人類巴氏小體的觀測

本文格式為Word版，下載可任意編輯——人類巴氏小體的觀測遺傳學(xué)試驗(yàn)報告

題目：人類巴氏小體的觀測

姓名：學(xué)號：班級：時間：

一、試驗(yàn)?zāi)康模?/p>

1.把握人體性染色質(zhì)的檢測方法；

2.觀測人體性染色質(zhì)的形態(tài)特征及存在部位，為進(jìn)一步研究人體染色體的

畸變與疾病提供參考條件；

3.了解雌性哺乳動物X染色體失活假說和劑量補(bǔ)償效應(yīng)的機(jī)制。二、試驗(yàn)原理：

人類有23對染色體，其中22對為常染色體，另一對為性染色體。女性為XX，男性為XY。X與Y染色體有一部分是同源的，在減數(shù)分裂時可以相互配對，其余部分則不同源。Y染色體含有很少的基因，而X染色體則含有大量的基因。男性與女性的常染色體數(shù)目是一樣的，所含有的基因數(shù)目也相等；但是女性含有兩條X染色體，而男性一條X一條Y，因此女性性染色體所攜帶的基因劑量遠(yuǎn)高于男性，然而研究發(fā)現(xiàn)女性伴性遺傳基因的表達(dá)劑量與男性是大體一致的，這是什么原因?qū)е碌哪兀?/p>

劑量補(bǔ)償效應(yīng)(dosagecompensationeffect)定義:在XY性別決定機(jī)制的生物中，使性連鎖基因在雌、雄性別中有相等或近乎相等的有效劑量的遺傳效應(yīng)。也就是說，在雌性和雄性細(xì)胞里，由X染色體基因編碼產(chǎn)生的酶或其它蛋白質(zhì)產(chǎn)物在數(shù)量上相等或近乎相等。劑量補(bǔ)償存在兩種狀況，雌性哺乳動物一條X染色體異染色質(zhì)化(失活)，只有一條X染色體具有活性，使雌雄動物雖然X染色體數(shù)目不同但基因產(chǎn)物的劑量是平衡的；另一種是X染色質(zhì)的轉(zhuǎn)錄速率不同，假使蠅雌性細(xì)胞中兩條X染色體都有活性，但它們的轉(zhuǎn)錄速率低于雄性細(xì)胞X染色體的轉(zhuǎn)錄速率。

1949年M.L.Barr等研究發(fā)現(xiàn)雌貓神經(jīng)元細(xì)胞核膜內(nèi)有凝縮的深染小體，而雄性個體細(xì)胞中則沒有，這一結(jié)構(gòu)被稱為巴氏小體(Barrbody)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)：所有哺乳類雌體細(xì)胞中都可以見到這一結(jié)構(gòu)。巴氏小體是由雌性哺乳動物體細(xì)胞中X染色質(zhì)隨機(jī)失活形成的，在間期細(xì)胞核中呈異固縮狀態(tài)(染色質(zhì)高度螺旋化),貼近于核膜邊緣的染色小體。

萊昂假說(Lyonhypothesis)

1961年,MaryLyon提出了說明哺乳動物劑量補(bǔ)償效應(yīng)和形成巴氏小體的X染色體失活的假說。

主要內(nèi)容包括：

①哺乳動物雌性個體兩條X染色體的其中一條在受精后失活;

②兩條X染色體中哪一條失活是隨機(jī)的；在同一哺乳動物的體細(xì)胞中，有些父源X染色體失活,有些為母源失活.

③失活在胚胎早期發(fā)生(人類在胚胎發(fā)育16天時)，某一個細(xì)胞的X染色體一旦失活，這個細(xì)胞的所有后代細(xì)胞中該X染色體均處于失活狀態(tài)。當(dāng)生殖細(xì)胞形成時,失活的染色體可恢復(fù).

