臨床免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷

臨床免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)2概述：免疫與疾病3免疫檢驗(yàn)可分為兩部分：一部分為利用免疫檢測(cè)原理與技術(shù)檢測(cè)免疫活性細(xì)胞、抗原、抗體、補(bǔ)體、細(xì)胞因子、細(xì)胞粘附分子等免疫相關(guān)物質(zhì)；另一部分是利用免疫檢測(cè)原理與技術(shù)檢測(cè)體液中微量物質(zhì)如激素、酶、血漿微量蛋白、血液藥物濃度、微量元素等。臨床免疫學(xué)與免疫檢驗(yàn)?zāi)甏鷮W(xué)者貢獻(xiàn)1894J.Bordet補(bǔ)體與溶菌活性1896H.Durham,M.vonGruber特異凝集反應(yīng)1896G.Widal,A.Sicad肥達(dá)試驗(yàn)1897R.Kraus沉淀試驗(yàn)1900J.Bordet,O.Gengou補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)1900K.Landsteiner人類ABO血型及其抗體1906A.Wassermann梅毒補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)1935M.Heidelberger,F.Kendall純化抗體,定量沉淀反應(yīng)1941A.Coons免疫熒光標(biāo)記1946J.Oudin凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)1948O.Ouchterlony,S.Elek雙擴(kuò)散沉淀反應(yīng)1953P.Grabar,C.Williams免疫電泳分析,Ig多樣性1960R.Yallow,S.Berson放射免疫標(biāo)記1966S.Avrames,J.Uriel,etal酶標(biāo)免疫技術(shù)1975G.Kohler,C.Milstein雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展史45一、血清IgG、IgA、IgM測(cè)定

IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白，是血液和細(xì)胞外液中的主要抗體，也是機(jī)體再次免疫的主要抗體。成人5.65～17.65g/L。

IgA分為血清型和分泌型，是參與黏膜局部免疫的主要抗體，主要存在于胃腸道和支氣管分泌液、初乳、唾液和淚液中。成人0.4～

3.5g/L。

IgM是分子量最大的免疫球蛋白，是個(gè)體發(fā)育過程中最早合成和分泌的抗體，也是抗原刺激誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答中最早出現(xiàn)的抗體。成人0.5～3.0g/L。6測(cè)吸光度計(jì)算抗原或抗體的含量抗體抗原免疫復(fù)合物的濃度與透射光的衰減呈正相關(guān)免疫比濁法7血清IgG、IgA、IgM測(cè)定的臨床意義低Ig血癥:先天性低Ig血癥（免疫缺陷?。┇@得性低Ig血癥(蛋白丟失)

高Ig血癥:多克隆Ig增高（感染）單克隆Ig增高（免疫增殖?。?二、血清IgD、IgE測(cè)定

正常人血清中IgD含量很低，膜結(jié)合型IgD(mIgD)構(gòu)成BCR，是B細(xì)胞分化發(fā)育成熟的標(biāo)志。

IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，主要由黏膜下淋巴組織中的漿細(xì)胞分泌，為親細(xì)胞抗體，引起I型超敏反應(yīng)；與機(jī)體抗寄生蟲免疫也可能有關(guān)。成人0.1～0.9mg/L。9ELISA間接法間接法檢測(cè)抗體1011血清IgD臨床意義IgD：生物功能不詳

增高：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、變態(tài)反應(yīng)性疾病、敗血癥、新生兒溶血病降低：意義不大12血清IgE臨床意義增高：超敏反應(yīng)疾病、寄生蟲感染、病毒感染、自身免疫性疾病。

降低：意義不大13血清M蛋白的檢測(cè)M蛋白：

(monoclonalprotein,M蛋白)，單克隆B細(xì)胞增殖產(chǎn)生的具有相同結(jié)構(gòu)和電泳遷移率的免疫球蛋白分子及其分子片段，其理化性質(zhì)十分均一，但是多無免疫活性，所以又稱副蛋白。14臨床意義見于單克隆免疫球蛋白增殖病。1.多發(fā)性骨髓瘤2.巨球蛋白血癥3.重鏈病4.輕鏈病15常用的免疫學(xué)方法

血清區(qū)帶電泳免疫電泳免疫固定電泳血清免疫球蛋白定量16血清蛋白區(qū)帶電泳正常參考值：Alb:57%-68%α1:1.0%-5.7%α2:4.9%-11.2%β:7%-13%γ:9.8%-18.2%各組分構(gòu)成：Alb：白蛋白α1：α1酸性糖蛋白；α1抗胰蛋白酶；α2：HP；CP；α2巨球蛋白；α脂蛋白；β：轉(zhuǎn)鐵蛋白；補(bǔ)體系統(tǒng)；β脂蛋白γ：IgG；IgM；IgA；IgD；IgE1718多發(fā)性骨髓瘤病人的血清蛋白電泳圖譜131234567891011121920免疫固定電泳結(jié)果圖示121免疫固定電泳結(jié)果圖示222二、血清補(bǔ)體檢查補(bǔ)體：具酶樣活性、不耐熱的糖蛋白其存在與抗原性異物的刺激無關(guān)在正常人血清中含量相對(duì)穩(wěn)定某些疾病時(shí)，含量及其活性可發(fā)生改變CH5023補(bǔ)體總活性測(cè)定方法是以紅細(xì)胞的溶解為指示，以50%溶血為判斷終點(diǎn)，稱為CH50。24CH50測(cè)定法的原理

