蛋白質(zhì)組學(xué)的研究進(jìn)展

蛋白質(zhì)組學(xué)的研究進(jìn)展

21世紀(jì)的生命周期研究是一個(gè)用“組學(xué)”為基本研究單位的高度概括的時(shí)代，主要包括基礎(chǔ)研究、再現(xiàn)研究、蛋白質(zhì)研究、糖資源研究、酶反應(yīng)理論等。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)是生物體行使其功能的基本單位,而蛋白質(zhì)組學(xué)是在蛋白質(zhì)的整體水平上對(duì)生物體進(jìn)行研究,因此蛋白質(zhì)組學(xué)的研究可能更好地幫助人們了解生命的本質(zhì),各器官的分子結(jié)構(gòu)、功能及其行使該功能的機(jī)制等。也因此,該理論及其技術(shù)受到各國(guó)學(xué)者的高度重視并得到了蓬勃的發(fā)展。2001年的Science雜志已把蛋白質(zhì)組學(xué)列為六大研究熱點(diǎn)之一,蛋白質(zhì)組學(xué)研究已成為21世紀(jì)生命科學(xué)的重要戰(zhàn)略前沿。1蛋白質(zhì)的含義1994年澳大利亞Macquaie大學(xué)的Wilkins和Williams等在意大利的一次科學(xué)會(huì)議上首次提出了蛋白質(zhì)組(proteome)這個(gè)概念,該英文詞匯由蛋白質(zhì)的“prote”和基因組的“ome”拼接而成,并且最初定義為“一個(gè)基因組所表達(dá)的蛋白質(zhì)”。然而這個(gè)定義并沒(méi)有考慮到蛋白質(zhì)組是動(dòng)態(tài)的,而且產(chǎn)生蛋白的細(xì)胞、組織或生物體容易受它們所處環(huán)境的影響。目前認(rèn)為蛋白質(zhì)組是一個(gè)已知的細(xì)胞在某一特定時(shí)刻的包括所有亞型和修飾的全部蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)組學(xué)就是從整體角度分析細(xì)胞內(nèi)動(dòng)態(tài)變化的蛋白質(zhì)組成、表達(dá)水平與修飾狀態(tài),了解蛋白質(zhì)之間的相互作用與聯(lián)系,提示蛋白質(zhì)的功能與細(xì)胞的活動(dòng)規(guī)律。2功能基因組學(xué)人類(lèi)基因組學(xué)計(jì)劃使我們對(duì)人類(lèi)的基因組有了更深入的了解。但是單從基因序列預(yù)測(cè)基因的功能還是比較困難的,因而產(chǎn)生了多種基于基因組序列下游分析的學(xué)科,主要包括轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)等,統(tǒng)稱(chēng)為功能基因組學(xué)。轉(zhuǎn)錄組學(xué)主要是對(duì)基因在不同情況下的轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后加工進(jìn)行研究;蛋白質(zhì)組學(xué)主要是對(duì)蛋白質(zhì)的加工、修飾以及蛋白質(zhì)之間的相互作用進(jìn)行研究;代謝組學(xué)則是關(guān)于定量描述生物內(nèi)源性代謝物質(zhì)的整體及其對(duì)內(nèi)因和外因變化應(yīng)答規(guī)律的科學(xué)。除了代謝組學(xué)是在生物體層面進(jìn)行研究外,基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)均在分子水平上進(jìn)行研究。蛋白質(zhì)組學(xué)是分子研究終點(diǎn),也是對(duì)生物體性狀的最直接反映,同時(shí)也是目前研究最多、成果較豐富的學(xué)科。3結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)組學(xué)根據(jù)研究目的的不同,可將蛋白質(zhì)組學(xué)分為蛋白表達(dá)蛋白質(zhì)組學(xué)、功能蛋白質(zhì)組學(xué)、轉(zhuǎn)錄后加工蛋白質(zhì)組學(xué)、結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)組學(xué)。