④雜合體雌性在伴性基因的作用上是嵌合體，即某些細(xì)胞中來自父方的伴性基因表達(dá)，某些細(xì)胞中來自母方的伴性基因表達(dá)，這兩種細(xì)胞隨機(jī)鑲嵌存在。

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試驗(yàn)證據(jù):1)玳瑁貓毛皮上的黑色和黃色班塊—XOXo2)人類葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測定GdA/GdB

圖1取自一個有AB表型的G-6-PD性質(zhì)的電泳圖譜（0：克隆化之前的一份培養(yǎng)物，顯示AB帶；B：慢帶僅在克隆1,2,4,5,8,9中顯示；A：快帶在克隆3,6,7中顯示。）

X染色質(zhì)的失活只是部分失活，依舊有部分基因具有轉(zhuǎn)錄活性，目前已知的大約有十幾個基因有活性。若失活X染色質(zhì)為完全失活，則XXY（Klinefelter’ssyndrome）及XO(Turner’ssyndrome)型應(yīng)表現(xiàn)正常。

Barr小體的數(shù)目=n-1(n為X染色體數(shù)目)正常女人的體細(xì)胞間期核中Barr小體為1；正常男人的體細(xì)胞間期核中Barr小體為0；XXX女人的體細(xì)胞間期核中Barr小體為2；XXXX女人的體細(xì)胞間期核中Barr小體為3。

常染色質(zhì)：折疊程度低，處于伸展?fàn)顟B(tài)，染色時著色淺。DNA主要是單一序列和中度重復(fù)序列。處于常染色質(zhì)狀態(tài)是基因轉(zhuǎn)錄的必要條件。

組成型異染色質(zhì)：除復(fù)制期外，均處于凝縮狀態(tài)，處于中期染色體的著絲粒區(qū)、端粒、隨體等。具有明顯的遺傳惰性，不轉(zhuǎn)錄也不編碼蛋白，異染色質(zhì)折疊程度高，處于凝縮狀態(tài)。

兼性異染色質(zhì)：指某些細(xì)胞或某一發(fā)育階段，原來的常染色質(zhì)凝縮失去基因轉(zhuǎn)錄活性而成。失活的X染色質(zhì)在受精后可以被活化變?yōu)槌Ｈ旧|(zhì)。

巴氏小體

X-染色質(zhì)的形態(tài)特征及所在部位：X-染色質(zhì)的形態(tài)表現(xiàn)為一結(jié)構(gòu)致密的濃染小體；輪廓明白；大小1～1.5μm；常附著于核膜邊緣或靠近內(nèi)側(cè)；形狀為凸形，三角形，卵形，短棒及雙球形等。正常女性口腔黏膜細(xì)胞中出現(xiàn)率：30～50%。三、試驗(yàn)材料：

1.器材：顯微鏡，載玻片，蓋玻片，鑷子，牙簽等。2.試劑：硫堇染液，1MHCl，蒸餾水、生理鹽水。3.材料：口腔上皮細(xì)胞或頭發(fā)毛囊細(xì)胞。

口腔上皮細(xì)胞個體較大，簡單觀測，但是簡單污染細(xì)菌等雜質(zhì)。頭發(fā)毛囊細(xì)胞個體稍小，觀測稍顯困難，優(yōu)點(diǎn)是不受細(xì)菌污染。

四、試驗(yàn)步驟：

1.取口腔上皮細(xì)胞或毛囊細(xì)胞并涂于清白的載玻片上，自然枯燥5-10min；2.1MHCl水解3-5min；3.水洗3次，每次1min；4.硫堇染色20min；

5.水洗去染料，顯微鏡觀測；

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6.若染色過深或有大量染料結(jié)晶，可用95%乙醇分色3-5sec，水洗去酒精，

鏡檢。

五、試驗(yàn)結(jié)果：

X染色質(zhì)的識別方法：一般位于核膜內(nèi)側(cè)緣，形狀多樣，多為半圓形或三角形。

六、試驗(yàn)分析與探討：

1.刮口腔上皮細(xì)胞前要漱口,以減少細(xì)菌的影響。2.水解之前要等樣品稍微枯燥，以免樣品被沖走。

3.染色時間不要太長,否則核質(zhì)著色深,X染色質(zhì)體不易區(qū)分。一旦染