應(yīng)用綿羊紅細(xì)胞（sheepredbloodcell,SRBC）和其相應(yīng)的抗體（溶血素），作為能誘導(dǎo)補(bǔ)體活化經(jīng)典途徑的指示物和激活劑。補(bǔ)體能使溶血素特異性結(jié)合的綿羊紅細(xì)胞溶解，當(dāng)溶血素和綿羊紅細(xì)胞濃度恒定時(shí)，溶血程度與補(bǔ)體含量和活性相關(guān)。將新鮮待檢血清作不同稀釋后，加入反應(yīng)體系，測(cè)定溶血程度，以50%溶血時(shí)的最小血清用量作為判定終點(diǎn)，可測(cè)知補(bǔ)體總?cè)苎钚浴?5【結(jié)果判斷】以使50％致敏羊紅細(xì)胞發(fā)生溶血的最小量血清作為補(bǔ)體的活性（U/ml），其計(jì)算如下：【參考范圍】本法測(cè)得血清總補(bǔ)體活性的正常參考值為50～100U/mL。26血管神經(jīng)性水腫補(bǔ)體含量和活性相關(guān)的疾病1．免疫相關(guān)性疾?。喝缱陨砻庖咝约膊r(shí)，C1、C2、C3、C4等缺陷；超敏反應(yīng)時(shí)（III型超敏反應(yīng)），C3a、C5a等過敏毒素的產(chǎn)生。2．與補(bǔ)體有關(guān)的遺傳性疾?。孩貱2、C3缺陷導(dǎo)致的嚴(yán)重感染；②與C1抑制物缺陷相關(guān)的遺傳性血管神經(jīng)性水腫③SLE患者出現(xiàn)的細(xì)胞表面CR1缺陷與C1C清除障礙④涉及I因子、H因子缺陷的腎小球腎炎；⑤DAF缺陷引起的陣發(fā)性血紅蛋白尿；⑥C1q缺陷表現(xiàn)的嚴(yán)重頑固性皮膚損害，以及C1q、C1r、C4、C2缺陷造成的免疫復(fù)合物性血管炎（包括腎炎）等。273．補(bǔ)體含量顯著降低的疾?。孩傧脑龆?免疫復(fù)合物形成導(dǎo)致的補(bǔ)體活化和消耗增多.如SLE.②補(bǔ)體的大量丟失:主要見于大面積燒傷、失血及腎臟病患者③補(bǔ)體合成不足:常見于肝臟疾病患者或營(yíng)養(yǎng)不良的病人。4．高補(bǔ)體血癥：偶見于感染恢復(fù)期和某些惡性腫瘤患者，正常妊娠時(shí)，也可觀察到補(bǔ)體值的增高。28C3檢測(cè)C3增高：見于腫瘤、慢性腎炎、急性感染、移植排斥反應(yīng)等。C3下降：見于RA和SLE等自身免疫性疾病、70%以上的急性腎小球腎炎早期，85%的鏈球菌感染后的腎炎患者。病毒型腎炎則85%以上含量正常，借此有助于腎炎的診斷。29三、細(xì)胞免疫檢測(cè)30（一)T細(xì)胞免疫檢測(cè)T細(xì)胞表面表達(dá)CD2是綿羊紅細(xì)胞（SRBC）受體(E受體)。T細(xì)胞與SRBC共同培養(yǎng)，SRBC圍繞T細(xì)胞形成玫瑰花結(jié)。利用此特性將T細(xì)胞和B細(xì)胞分離。311.E花環(huán)試驗(yàn)T細(xì)胞與SRBC一定比例混勻，4℃2h或過夜，T細(xì)胞E受體與SRBC結(jié)合形成以T細(xì)胞為中心，四周環(huán)繞SRBC的花環(huán)結(jié)構(gòu)，鏡檢計(jì)數(shù)可得總花環(huán)(Et)形成率，亦即T細(xì)胞的百分率。32E花環(huán)試驗(yàn)兩種細(xì)胞懸液混合后，不經(jīng)37℃和4℃作用立即反應(yīng)仍可發(fā)現(xiàn)有一部分淋巴細(xì)胞形成花環(huán)，稱為活躍(active)花環(huán)(Ea)，代表對(duì)SRBC親和力高的一個(gè)T細(xì)胞亞群。

Ea花環(huán)為Et花環(huán)的1/3～1/2，約20%～40%。Ea花環(huán)形成細(xì)胞比Et花環(huán)形成細(xì)胞更能反映受檢者的細(xì)胞免疫水平。33【結(jié)果判斷】在顯微鏡下，Wright-Giemsa染色淋巴細(xì)胞呈藍(lán)紫色或淡藍(lán)色，SRBC紅色圍繞淋巴細(xì)胞形成花環(huán)；呈現(xiàn)玫瑰花藍(lán)蕊紅瓣，清晰美觀。一個(gè)淋巴細(xì)胞吸附3個(gè)或3個(gè)以上SRBC即為E花環(huán)形成細(xì)胞(Erossetteformingcell，ERFC)。計(jì)數(shù)200個(gè)淋巴細(xì)胞，求出ERFC的百分率。34臨床意義降低：免疫缺陷性疾病，惡性腫瘤、某些病毒感染、大面積燒傷等。升高：甲亢、重癥肌無力、慢性活動(dòng)性肝炎、SLE、及器官移植排斥反應(yīng)等。352.T細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)細(xì)胞形態(tài)學(xué)：形態(tài)法（微量全血法）細(xì)胞功能學(xué)：1、3H-TdR摻入法

2、MTT比色法36形態(tài)法原理:T細(xì)胞載體外培養(yǎng)時(shí)，當(dāng)受到非特異性的PHA刺激后可轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，表現(xiàn)為細(xì)胞變大、細(xì)胞質(zhì)增多、出現(xiàn)空泡、核仁明顯等特征，通過淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的高低可以了解機(jī)體細(xì)胞免疫的功能。各轉(zhuǎn)化型淋巴細(xì)胞的比較3738結(jié)果判斷39轉(zhuǎn)化型淋巴細(xì)胞40【結(jié)果判斷】將血涂片分成頭、中、尾三處檢查，共計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞200個(gè)，并計(jì)算出淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化百分率?！緟⒖挤秶空Ｈ宿D(zhuǎn)化率為50～70%。41臨床意義1、檢測(cè)細(xì)胞免疫功能。2、用作染色體核型分析及器官移植配型。3、探討發(fā)病機(jī)制，如原/繼發(fā)性細(xì)胞免疫缺陷或功能低下者、惡性腫瘤淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率均低于正常值。42臨床意義4、觀察免疫藥物的療效，判斷預(yù)后。5、尋找Ⅳ型超敏反映的變應(yīng)原。6、判斷腫瘤治療療效。在惡性腫瘤治療后如轉(zhuǎn)化率從治療前的低下轉(zhuǎn)為正常，則預(yù)后良好，反之則預(yù)后不良。433H-TdR摻入法【原理】T細(xì)胞在PHA或特異抗原刺激下轉(zhuǎn)化為原淋巴細(xì)胞的過程中，其DNA合成增加，其轉(zhuǎn)化程度與DNA的合成呈現(xiàn)正相關(guān)，若將3H標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷摻入到培養(yǎng)系統(tǒng)，被轉(zhuǎn)化的T細(xì)胞攝入到DNA分子中。通過檢測(cè)增殖細(xì)胞中摻入的放射前體3H-TdR來測(cè)定DNA的合成。44【結(jié)果判斷】數(shù)據(jù)表示方式：一式3份試驗(yàn)組（PHA）cpm的平均值及陰性對(duì)照組（NaCl）cpm的平均值。刺激指數(shù)=試驗(yàn)組cpm的平均值/陰性對(duì)照組的cpm的平均值【參考范圍】刺激指數(shù)（SI）＞2為有意義，SI＜2為淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率低下。453.T細(xì)胞分化抗原測(cè)定方法：免疫熒光法；流式細(xì)胞術(shù)46間接熒光免疫法檢測(cè)T細(xì)胞表面CD抗原了解外周血T細(xì)胞數(shù)量和亞群變化。分離PBMC，與鼠抗人CD3、CD4和CD8的單克隆抗體進(jìn)行結(jié)合，熒光素標(biāo)記羊(或兔)抗鼠IgG第二抗體，借助單克隆抗體介導(dǎo)與PBMC結(jié)合。原理47484949流式細(xì)胞術(shù)（Flowcytometry，F(xiàn)CM）50FCM儀器的一般結(jié)構(gòu)1.流動(dòng)室與液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)2.激發(fā)光源與光束成形系統(tǒng)3.細(xì)胞信號(hào)檢測(cè)與分析處理系統(tǒng)