表達(dá)蛋白質(zhì)組學(xué)研究差異樣品間蛋白表達(dá)量的變化,因此可以用表達(dá)蛋白質(zhì)組學(xué)對(duì)整體或局部的蛋白表達(dá)情況進(jìn)行比較、分析。利用這種方法找到的信息可以鑒定信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的特殊蛋白,還可以鑒定與疾病有關(guān)的蛋白等。結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)組學(xué)的目的是描繪出蛋白質(zhì)復(fù)合體的結(jié)構(gòu)圖,亦或描繪出存在于特殊細(xì)胞器上的蛋白圖譜(又被稱(chēng)為細(xì)胞圖譜)。結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)組學(xué)試圖鑒定出一個(gè)蛋白復(fù)合物或一個(gè)細(xì)胞器的所有蛋白,測(cè)定它們的位置、特性,研究蛋白質(zhì)間的相互作用。例如對(duì)核孔復(fù)合體的研究。特異性地分離亞細(xì)胞器或蛋白復(fù)合體,可以很大程度地簡(jiǎn)化蛋白質(zhì)組學(xué)分析。結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)組學(xué)所得到的信息可以幫助我們很好地理解細(xì)胞的整體結(jié)構(gòu),并且有助于解釋某一特定蛋白的表達(dá)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生的特定作用。功能蛋白質(zhì)組學(xué)是一個(gè)寬泛的術(shù)語(yǔ),包含許多詳細(xì)的、直接的蛋白質(zhì)組學(xué)方法。有時(shí)為了進(jìn)一步的分析,還需要使用親和層析技術(shù)對(duì)特異性亞蛋白組進(jìn)行純化。功能蛋白質(zhì)組學(xué)的方法可以更好地分析、闡明被選擇的蛋白組分的特征與功能,還可以提供關(guān)于蛋白質(zhì)信號(hào)、疾病機(jī)制或蛋白類(lèi)藥物相互作用的重要信息。4蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展有賴(lài)于一整套技術(shù),這些技術(shù)按照其流程主要包括如下幾類(lèi)。4.1高效液相色譜法這類(lèi)技術(shù)主要是電泳,其中應(yīng)用最多的是雙向電泳技術(shù),其他還有SDS、毛細(xì)吸管電泳等。除了電泳外還有液相色譜,通常使用高效液相色譜(HPLC)和二維液相色譜(2D-LC)。另外還有用于蛋白純化、除雜的層析技術(shù)、超離技術(shù)等。4.1.1雙向電泳的制備(two-dimensionalgelelectrophoresis,2DE)這是最經(jīng)典、最成熟的蛋白質(zhì)組分離技術(shù),產(chǎn)生于20世紀(jì)70年代中葉,但主要的技術(shù)進(jìn)步(如實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性、可操作性,蛋白質(zhì)的溶解性、特異性等)是在近10年取得的。雙向電泳是通過(guò)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)(pI)和相對(duì)分子質(zhì)量的不同而將蛋白高通量地分離。首先將制備好的樣品進(jìn)行等電聚焦電泳,在這個(gè)過(guò)程中需要使用固定pH梯度的干膠條。這種膠條目前多為商業(yè)產(chǎn)品,是將pH梯度凝膠固定在塑料支持模上,有不同pH值范圍的膠條。最常用的2種膠條是pH3~10和pH4~7的膠條。當(dāng)電場(chǎng)作用于膠條上時(shí),存在于膠條內(nèi)的帶點(diǎn)的蛋白質(zhì)便根據(jù)其所帶電荷的正負(fù)而反向移動(dòng),在移動(dòng)中蛋白的帶電量逐漸減小,直到移動(dòng)到該蛋白不帶電時(shí)為止。