色2、小心加熱，凝固的蛋白質(zhì)出現(xiàn)紅色。（二）1、有紫色出現(xiàn)2、有紫色出現(xiàn)（三）有黃色物質(zhì)生成，加入堿液后，液體變成橘黃色。（四）有藍(lán)紫色出現(xiàn)。七、實(shí)驗(yàn)分析（一）米倫試劑是硝酸、亞硝酸、硝酸汞、亞硝酸汞的混合物。他能與苯酚及某些二羥基苯衍生物起顏色反應(yīng)。組成蛋白質(zhì)的氨基酸中因酪氨酸含苯酚基團(tuán)，因此蛋白質(zhì)中含酪氨酸即發(fā)生顏色反應(yīng)。（二）尿素被加熱，則兩分子的尿素放出一分子氨而形成雙縮脲。雙縮脲在堿性環(huán)境中，能與硫酸銅結(jié)合成紫色的化合物，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子中含有肽鍵與縮脲結(jié)構(gòu)相似，故也能進(jìn)行此反應(yīng)。（三）蛋白質(zhì)分子中含有苯環(huán)結(jié)構(gòu)的氨基酸（如酪氨酸、色氨酸等），于濃硝酸可反應(yīng)并生成黃色物質(zhì)，此物質(zhì)在堿性環(huán)境下變?yōu)榻埸S色的硝基苯衍生物硝醌酸等。（四）蛋白質(zhì)與茚三酮共熱，產(chǎn)生蘭紫色的還原茚三酮、茚三酮和氨的縮合物。此反應(yīng)為一切蛋白質(zhì)及a-氨基酸所共有。亞氨基酸（脯氨酸和羥脯氨酸）與茚三酮反應(yīng)呈黃色，含有氨基的其他物質(zhì)亦呈此反應(yīng)。第二部分、蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)2、加深對蛋白質(zhì)性質(zhì)的了解。二、實(shí)驗(yàn)原理 蛋白質(zhì)是親水性膠體，在溶液中的穩(wěn)定性與質(zhì)點(diǎn)大小、電荷、水化作用有關(guān)，但其穩(wěn)定性是有條件的，相對的。如果條件發(fā)生了變化，破壞了蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，蛋白質(zhì)就會(huì)從溶液中沉淀出來。三、實(shí)驗(yàn)儀器1、移液管2、吸管3、試管4、電爐四、實(shí)驗(yàn)試劑1、卵清蛋白液2、飽和硫酸銨溶液3、硫酸銨晶體4、95%乙醇5、醋酸鉛溶液6、硫酸銅溶液7、氯化鈉晶體8、10%三氯乙酸溶液9、飽和苦味酸溶液10、1%醋酸溶液五、實(shí)驗(yàn)步驟（一）蛋白質(zhì)的鹽析作用1、試管中加蒸餾水3ml，加固體硫酸銨至飽和。另一支試管加蛋白液2ml，再加入飽和硫酸銨溶液2ml，搖勻靜置觀察現(xiàn)象。2、將上述混合液過濾。向?yàn)V液中逐漸加入少量固體硫酸銨，直至飽和為止，此時(shí)析出為清蛋白。再加入少量蒸餾水，觀察沉淀是否溶解。（二）有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì)試管中加蛋白液1ml，加晶體氯化鈉少許，溶解后加95%乙醇3ml,搖勻，觀察現(xiàn)象。（三）重金屬鹽與某些有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì)1、取試管2支，各加蛋白液2ml，一支管中滴加1%醋酸鉛溶液，另一支管中滴加1%硫酸銅溶液，至有沉淀產(chǎn)生。2、取一支試管加蛋白液2ml，再加入10%三氯乙酸1ml，充分混勻，觀察結(jié)果。（四）生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)取一支試管，加入蛋白液2ml及醋酸4-5滴，再加飽和苦味酸數(shù)滴，觀察現(xiàn)象。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果（一）1、有球蛋白析出。2、沉淀溶解（二）有乳白色物質(zhì)出現(xiàn)，靜置后沉淀。（三）蛋白質(zhì)聚集沉淀（四）蛋白質(zhì)聚集沉淀，由于苦味酸為黃色，沉淀為黃色。七、實(shí)驗(yàn)分析（一）向蛋白質(zhì)中加入大量的中性鹽（硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等），使蛋白質(zhì)膠體顆粒脫水，破壞其水化層，同時(shí)它所帶有的電荷亦被中性鹽上所帶的相反電荷的離子所中和。于是穩(wěn)定因素被破壞，蛋白質(zhì)聚集沉淀。鹽析作用一般不使蛋白質(zhì)變性。（二）某些有機(jī)溶劑（如乙醇、甲醇、丙醇等），因引起蛋白質(zhì)脫去水化層以及降低介電常數(shù)而增加帶電質(zhì)點(diǎn)間的相互作用，致使蛋白質(zhì)顆粒容易凝聚而沉淀。（三）重金屬離子（如Pb2+、