流式細(xì)胞儀系統(tǒng)流程：

標(biāo)本→激光系統(tǒng)→流動(dòng)系統(tǒng)→信號(hào)處理系統(tǒng)→放大系統(tǒng)→計(jì)算機(jī)系統(tǒng)→結(jié)果打印5152通道式分選電荷式分選細(xì)胞分選系統(tǒng)53特異染色的熒光信號(hào)5455臨床意義（1）CD3降低：見于自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等。（2）CD4降低：見于惡性腫瘤、遺傳性免疫缺陷癥、艾滋病、應(yīng)用免疫抑制劑者。（3）CD8減低：見于自身免疫性疾病或變態(tài)反應(yīng)性疾病。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理（4）CD4/CD8比值增高：見于惡性腫瘤、自身免疫性疾病、病毒性感染、變態(tài)反應(yīng)等；CD4/CD8比值減低：見于艾滋?。ǔ?lt;＜0.5）。（5）監(jiān)測(cè)器官移植排斥反應(yīng)時(shí)CD4/CD8比值增高，預(yù)示可能發(fā)生排斥反應(yīng)。（6）CD3、CD4、CD8較高且有CD1、CD2、CD5、CD7增高，則可能為T細(xì)胞型急性淋巴細(xì)胞白血病。56（二）B細(xì)胞免疫檢測(cè)B細(xì)胞表面有：膜表面免疫球蛋白(SmIg)、CD抗原、Fc受體、補(bǔ)體受體、EB病毒受體和小鼠紅細(xì)胞受體等標(biāo)志。571.B細(xì)胞表面免疫球蛋白（SmIg）檢測(cè)SmIg為B細(xì)胞所特有，是鑒定B細(xì)胞的可靠指標(biāo)。熒光素或酶標(biāo)記的抗人Ig抗體通過直接熒光免疫法或酶免疫組織化學(xué)法檢測(cè)SmIg，正常人外周血中SmIg+細(xì)胞一般為16%～28%，平均21%。58臨床意義主要用于檢測(cè)外周血B細(xì)胞的百分率。降低：免疫缺陷病升高：慢性淋巴細(xì)胞白血病、多毛細(xì)胞白血病及原發(fā)性巨球蛋白血癥。592.B細(xì)胞花環(huán)形成試驗(yàn)B細(xì)胞表面Fc受體，與免疫球蛋白Fc結(jié)合，抗體致敏的牛紅細(xì)胞或雞紅細(xì)胞與B細(xì)胞混合，B細(xì)胞周圍粘附牛紅細(xì)胞或雞紅細(xì)胞，染色后見紅色紅細(xì)胞與藍(lán)色淋巴細(xì)胞組成玫瑰花瓣?duì)?，形成花環(huán)?？贵w致敏牛紅細(xì)胞或雞紅細(xì)胞加入補(bǔ)體，形成紅細(xì)胞-抗體-補(bǔ)體復(fù)合物，再與B淋巴細(xì)胞混合，形成EAC花環(huán)。60臨床意義降低：免疫缺陷?。ㄔl(fā)/繼發(fā)）升高：淋巴增殖性疾?。粤馨图?xì)胞白血病、多毛細(xì)胞白血病）61B細(xì)胞花環(huán)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK以及部分T細(xì)胞也帶有Fc或補(bǔ)體受體。形成EA和EAC花環(huán)并非B細(xì)胞所特有，加上該類試驗(yàn)需制備新鮮指示物，操作麻煩，已被其他試驗(yàn)所取代，很少應(yīng)用。623.B細(xì)胞分化抗原測(cè)定方法：免疫熒光法、流式細(xì)胞術(shù)臨床意義：升高升高：急性淋巴細(xì)胞白血?。˙細(xì)胞型）、慢性淋巴細(xì)胞白血病和Burkitt淋巴瘤等。降低：無丙種球蛋白血癥、放化療及使用免疫抑制劑等。63（三）自然殺傷細(xì)胞（NK)免疫檢測(cè)NK細(xì)胞表面至少存在CD2、CD11b、CD11c、CD16、CD56和CD59等多種抗原，非NK細(xì)胞特有，少以CD系列抗原為指標(biāo)鑒定計(jì)數(shù)NK細(xì)胞，多檢測(cè)NK細(xì)胞活性。6465NK細(xì)胞殺傷活性的檢測(cè)NK細(xì)胞識(shí)別細(xì)胞表面自身HLAＩ類分子，抑制NK細(xì)胞的殺傷活性。若細(xì)胞表面HLAＩ類分子表達(dá)減少或消失，NK細(xì)胞被激活，通過細(xì)胞接觸機(jī)制和釋放穿孔素顆粒酶殺傷靶細(xì)胞。

66NK細(xì)胞殺傷活性的檢測(cè)

51Cr釋放試驗(yàn)：原理：用51Cr標(biāo)記靶細(xì)胞，若待檢細(xì)胞能殺傷靶細(xì)胞，則51Cr從靶細(xì)胞內(nèi)釋放出來，用γ計(jì)數(shù)儀測(cè)定靶細(xì)胞釋放的51Cr放射活性。靶細(xì)胞溶解破壞越多，51Cr釋放越多，上清液的放射活性越強(qiáng)，通過計(jì)算51Cr特異釋放率，判斷淋巴細(xì)胞的殺傷活性。

67臨床意義：降低：腫瘤、免疫缺陷病、某些病毒感染等升高：移植物抗宿主病68（四）細(xì)胞因子檢測(cè)定義：免疫細(xì)胞和某些非免疫細(xì)胞合成并分泌的一類具有多種生物功能的活性分子。生物功能有：