這時(shí)的蛋白質(zhì)便遷移到了它的等電點(diǎn)處;然后將第一向電泳后的膠條經(jīng)2次平衡后轉(zhuǎn)移到第二向電泳SDS,將蛋白按照相對(duì)分子質(zhì)量的不同而分開(kāi)。雙向電泳之后的工作便是染色,主要分為考馬斯亮藍(lán)染色法和銀染法、鋅染法、Ruby熒光染色法,它們各有優(yōu)缺點(diǎn)?？捡R斯亮藍(lán)染色法的優(yōu)點(diǎn)是線(xiàn)性范圍廣,缺點(diǎn)是靈敏度低、需要大量的樣品;銀染法靈敏度高但線(xiàn)性范圍窄,容易造成“火山口”效應(yīng);鋅染法與銀染法類(lèi)似;熒光染色法相對(duì)于前幾種來(lái)說(shuō)具有靈敏度適中、線(xiàn)性范圍廣等優(yōu)點(diǎn),但其造價(jià)昂貴,需使用特殊儀器且操作復(fù)雜?？紤]到實(shí)驗(yàn)成本與后續(xù)質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的特殊性,通常使用考馬斯亮藍(lán)染色法或經(jīng)過(guò)修改的銀染法(可以與質(zhì)譜兼容)。4.1.2通過(guò)dige技術(shù)檢測(cè)表達(dá)差異2D-DIGE分析系統(tǒng)是在傳統(tǒng)雙向電泳技術(shù)的基礎(chǔ)上,結(jié)合了多重?zé)晒夥治龅姆椒?在同一塊膠上共同分離多個(gè)分別由不同熒光標(biāo)記的樣品,并第一次引入了內(nèi)標(biāo)的概念,極大地提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和重復(fù)性。在DIGE技術(shù)中,每個(gè)蛋白點(diǎn)都有它自己的內(nèi)標(biāo),且軟件自動(dòng)根據(jù)每個(gè)蛋白點(diǎn)的內(nèi)標(biāo)對(duì)其表達(dá)量進(jìn)行校準(zhǔn),這樣可以很好地去除樣品的假陽(yáng)性差異點(diǎn)。DIGE技術(shù)可檢測(cè)到表達(dá)差異小于10%的蛋白,統(tǒng)計(jì)學(xué)可信度達(dá)到95%以上。利用EttanDIGE技術(shù)還可以對(duì)微量(少到5μg)樣品進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析。2D-DIGE的具體操作過(guò)程與常規(guī)2DE的步驟相似,所不同的就是在樣品制備時(shí),在每份樣品中預(yù)先分別加入不同的熒光染料,并且需要制作一個(gè)供其他樣品比較的內(nèi)參,另外在電泳后的凝膠顯色時(shí)需要在特殊的熒光檢測(cè)儀中進(jìn)行。4.1.3復(fù)雜混合物的色譜質(zhì)譜檢測(cè)高效液相色譜因具有分離效率高、分析速度快、檢測(cè)靈敏度高和應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐中。高效液相色譜是利用高壓輸液泵驅(qū)使帶有樣品的流動(dòng)相通過(guò)裝填固定相的色譜柱,利用固液相之間的分配機(jī)理對(duì)混合物樣品溶液進(jìn)行分離的方法。例如對(duì)奶粉中三聚氰胺的檢測(cè)。二維或多維液相色譜,是將分離機(jī)理不同而又相互獨(dú)立的兩支色譜柱串聯(lián)起來(lái)構(gòu)成的分離系統(tǒng)。樣品經(jīng)過(guò)第一維的色譜柱進(jìn)入接口中,通過(guò)濃縮、捕集或切割后被切換進(jìn)入第二維色譜柱及檢測(cè)器。二維液相色譜通常采用兩種不同的分離機(jī)理分析樣品,即利用樣品的不同特性把復(fù)雜混合物(如肽)分成單一組分,這些特性包括分子尺寸、等電點(diǎn)、親水性、電荷、特殊分子間作用(親和)等。在一維分離系統(tǒng)中不能完全分離的組分,可能在二維系統(tǒng)中得到更好的分離,分離能力、分辨率得到極大的提高。完全正交的二維液相色譜,峰容量是兩種一維分離模式單獨(dú)運(yùn)行時(shí)峰容量的乘積。4.2差異蛋白比較分析對(duì)目的蛋白的篩選通常與雙向電泳連用,主要用來(lái)分析凝膠中分離出的蛋白質(zhì)樣品,采用的主要技術(shù)手段通常是Western印跡和差異蛋白比較分析。