藥用植物蜘蛛香中草醚醛提取工藝研究

藥用植物蜘蛛香中草醚醛提取工藝研究

蜘蛛香是指屬于真菌科的蜘蛛類植物的蜘蛛類v.whichiid。直到1977年，才被記錄在《中華人民共和國藥典》中。具有鎮(zhèn)靜安神、理氣止痛、消炎止瀉、祛風除濕的功效，主要用于失眠、腹脹、消化不良、腹瀉、瘧疾等。纈草素類成分(Valepo-triates)是其鎮(zhèn)靜催眠的活性成分之一。藥理實驗證明,纈草素類成分中的一個降解產(chǎn)物纈草醚醛(Homobaldrinal)的鎮(zhèn)靜作用遠強于纈草素、異纈草素及乙酰纈草素,其穩(wěn)定性也強于纈草素類成分。本文以蜘蛛香為研究對象,以其主要成分纈草醚醛作為考察指標,采用正交試驗設計方法篩選蜘蛛香的最佳提取工藝,為蜘蛛香的提取工藝研究提供依據(jù)。1材料表面1.1色譜分析柱HP1100型高效液相色譜儀(安捷倫);色譜分析柱(美國Phenomenex公司,LunaC18);WFH-203B三用紫外分析儀(上海精科實業(yè)有限公司)。1.2色譜-質譜條件藥材樣品購自云南昆明,經(jīng)北京中醫(yī)藥大學石晉麗副教授鑒定為敗醬科植物蜘蛛香ValerianajatamansiJ.(V.wallichiiDC.)的干燥根及根莖;纈草醚醛對照品(自制,在選定色譜條件下按面積歸一化法計算含量>98%,供含量測定用);乙腈(色譜純,美國Fisher公司);水(高純水);乙醇(北京化工廠,分析純)。2方法和結果2.1hplc法測定了稻草醚的含量2.1.1乙腈水0.0m色譜柱:LunaC18柱(250mm×4.6mm,5μm);乙腈∶水(50∶50)為流動相;檢測波長為287nm;流速0.95mL/min;柱溫35℃。2.1.2對照品貯備液精密稱取真空干燥至恒重的纈草醚醛對照品10mg,置25mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,為對照品貯備液。再精密量取貯備液5mL置于10mL容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻即得。2.1.3u3000形貌精密吸取藥材提取溶液2.0mL,蒸干,殘渣加甲醇溶解,置5mL容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。用0.45μm微孔濾膜過濾得供試品溶液。2.1.4測量分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀,測定峰面積,按照外標一點法計算纈草醚醛含量。2.1.5測定波長的確定分別取供試品溶液和對照品溶液,于200~600nm處進行全波長掃描,結果表明,兩者在212nm和287nm處均有最大吸收,但在212nm處雜峰太多,對測定影響大,故選擇287nm為測定波長。2.1.6線性回歸分析分別精密量取對照品溶液2、4、6、8、10、12、14μL注入高效液相色譜儀,測定其峰面積,以峰面積A對進樣量c(μg)進行線性回歸,方程為:A=478.37c+0.6936,r=1。結果表明:纈草醚醛的進樣量在0.404~2.828μg范圍內時,與其峰面積呈良好的線性關系。2.1.7進樣精密度試驗精密量取上述對照品溶液10μL,進樣,測定峰面積,重復進樣5次,計算5次測定結果,平均峰面積為961.681,RSD值為0.26%,表明該方法精密度良好。2.1.8進樣檢測峰面積、峰面積的測定取樣品供試品溶液分別于0、1、2、4、6、8、12、24h,分別進樣10μL,測定峰面積,計算8次測定結果,平均峰面積為652.821,RSD值為0.25%。結果表明樣品供試溶液在24h內穩(wěn)定性良好。2.1.9加樣含量測定取藥材粗粉5份,每份約10g,精密稱定,分別制備5份供試品溶液并進行含量測定,計算測定結果平均含量為80.14mg,RSD值為2.38%。結果表明該方法重現(xiàn)性良好。2.1.1加樣回收率測定精密稱取已知藥材含量的樣品6份,分別添加纈草醚醛對照品溶液0.5、1.0、1.5mL,按含量測定方法測定峰面積,計算纈草醚醛回收率,平均值為98.75%,RSD值為1.68%。結果表明回收率良好。2.1.1提取液中草醚醛含量測定稱取藥材10g左右,加70%乙醇先浸潤30min,再用20倍量回流提取3次,每次5h,濾過,合并濾液,加乙醇定容,搖勻,作為藥材中纈草醚醛最大提取量的提取溶液(平行3份),按含量測定方法測定峰面積,計算藥材中纈草醚醛含量分別為8.87、8.94、8.78,3次平均為8.86mg/g。2.2粉碎度的測定蜘蛛香藥用部位主要為根及根莖,若直接進行回流提取,有效成分不能提取完全,故以纈草醚醛含量為指標,對其進行粉碎度的考察。分別稱取3份藥材,每份5g(重復3次),粉碎過14、24、40目篩,用12倍量70%乙醇提取4h。纈草醚醛含量分別為3.5、3.8、3.3mg/g,表明選用粉碎粒度為過24目篩的藥材進行回流提取纈草醚醛含量較高。2.3回流提取時間及提取次數(shù)的影響因素影響提取效率的主要因素為乙醇的濃度、乙醇用量、回流提取時間及回流提取次數(shù),故用這4個因素作為考察因素。以纈草醚醛含量作為指標,運用L9(34)正交試驗設計法進行,因素水平安排詳見表1。2.4提取溶劑和正交試驗結果按L9(34)正交試驗表設計工藝條件,稱取藥材10g,按正交試驗各項的要求進行,先用不同濃度的乙醇浸潤0.5h,回流提取規(guī)定次數(shù)和時間,濾過,合并濾液,加乙醇定容,搖勻,作為藥材的提取溶液。所有正交試驗都重復一次,正交試驗結果見表2。用SAS8.0統(tǒng)計分析軟件對2次正交試驗結果的平均值進行方差分析,結果見表3。由表3可知,各因素對纈草醚醛含量影響以因素A最顯著,其次是C和B,D因素影響最小,故確定蜘蛛香中纈草醚醛的最佳提取工藝為A1B3C3D2,即12倍量70%的乙醇回流提取2次,每次3h。2.5穩(wěn)定性試驗由于優(yōu)選工藝未包括在正交設計表的9次試驗中,故對其進行了驗證試驗。同一批藥材,取10g,按優(yōu)選工藝A1B3C3D2進行3次驗證試驗,測定纈草醚醛含量。結果表明,通過正交試驗優(yōu)選的提取工藝制備的3批樣品,纈草醚醛含量基本穩(wěn)定,且提取率約89%,故此法穩(wěn)定可行。結果見表4。3草醚醛成分的提取蜘蛛香中纈草醚醛最佳提取工藝為:藥材過24目篩,12倍量70%的乙醇浸潤0.5h,回流提取2次,每次3h。本實驗采用蜘蛛香中纈草素類成分降解產(chǎn)物纈草醚醛為指標性成分進行正交試驗分析,蜘蛛香藥材中纈草醚醛