1.介導(dǎo)細(xì)胞間的信息交換與相互調(diào)節(jié)；

2.參與免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)過程；

3.刺激造血干細(xì)胞的再生和分化；

4.參與組織修復(fù)與傷口愈合等。69細(xì)胞因子綜合分類分類1白細(xì)胞介素（interleukin,IL）2集落刺激因子（colonystimulatingfactor，CSF）3干擾素（interferon，IFN）4腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor，TNF)5生長(zhǎng)因子(Growthfactor,GF)6趨化因子(chemokineCK)701.IL-2測(cè)定增高：自身免疫病、再障、多發(fā)性骨髓瘤、排斥反應(yīng)等。降低：免疫缺陷病、腫瘤、I型同糖尿病、某些病毒感染。712.腫瘤壞死因子測(cè)定腫瘤壞死因子(Tumornecrosisfactor,TNF)：可以直接誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的細(xì)胞因子。分類：TNF

：活化的單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生亦稱惡液質(zhì)素TNF：活化的T細(xì)胞產(chǎn)生，亦稱淋巴毒素。兩種TNF的分子量為51kD，結(jié)構(gòu)為同源三聚體，具有相同的結(jié)合受體和生物學(xué)活性。723.干擾素測(cè)定抵抗病毒的感染,干擾病毒復(fù)制的細(xì)胞因子，包括IFN

、、I型干擾素：干擾素α、β來源：白細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、病毒感染的組織細(xì)胞等功能：抗病毒感染、抗腫瘤生長(zhǎng)免疫調(diào)節(jié)(較弱）應(yīng)用：病毒感染性疾病等，肝炎、SARS73II型干擾素：干擾素γ（IFN)來源：活化的T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生功能：免疫調(diào)節(jié)提高單核巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞的抗原提呈能力增強(qiáng)Tc細(xì)胞和NK細(xì)胞的殺傷活性抑制TH2細(xì)胞形成，下調(diào)體液免疫應(yīng)答趨化作用抗病毒和抗腫瘤作用（次要）74臨床意義：增高：SLE、非活動(dòng)性RA、惡性腫瘤早期、急性病毒感染、再障等。減低：乙肝及攜帶者、哮喘、活動(dòng)性RA。75細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的流式細(xì)胞儀檢測(cè)用途：檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞內(nèi)多個(gè)細(xì)胞因子；并可區(qū)分表達(dá)特定細(xì)胞因子的細(xì)胞亞群。方法：用抗細(xì)胞因子抗體與細(xì)胞表面或胞內(nèi)特定亞群標(biāo)志組合，檢測(cè)不同細(xì)胞亞群細(xì)胞因子的分泌。76細(xì)胞因子分析圖R2ANDR377四、感染性疾病免疫學(xué)診斷（一）病毒性肝炎（二）細(xì)菌感染（三）病毒感染（四）真菌感染（五）其他78（一）病毒性肝炎甲型肝炎乙型肝炎丙型肝炎丁型肝炎戊型肝炎791.甲型肝炎病毒80012345678910111213WeekResponseClinicalillnessALTIgMIgGHAVinstoolInfectionViremiaEVENTSINHEPATITISAVIRUSINFECTION81檢驗(yàn)方法1.顯微鏡檢2.免疫學(xué)檢測(cè)(1)抗體檢測(cè)：①抗HAVIgM②抗HAVIgG或抗HAV總抗體(2)抗原檢測(cè)3.核酸檢測(cè)(1)核酸分子雜交法(2)RT-PCR82無論顯性感染還是隱性感染均能產(chǎn)生抗-HAV的IgM和IgG抗體抗-HAV的IgM在急性期和恢復(fù)早期出現(xiàn)陽性可作為甲肝的確診依據(jù)抗-HAV的IgG在恢復(fù)后期出現(xiàn)

有保護(hù)作用，維持終身

甲型肝炎免疫學(xué)檢測(cè)832.乙型肝炎病毒84病毒特性SHAPEANDSTRUCTURE

形態(tài)結(jié)構(gòu)Thereare3particlesinpatient’sbloodDaneparticleDane顆粒（大球形顆粒）smallsphericalparticle小球形顆粒tubuloseparticle管形顆粒85DaneparticleCompleteparticle,infectiveHBVspherical，doublecapsid球形,雙層衣殼。envelope包膜(脂質(zhì)雙層+蛋白質(zhì))HBsAg等capsid衣殼：HBcAg、HBeAginternal內(nèi)部：

DNA---circular,double-stranded環(huán)狀雙鏈

DNApolymerase多聚酶8687檢驗(yàn)方法

1.顯微鏡檢查由于電子顯微鏡檢查難以在臨床常規(guī)開展，故HBV感染一般不采用該類方法進(jìn)行。

882.乙型肝炎免疫學(xué)檢測(cè)HBV具有三個(gè)抗原抗體系統(tǒng)：

HBsAg與抗-HBsHBeAg與抗-HBeHBcHBcAg與抗HBcAg

891)HBsAg和抗-HBs

HBsAg是HBV感染后第一個(gè)出現(xiàn)的血清學(xué)標(biāo)志物。HBsAg陽性見于急性肝炎、慢性肝炎或無癥狀攜帶者。持續(xù)6個(gè)月以上則認(rèn)為轉(zhuǎn)為慢性肝炎。在急性感染恢復(fù)期可檢出抗-HBs，一般是在HBsAg從血清消失后發(fā)生抗-HBs血清陽轉(zhuǎn)。90核心窗口期(corewindow):從HBsAg消失到抗-HBs出現(xiàn)的這段間隔期。此期可以短至數(shù)天或長(zhǎng)達(dá)數(shù)月。抗-HBs是一種中和抗體，是乙肝痊愈的一個(gè)重要標(biāo)志?？?HBs對(duì)同型病毒的再感染具有保護(hù)作用，可持續(xù)數(shù)年?？?HBs出現(xiàn)是HBsAg疫苗免疫成功的標(biāo)志。912)HBeAg和抗-HBe

是HBV復(fù)制及血清具有傳染性的指標(biāo)。在潛伏期與HBsAg同時(shí)或在HBsAg出現(xiàn)稍后數(shù)天可在血清中檢出。HBeAg持續(xù)存在時(shí)間一般不超過10周，如超過則提示感染轉(zhuǎn)為慢性化。92抗-HBe出現(xiàn)于HBeAg陰轉(zhuǎn)后，其出現(xiàn)比抗-HBs晚但消失早。HBeAg陰轉(zhuǎn)一般表示病毒復(fù)制水平降低，傳染性下降，病變趨于靜止。933)HBcAg和抗-HBc