Western印跡主要是將雙向電泳后的凝膠不經(jīng)過(guò)染色而直接轉(zhuǎn)印到固相支持物(如NC膜、PVDF膜等)上,再在膜上進(jìn)行免疫學(xué)反應(yīng),從而篩選出與免疫功能相關(guān)的蛋白;差異蛋白比較分析則是先對(duì)凝膠進(jìn)行染色,然后應(yīng)用軟件(如ImageMaster、PDQuest等)對(duì)存在差異的2組凝膠進(jìn)行比較,從而找出差異的蛋白。在比較時(shí),通常要求每個(gè)被分析的樣品重復(fù)3次,然后先做組內(nèi)比較,再做組間比較。4.3蛋白質(zhì)鑒定技術(shù)4.3.1儀器和檢測(cè)方法以前對(duì)蛋白質(zhì)的鑒定主要通過(guò)測(cè)序來(lái)完成。由于質(zhì)譜技術(shù)的高速發(fā)展,目前可以快速、高效地對(duì)目的蛋白進(jìn)行鑒定,且樣品用量少(通常達(dá)到微克級(jí))。除此之外,質(zhì)譜技術(shù)還可以對(duì)蛋白質(zhì)翻譯后修飾進(jìn)行分析。根據(jù)離子源的不同,質(zhì)譜主要包括基質(zhì)輔助激光解析飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOFMS)、電噴射離子井飛行時(shí)間質(zhì)譜(ESI-TOFMS)。常用的質(zhì)譜分析儀除了飛行時(shí)間(TOF)外,還有四級(jí)桿(Q)、離子井,而在串聯(lián)質(zhì)譜中通常使用的是Q-TOF或TOF-TOF等。2種離子源都可以使肽段、蛋白、藥物的代謝產(chǎn)物、寡核苷酸等其他碳水化合物離子化,進(jìn)而被質(zhì)譜儀分析。通常的質(zhì)譜儀一般由樣品槽、離子源、分析儀和檢測(cè)器組成。由于單一地依靠蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量并不能對(duì)目的蛋白進(jìn)行理想的鑒定,因此須事先用蛋白酶(如胰蛋白酶)將檢測(cè)樣品酶解成不同長(zhǎng)度的肽段。在MALDI-TOF質(zhì)譜中還需要向樣品中加入基質(zhì),以促使樣品離子化(離子化的確切基質(zhì)目前還不清楚),然后在離子源的作用(激光激發(fā))下使樣品變?yōu)闅庀嚯x子。這些被激發(fā)的氣相離子進(jìn)入質(zhì)量分析儀,根據(jù)其荷質(zhì)比而把肽段進(jìn)行區(qū)分。質(zhì)譜的整個(gè)過(guò)程都是在真空條件下進(jìn)行的。ESI則不需要基質(zhì)輔助,而是使用具有一定能量的電子直接作用于樣品分子,使其電離。4.3.2小體氨基酸序列的檢測(cè)同時(shí)將2個(gè)上述質(zhì)譜連接在一起構(gòu)成的串聯(lián)質(zhì)譜,可以更精確、更靈敏地分析蛋白樣品。二級(jí)質(zhì)譜的使用,使得質(zhì)譜不僅可檢測(cè)肽段的相對(duì)分子質(zhì)量,還可以檢測(cè)它的氨基酸序列。利用質(zhì)譜儀的第一個(gè)分析儀對(duì)蛋白樣品進(jìn)行初步檢測(cè),從樣品混合中選擇特定的肽段,再將這個(gè)特定的肽段與惰性氣體(如氮?dú)?、氬氣?碰撞,從而將肽段進(jìn)一步離解。在被選擇的肽段與惰性氣體發(fā)生能量碰撞時(shí),支持蛋白主鏈構(gòu)象的化學(xué)鍵受到破壞,碰撞后的結(jié)果再被第二級(jí)質(zhì)譜分析儀分析。串聯(lián)質(zhì)譜又叫碎片譜或MS/MS譜。在二級(jí)質(zhì)譜中,可以將差別只有1個(gè)氨基酸的相鄰肽段區(qū)分開(kāi)。因此通過(guò)分析臨近峰的相對(duì)分子質(zhì)量,可以檢測(cè)肽段的氨基酸序列。4.3.3質(zhì)鑒定的實(shí)現(xiàn)(peptidemassfingerprinting,PMF)當(dāng)被離子化的肽段經(jīng)過(guò)質(zhì)譜儀時(shí),這些肽段因其相對(duì)分子質(zhì)量的不同而被分離,因此產(chǎn)生了含有不同峰值的肽質(zhì)量指紋圖譜。