HBcAg是HBV存在和復(fù)制活躍的指標(biāo)。血液中的量微，不易檢測(cè)到HBcAg。抗-HBc出現(xiàn)較抗-HBs早得多，早期以IgM為主，隨后產(chǎn)生IgG型抗體。94抗-HBcIgM為急性HBV感染的指標(biāo)，但慢性乙肝患者也可持續(xù)低效價(jià)陽性，尤其是病變活動(dòng)時(shí)。急性感染恢復(fù)期和慢性持續(xù)性感染以IgG型抗-HBc為主，可持續(xù)存在數(shù)年?？?HBc不是保護(hù)性抗體，不能中和乙肝病毒。959697HBsAgHBeAg抗-HBs抗-HBe抗-HBc結(jié)果分析+----HBV感染或無癥狀攜帶者++---急性或慢性乙型肝炎，或無癥狀攜帶者++--+急性或慢性乙型肝炎（傳染性強(qiáng)，“大三陽”）+--++急性感染趨向恢復(fù)（“小三陽”）--+++既往感染恢復(fù)期--++-既往感染恢復(fù)期----+既往感染或“窗口期”--+--既往感染或接種過疫苗

乙型肝炎病毒抗原抗體系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果分析98前S1蛋白(pre-S1)/抗pre-S1:指位于HBV表面抗原蛋白1-120位氨基酸,具有肝細(xì)胞特異的糖蛋白受體的功能。

1.出現(xiàn)早,與HBeAg、HBVDNA顯著相關(guān);2.pre-S1和肝細(xì)胞結(jié)合,有助于病毒的入侵;3.干擾素療效的標(biāo)志;4.抗pre-S1預(yù)示預(yù)后99前S2蛋白(pre-S2)/抗pre-S2:指位于HBV表面抗原蛋白120-175

位氨基酸,具有多聚人血清白蛋白結(jié)合活性

1.作為HBV復(fù)制的指標(biāo);2.參與病毒的傳染性;3.抗pre-S2的檢出預(yù)示病毒清除.*抗pre-S1/抗pre-S2均為中和抗體.1003.核酸檢測(cè)

血清中存在HBVDNA是診斷HBV感染最直接的證據(jù)，可用定性的核酸雜交法、定量分支DNA(branchedDNA，bDNA)雜交法、定性PCR法、熒光定量PCR法檢測(cè)。HBVDNA檢測(cè)可作為HBsAg陰性HBV感染者的的診斷手段，也有助于HBV感染者傳染性大小的判斷、HBV基因變異研究以及抗病毒藥物臨床療效的評(píng)價(jià)等。但是HBVDNA陽性、及其定量檢測(cè)的拷貝數(shù)目多少并不與肝臟病理損害程度呈相關(guān)關(guān)系，故不能用HBVDNA的多少判定病情程度。101？患者一年前乙肝病毒感染血清標(biāo)志的檢測(cè)結(jié)果為,HBsAg(+),抗-HBs(-),HBeAg(+),抗-HBe(-),抗-HBcIgM/IgG均(+),HBVDNA4×105拷貝/ml。治療后此次復(fù)查結(jié)果為，抗-HBs（-），HBsAg（-），抗-HBe（-），HBeAg（-），抗-HBcIgM（-）/IgG（+），HBVDNA6×106拷貝/ml。其原因最可能是

A.乙肝恢復(fù)期B.病毒發(fā)生變異C.試劑盒失效D.操作失誤E.抗病毒治療有效1023.丙型肝炎病毒SerologicPatternofAcuteHCVInfectionwithProgressiontoChronicInfectionSymptoms+/-TimeafterExposureTiteranti-HCVALTNormal01234561234YearsMonthsHCVRNA

103104檢測(cè)方法HCV在宿主外周血中的含量及病毒抗原的含量非常低，常規(guī)方法很難直接檢測(cè)。目前臨床診斷HCV感染方法有兩大類：免疫學(xué)方法檢測(cè)抗-HCV及PCR法檢測(cè)HCVRNA。

105目前尚無證據(jù)說明抗-HCV是保護(hù)性抗體，抗-HCV存在僅表明HCV的感染。HCVRNA為丙型肝炎早期診斷的最有效指標(biāo)。在急性丙型肝炎過程，HCVRNA可以由陽性轉(zhuǎn)陰性，而多數(shù)慢性HCV感染者，其RNA可持續(xù)陽性。106

4.丁型肝炎病毒

是缺陷病毒，需以HBsAg構(gòu)成其衣殼來傳播單負(fù)鏈環(huán)狀RNA和δ

抗原（HDAg）107

根據(jù)與HBV感染的關(guān)系，可將HDV感染分為兩種類型：1.同步感染(coinfection)指與HBV同時(shí)或先后感染。同步感染可引起典型的急性病毒性肝炎，個(gè)別病例易發(fā)展為危及生命的重癥肝炎。2.重疊感染(superinfection)指在慢性HBV感染的基礎(chǔ)上發(fā)生HDV感染。在重疊感染中，HDV復(fù)制水平較高，極易導(dǎo)致慢性乙型肝炎患者癥狀加重和慢性化，與肝硬化的發(fā)生也密切相關(guān)。

感染類型108HBV-HDVCoinfection

TypicalSerologicCourse

TimeafterExposureTiteranti-HBsSymptomsALTElevatedTotalanti-HDVIgManti-HDVHDVRNAHBsAg109HBV-HDVSuperinfection

TypicalSerologicCourse

TimeafterExposureTiterJaundiceSymptomsALTTotalanti-HDVIgManti-HDVHDVRNAHBsAg110免疫學(xué)檢測(cè)

1.HDV抗原直接檢查血清中或肝活檢組織中HDV抗原，需用去垢劑處理去除HDV表面的HBsAg，然后再用熒光免疫或ELISA法檢測(cè)。血清中HDV抗原陽性主要見于急性丁型肝炎的早期。在慢性DHV感染中，HDV抗原可呈波動(dòng)性地反復(fù)陽性。1112.抗HDVIgM常采用捕捉法ELISA。在HDV急性感染時(shí)，抗HDVIgM是首先可以檢出的抗體。3.抗HDV總抗體常采用競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)。在慢性HDV感染中，其抗HDV總抗體持續(xù)保持高滴度，即使HDV感染終止后仍可存在數(shù)年。

1125.戊型肝炎免疫學(xué)檢測(cè)抗體檢測(cè)IgM型：診斷指標(biāo)，ELISA法IgG型：雙份血清，流行病學(xué)調(diào)查、既往感染或疫苗接種效果評(píng)價(jià)113（二）細(xì)菌感染免疫學(xué)診斷

人感染病原體產(chǎn)生特異性抗體可持續(xù)一段時(shí)間，→現(xiàn)癥診斷，疾病追溯。1.血清抗鏈球菌溶血素“O”試驗(yàn)：A群溶血性鏈球菌近期感染，活動(dòng)性風(fēng)濕熱、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、心肌炎、急性腎小球腎炎、急性上呼吸道感染、皮膚和軟組織的感染等正常參考范圍：膠乳凝集法<500U

免疫比濁法≤200IU/ml1142、肥達(dá)反應(yīng)利用凝集試驗(yàn)，作為傷寒、副傷寒的輔助診斷。正常參考范圍：傷寒O凝集效價(jià)<1:80

傷寒H凝集效價(jià)<1:160

副傷寒A.B.C<1:80

雙份血清效價(jià)增高>4倍，診斷價(jià)值較大。1153.結(jié)核分枝桿菌抗體和DNA測(cè)定：結(jié)核菌致病可能與免疫損傷密切相關(guān)（Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)）呈顯感染免疫（有菌免疫）。

免疫學(xué)檢測(cè)：抗PPD-IgG（ELISA：陰性），結(jié)核菌素皮試（＞5mm<15mm）。

DNA檢測(cè)：PCR116（三）病毒感染ToRCH

一組可通過宮內(nèi)感染直接影響胎兒發(fā)育，并引起相似臨床癥狀和體征如流產(chǎn)、或死胎、先天性畸形和智力低下等的感染因素。117“To”代表弓形體(toxplasma,TOX)“R”代表風(fēng)疹病毒

(rubellavirua,RV)“C”代表巨細(xì)胞病毒

(cytomegalovirus,CMV)“H”代表單純皰疹病毒

(herpssimplexvirus,HSV)118

TORCH的應(yīng)用孕前(準(zhǔn)備懷孕前雙方)孕早期新生兒臍血幼兒時(shí)預(yù)防接種時(shí)119弓形體病（Toxoplasmosis）人畜共患病原體之一。人(免疫功能低下)感染，易發(fā)病。臨床弓形體病分先天性(經(jīng)胎盤)和獲得性(水平傳播)。蟲體抗原和循環(huán)抗原的檢測(cè)較抗體出現(xiàn)早。120檢測(cè)方法1.標(biāo)記抗體直接檢出其抗原或利用分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)出弓形體DNA。2.弓形體抗體的檢出雖能診斷其感染與否，但不能判斷此感染是否處于急性期，對(duì)胎兒的影響程度等。121①特異性IgM型抗體的檢出一般代表近期或隱性-繼發(fā)活動(dòng)性感染存在。但新近有報(bào)道弓形體IgM性抗體持續(xù)時(shí)間很長(zhǎng)的現(xiàn)象（緩解期或初發(fā)感染后1～2年）。因此，只憑單一的IgM抗體陽性就作為疾病的診斷具片面性。由于IgM型抗體不能通過胎盤，一旦臍血中檢出對(duì)先天性感染的診斷有意義。②特異性IgG型抗體的檢出只證明既往感染，除非恢復(fù)期血清中抗體的滴度是/或超過初發(fā)期的4倍。122臨床意義孕早期流產(chǎn)胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩胎兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害、眼損害123風(fēng)疹病毒感染

124

嬰幼兒風(fēng)疹，俗稱德國(guó)麻疹（Germanmeasles）由，風(fēng)疹病毒所致。屬于RNA病毒,僅一種血清型。臨床上大多數(shù)無癥狀(隱性感染),少數(shù)顯性感染表現(xiàn):發(fā)燒、軀體皮疹、枕后淋巴結(jié)腫脹。先天性風(fēng)疹綜合征(母嬰垂直傳播)。125先天性白內(nèi)障(cataracts)先天性心臟病(heartdefects)神經(jīng)性耳聾（sensorineuraldeafness）智力低下（mentalretardation）126臨床意義IgM陽性：有近期感染，必要時(shí)終止妊娠IgG陽性：既往感染過風(fēng)疹病毒，有免疫力。127巨細(xì)胞病毒感染的特點(diǎn)1、感染廣泛（2y，≥90%）2、隱性感染(obscureinfection)3、潛伏感染(latentinfection)4、多途徑傳播5、宿主的正常免疫功能起制約作用6、臨床多見潛伏-再激活(reactive)7、呈多臟器侵犯128HCMV的潛伏—再激活

宿主(健康或正常)病毒潛伏(無癥狀)-------------------------------------------

平衡狀態(tài)(打破平衡)↗|

生物/物理/化學(xué)的|

等等|

潛伏的病毒-----------激活(復(fù)制)129

病毒抗原血癥的檢測(cè)

130抗體檢測(cè)IgM陽性：近期感染IgG陽性：既往感染IgG、IgM陽性：潛伏再激活感染131臨床意義早產(chǎn)、胎兒發(fā)育遲緩、先天畸形免疫力低下者：間質(zhì)性肺炎、感染、腦炎、心包炎、影響移植器官存活132HSV-1型所致唇皰疹133134TORCH檢測(cè)：IgM抗體出現(xiàn)均應(yīng)做咨詢。IgG抗體應(yīng)注意滴度變化，滴度低且無變化為既往感染，雙份血清滴度升高4倍以上。135（四）真菌感染免疫學(xué)診斷意義有限136血清1-3-?-D葡聚糖(G試驗(yàn));

血清半乳甘露聚糖(GM試驗(yàn)):

原理:利用1-3-?-D葡聚糖和半乳甘露聚糖是曲霉的細(xì)胞壁組分。方法:ELISA137（五）其他感染免疫學(xué)診斷

性傳播疾?。阂略w、支原體、梅毒螺旋體、淋球菌、HIV引起。

1衣原體抗體測(cè)定沙眼衣原體(CT)是引起性傳播疾病常見的病原體之一。①IgM陽性提示近期有CT感染，有利于早期診斷②IgG在發(fā)病后6－8周出現(xiàn)，持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)；提示曾有過CT感染138

免疫層析法檢測(cè)沙眼衣原體抗原

1392支原體血清學(xué)檢測(cè)：肺炎支原體、解脲人原體、人型支原體和生殖道支原體。單份血清效價(jià)＞1：64－128者或雙份血清有4倍以上增長(zhǎng)者，有診斷意義。3梅毒螺旋體抗體測(cè)定梅毒診治的參考指標(biāo):