蛋白質(zhì)鑒定便是通過(guò)對(duì)PMF的分析實(shí)現(xiàn)的,即將所得到的PMF與已知數(shù)據(jù)庫(kù)中一個(gè)蛋白的理論期望蛋白酶肽段進(jìn)行比較,可以得到一個(gè)匹配程度得分,當(dāng)這個(gè)得分高于理論計(jì)算的得分時(shí),便認(rèn)為該蛋白是理論中的蛋白。這些已知數(shù)據(jù)庫(kù)在互聯(lián)網(wǎng)上有很多,其中NCBI和EBI的數(shù)據(jù)庫(kù)是最大的,而且是免費(fèi)的。在搜索這些數(shù)據(jù)庫(kù)時(shí),需要使用搜索軟件如Mascot、PepSea、PeptideSearch等,其中Mascot是最常用的軟件。最近開(kāi)發(fā)了一個(gè)新的程序Paragon,該程序克服了Mascot被動(dòng)的、概率的、估計(jì)的搜索模式所帶來(lái)的缺點(diǎn),被認(rèn)為是Mascot的替代者。4.4生物生物學(xué)知識(shí)是解決生物解釋問(wèn)題的有效途徑經(jīng)質(zhì)譜鑒定的樣品,只能知道其中含有什么蛋白,但無(wú)法獲悉這些蛋白在生物體中執(zhí)行什么功能、空間構(gòu)象如何、與之同源的蛋白有哪些以及該被測(cè)蛋白的屬性,需要借助生物信息學(xué)知識(shí)解決這些問(wèn)題。生物信息學(xué)包含了生物信息的獲取、處理、儲(chǔ)存、分析和解釋等,集合數(shù)學(xué)、統(tǒng)計(jì)、計(jì)算機(jī)與生物醫(yī)學(xué)等工具研究,闡明大量生物學(xué)數(shù)據(jù)所包含的生物學(xué)意義。蛋白質(zhì)組學(xué)研究中應(yīng)用生物信息學(xué)對(duì)蛋白質(zhì)的功能和結(jié)構(gòu)進(jìn)行進(jìn)一步的分析。4.4.1通過(guò)蛋白序列推算與數(shù)據(jù)庫(kù)的比較蛋白功能的預(yù)測(cè)可以通過(guò)3條途徑實(shí)現(xiàn)。首先,通過(guò)與已知蛋白質(zhì)序列相比較來(lái)檢測(cè)蛋白的功能。此外,蛋白質(zhì)的一些其他性質(zhì)可以直接由序列分析得到。比較常用的蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫(kù)是SwissProt、PIR和NCBI的Blast,其次可以通過(guò)蛋白質(zhì)的物理性質(zhì)的預(yù)測(cè)。蛋白質(zhì)的一些功能特征可以通過(guò)蛋白序列直接推算出來(lái),通過(guò)組成蛋白質(zhì)的20種氨基酸的物理和化學(xué)性質(zhì)分析已知或未知蛋白質(zhì)的性質(zhì),如等電點(diǎn)/相對(duì)分子質(zhì)量、疏水性、跨膜螺旋、卷曲螺旋及信號(hào)肽等。除了上述2種方法外,還可以與保守的基序和圖形數(shù)據(jù)庫(kù)比較判斷功能。對(duì)于那些與數(shù)據(jù)庫(kù)中已知功能蛋白質(zhì)無(wú)同源性的序列或找到同源性的蛋白質(zhì)功能為未知時(shí),我們可與保守的基序比較來(lái)判斷其功能?；驍?shù)據(jù)庫(kù)中最為常用的是網(wǎng)站Prosite。4.4.2傾向或者規(guī)律統(tǒng)計(jì)雖然有時(shí)蛋白質(zhì)的序列相似,但是卻執(zhí)行著不同的功能;或同源基因編碼的蛋白質(zhì),雖然序列差別很大,但是對(duì)于生物體來(lái)說(shuō)執(zhí)行的卻是同樣的功能。這主要是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)的空間結(jié)構(gòu)發(fā)揮了作用。在PDB等數(shù)據(jù)庫(kù)中可以檢索到一些蛋白質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)的同源性。蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)的基本依據(jù)是每一段相鄰的氨基酸殘基具有形成一定二級(jí)結(jié)構(gòu)的傾向。因此,進(jìn)行二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)需要通過(guò)統(tǒng)計(jì)和分析發(fā)現(xiàn)這些傾向或者規(guī)律。蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)的方法有3種。一是由已知結(jié)構(gòu)統(tǒng)計(jì)各種氨基酸殘基形成二級(jí)結(jié)構(gòu)的構(gòu)象趨勢(shì),其中最常用的是Chou和Fasman法;二是基于氨基酸的物理化學(xué)性質(zhì),包括堆積性、疏水性、電荷性、氫鍵形成能力等;三是通過(guò)序列比對(duì),由已知三維結(jié)構(gòu)的同源蛋白推斷未知蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)。一般對(duì)于α螺旋預(yù)測(cè)精度較好,對(duì)β折疊差些,而對(duì)除α螺旋和β折疊等之外的無(wú)規(guī)則二級(jí)結(jié)構(gòu)則效果很差。蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)是最復(fù)雜和最困難的預(yù)測(cè)技術(shù)。序列差異較大的蛋白質(zhì)序列也可能折疊成類(lèi)似的三維構(gòu)象。由于蛋白質(zhì)的折疊過(guò)程并不十分清晰,從理論上解決蛋白質(zhì)折疊的問(wèn)題還有待進(jìn)一步的科學(xué)發(fā)展,但也有一些有一定作用的三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)方法,如與已知結(jié)構(gòu)的序列比較、同源模建、threading算法和折疊識(shí)別方法。盡管生物信息學(xué)發(fā)展迅猛,但是它仍然不能承載所有的研究信息。雖然通過(guò)在生物數(shù)據(jù)庫(kù)網(wǎng)站內(nèi)檢索可以得到一定的分析結(jié)果,但這個(gè)分析結(jié)果可能并不完整,比如細(xì)菌中的有些蛋白不僅對(duì)于機(jī)體來(lái)說(shuō)發(fā)揮正常代謝的功能,而且該蛋白還具有一定的致病性,而后者基本上無(wú)法通過(guò)生物信息學(xué)網(wǎng)站分析得到,這就需要閱讀大量的文獻(xiàn)以獲得更完整的信息。5蛋白質(zhì)組學(xué)研究蛋白質(zhì)組學(xué)的應(yīng)用為醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)等研究領(lǐng)域提供了新的思路,并且?guī)?lái)了較為豐碩的結(jié)果。如在癌癥研究方面,不僅發(fā)現(xiàn)了組織蛋白酶B、熱激蛋白27、mRNA連接蛋白P62等與癌變有關(guān)的蛋白,應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)還可能實(shí)現(xiàn)癌癥的早期診斷。在致病微生物方面同樣碩果累累。應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)研究豬鏈球菌時(shí)發(fā)現(xiàn)了烯醇酶、3-磷酸甘油醛脫氫酶、半胱氨酸蛋白酶,這些蛋白都與2型豬鏈球菌的致病性緊密相關(guān),被認(rèn)為是潛在的致病因子。蛋白質(zhì)組學(xué)的應(yīng)用可以實(shí)現(xiàn)高通量、高效率地對(duì)樣品進(jìn)行分析,并可以同時(shí)得到多個(gè)重要的研究結(jié)果。6回復(fù)突變體的質(zhì)譜鑒定近幾年發(fā)展起來(lái)的iTRAQ技術(shù)可能促使比較蛋白質(zhì)組學(xué)升級(jí)發(fā)展成為定量蛋白質(zhì)組學(xué)。該技術(shù)是在iCAT技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的。iTRAQ技術(shù)采用4種相對(duì)分子質(zhì)量均為145的等量異位標(biāo)簽,每個(gè)標(biāo)簽分子分別由相對(duì)分子質(zhì)量為114、115、116、117的報(bào)道基團(tuán),相對(duì)分子質(zhì)量分別為31、30、29