非特異性試驗(yàn)（篩選）：快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)（RPR)

特異性試驗(yàn)（確診）：蒼白螺旋體亞種血凝試驗(yàn)（TPHA）梅毒螺旋體反應(yīng)素試驗(yàn)敏感性高；定性試驗(yàn)陽性的情況下，必須進(jìn)行確診試驗(yàn)，若陽性可確診梅毒。140快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)檢測(cè)梅毒螺旋體

(正向間接)1414.HIV檢測(cè)病毒標(biāo)志檢測(cè)：分離病毒組分免疫標(biāo)志檢測(cè)非特異性檢測(cè)：T細(xì)胞亞群等142143144免疫標(biāo)志:（1）HIV抗原檢測(cè)常用ELISA檢測(cè)HIV的核心抗原p24，在急性感染期和AIDS晚期可檢測(cè)該抗原，可作為早期和晚期診斷的間接指標(biāo)。在潛伏期該抗原常為陰性。（2）HIV抗體檢測(cè)

HIV感染后2～3個(gè)月產(chǎn)生抗體，并可持續(xù)到終身，是重要的免疫檢測(cè)指標(biāo)。常用檢測(cè)方法ELISA法，主要檢測(cè)p24和gp120抗體，有較好的敏感性。為HIV感染的初篩試驗(yàn)。145（3）確證試驗(yàn)由于HIV的抗原與其他逆轉(zhuǎn)錄病毒抗原存在交叉反應(yīng)。因此，對(duì)初篩試驗(yàn)連續(xù)2～3次陽性者需應(yīng)用免疫印跡法（westernblot,WB）作確證試驗(yàn)，檢測(cè)不同結(jié)構(gòu)蛋白的抗體，予以確證。我國(guó)判定陽性標(biāo)準(zhǔn)是符合以下結(jié)果一項(xiàng)者判為陽性：①至少有兩條EnV帶（gp41/gp120/gp160）；②至少一條EnV帶和一條p24帶同時(shí)出現(xiàn)。146（4）T淋巴細(xì)胞及其亞群（CD4+和CD8+T細(xì)胞）檢查T淋巴細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞是反映HIV感染患者免疫系統(tǒng)損害狀況的主要指標(biāo)，是作為AIDS臨床分期和預(yù)后判斷的重要依據(jù)。AIDS患者T淋巴細(xì)胞總數(shù)↓，常＜1.5×109/L,CD4+T細(xì)胞數(shù)絕對(duì)值減少至＜(2～4)×108/L,CD4+T/CD8+比值減少，如＜1（正常＞2）表示免疫狀況不佳，比值越低，細(xì)胞免疫缺陷越重。常用檢驗(yàn)方法：間接免疫熒光法、流式細(xì)胞法等。HIV抗體確認(rèn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果a強(qiáng)陽性對(duì)照（HIV-1和HIV-2）b弱陽性對(duì)照（HIV-1）c陰性對(duì)照d典型的HIV-2血清陽性反應(yīng)abcdgp160gp120p66p55p51gp41p39p31P24p17

血清對(duì)照HIV-2特異帶147148什么是腫瘤？為什么會(huì)發(fā)生腫瘤？

腫瘤是正常組織異常增生所形成的贅生物。按其所引起的后果不同可分為惡性和良性兩種。五、腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)

實(shí)踐表明，內(nèi)在的遺傳因素、免疫狀態(tài)和外部的誘變因子，是構(gòu)成腫瘤發(fā)生發(fā)展的基礎(chǔ)和條件。其中，機(jī)體的免疫狀態(tài)，尤其是細(xì)胞免疫功能的強(qiáng)弱，已被視為是否發(fā)生腫瘤的重要內(nèi)在因素。149臨床：病史、體癥物理檢查：X光、CT、磁共振、B超、術(shù)前：穿刺、刮片、拉網(wǎng)術(shù)后：組織切片免疫：腫瘤抗原和代謝物測(cè)定分子生物：腫瘤相關(guān)基因分析腫瘤診斷輔助病理150腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)及臨床意義腫瘤標(biāo)志物

由腫瘤細(xì)胞直接產(chǎn)生或由非腫瘤細(xì)胞經(jīng)腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)后合成的物質(zhì)。檢測(cè)血液或其他體液中的腫瘤標(biāo)志物及細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞表面的腫瘤標(biāo)志物，根據(jù)其濃度有可能對(duì)腫瘤的存在、發(fā)病過程和預(yù)后做出判斷。151腫瘤標(biāo)志物的研究回顧第一階段：1846年HenryBence-Jones發(fā)現(xiàn)本周氏蛋白，此蛋白由分化不良的漿細(xì)胞合成與分泌，與多發(fā)性骨髓瘤有關(guān)。以后不少由腫瘤分泌或與腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)的標(biāo)志物陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)。然而，腫瘤標(biāo)志物真正用作診斷工具起始于1963年。第二階段：Abeler等于1963年發(fā)現(xiàn)甲胎蛋白，目前它已被公認(rèn)為診斷原發(fā)性肝癌的可靠指標(biāo)。1965年Gold＆Freedman從結(jié)腸癌和胚胎組織中提取到癌胚抗原。152第三階段：糖類腫瘤抗原的發(fā)現(xiàn)。自八十年代以來，由于單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展，得到了一系列的腫瘤相關(guān)抗原，如CA19-9、CA125、前列腺特異性抗原（PSA）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）等。第四階段：九十年代，癌基因和抑癌基因等分子標(biāo)志的出現(xiàn)。腫瘤標(biāo)志物的研究回顧

153理想的腫瘤標(biāo)志物特異性強(qiáng)，只由腫瘤組織產(chǎn)生并分泌到體液中，而不存在于正常組織或良性疾病，鑒別腫瘤和非腫瘤患者應(yīng)100%準(zhǔn)確敏感性好，可用于小腫瘤的早期診斷或篩選有器官特異性，能對(duì)腫瘤定位血清中濃度與腫瘤大小、臨床分期相關(guān)，可用以判斷預(yù)后半衰期短，能反映腫瘤的動(dòng)態(tài)變化，監(jiān)視治療效果、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移測(cè)定方法精密度、準(zhǔn)確性高，操作簡(jiǎn)便，價(jià)格低廉

154

腫瘤胚胎抗原糖類腫瘤標(biāo)志物酶類腫瘤標(biāo)志物激素類腫瘤類標(biāo)志物基因類腫瘤標(biāo)志物其他腫瘤標(biāo)志物的種類（根據(jù)性質(zhì)分類）155幾種常見的腫瘤標(biāo)志物及臨床意義1.甲胎蛋白（AFP）1963年在肝癌患者血清中發(fā)現(xiàn)，70KD的糖蛋白，由胚胎肝細(xì)胞和卵黃囊細(xì)胞產(chǎn)生并出現(xiàn)于胎兒血清中，臍血中含量為10000-50000μg/L，出生后1年內(nèi)迅速降低至基礎(chǔ)水平4-10μg/L，用一般免疫學(xué)方法不能檢出肝細(xì)胞癌變時(shí)，病人血清中AFP增高，肝癌切除后降低，故AFP是診斷原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌最靈敏、最特異的腫瘤標(biāo)志物。156正常濃度:<20μg/L異常濃度100-350懷疑是肝細(xì)胞癌350-500可能是肝細(xì)胞癌500-1000很可能是肝細(xì)胞癌>1000肝細(xì)胞癌AFP的含量變化與肝細(xì)胞癌157

AFP測(cè)定診斷原發(fā)性肝癌的標(biāo)準(zhǔn)：AFP＞500μg/L持續(xù)4周AFP由低濃度逐漸升高不降A(chǔ)FP在200-500μg/L持續(xù)8周以上標(biāo)準(zhǔn)適用于在排除妊娠和生殖腺胚胎瘤的基礎(chǔ)上臨床意義：甲胎蛋白與肝癌158AFP的動(dòng)態(tài)變化與病情有一定的關(guān)系。一般認(rèn)為AFP值高者預(yù)后不佳。AFP在一定程度上反映腫瘤的大小。AFP含量上升提示病情惡化，其動(dòng)態(tài)變化是顯示治療效果的一項(xiàng)敏感指標(biāo)。通常手術(shù)切除肝癌后二個(gè)月，AFP值應(yīng)降至2０μg/L以下，若降的不多或降而復(fù)升，提示切除不徹底或有復(fù)發(fā)可能。159AFP在各類肝病中的陽性率

病種<100μg/L<200μg/L>200μg/L急肝遷肝肝硬化83.59085.992.599.697.57.50.42.5原發(fā)性肝癌2.96.993.1160

孕婦血清AFP含量變化呈現(xiàn)一定規(guī)律性，從妊娠第10周起逐漸上升，到32-36周時(shí)達(dá)到AFP高峰，然后又逐漸下降。如果孕婦血清中AFP含量明顯高于預(yù)期值，可能會(huì)出現(xiàn)胎兒死亡或遺傳性缺陷，如神經(jīng)管畸形、無腦兒、脊柱裂等。

臨床意義：甲胎蛋白與胚胎發(fā)育1612.癌胚抗原（CEA）1965年在結(jié)腸和直腸腺癌組織中檢出，以后又在內(nèi)胚層來源的其他惡性腫瘤（如食道、胃、肝、胰等處腫瘤）中發(fā)現(xiàn)。在2-6個(gè)月胎兒的肝、胰、腸等組織中存在，180-200KD糖蛋白。正常情況下，消化道細(xì)胞分泌CEA進(jìn)入腸腔，血清中CEA水平極低（2μg/L）。細(xì)胞癌變后，分泌特性發(fā)生變化，CEA可被分泌進(jìn)入血液而使血清中CEA水平增高。162最初認(rèn)為CEA是結(jié)、直腸癌的特異性標(biāo)志物，其后發(fā)現(xiàn)在由內(nèi)胚層細(xì)胞分化而來的其他惡性腫瘤也可呈陽性。在一些良性腫瘤和一些非腫瘤性疾病，血液中CEA濃度也會(huì)增高。它是一種重要的腫瘤相關(guān)抗原，但尚不能作為腫瘤診斷的特異指標(biāo)。163CEA在惡性腫瘤中的陽性率順序結(jié)腸癌（66-90%）胃癌（60-90％）胰腺癌（70-80％）小腸腺癌（60-83％）肺癌（56-80％）肝癌（62-75％）乳腺癌（40-68％）泌尿系癌腫（31-46％）1641.CEA屬于非器官特異性腫瘤相關(guān)抗原，分泌CEA的腫瘤大多位于管腔臟器，如消化道、呼吸道、泌尿道等腫瘤患者血清CEA均有增高。2.一些非腫瘤性疾病，如消化道炎癥（如結(jié)腸炎、胰腺炎等）、肝硬化、腸息肉等患者，CEA水平也可增高，但一般不大于25μg/L。臨床意義1653.測(cè)定血液和有關(guān)體液中CEA含量，可作為輔助診斷惡性腫瘤的一種指標(biāo)，對(duì)可疑人群或腫瘤高發(fā)地區(qū)人群做CEA普查，對(duì)腫瘤預(yù)防、早期有效治療有積極和實(shí)用價(jià)值。4.CEA測(cè)定對(duì)腫瘤病人的預(yù)后判斷、療效觀察、監(jiān)視病灶的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移等均為十分有用的指標(biāo)。166術(shù)前CEA濃度越低，說明病期越早，腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的可能越小，其生存時(shí)間越長(zhǎng)；反之，術(shù)前CEA濃度越高說明病期較晚，難于切除，預(yù)后差手術(shù)完全切除者，一般術(shù)后6周CEA恢復(fù)正常術(shù)后有殘留或微轉(zhuǎn)移者，可見下降，但不恢復(fù)正常無法切除而作姑息手術(shù)者，一般呈持續(xù)上升167CEA檢測(cè)還可對(duì)經(jīng)手術(shù)或其他方法治療使CEA恢復(fù)正常的病人，進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪，監(jiān)測(cè)其復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。通常采用以下方案：術(shù)后第六周一次。其后三年，每月一次。３－5年每三月一次。５－７年每半年一次。７年后一年一次。若發(fā)現(xiàn)升高，兩周后再測(cè)一次，兩次都升高則提示復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。1683.糖類抗原

（carbohydrateantigen）（1）糖類抗原CA199

屬神經(jīng)節(jié)苷脂，存在于胎盤或某些腫瘤中，在病人血清中呈類粘蛋白的糖蛋白成分，是一種胃腸道惡性腫瘤的相關(guān)抗原。169臨床意義1.CA199對(duì)胰腺、胃及肝膽管的腫瘤具有高敏感性，是胰腺癌較為可靠的診斷指標(biāo)，其陽性率為80-90%。其他消化道癌CA199也會(huì)升高，如肝癌、結(jié)腸腺癌等。2.急性膽囊炎與肝硬變患者CA199也可能升高，與CEA聯(lián)合檢測(cè)可分辨膽結(jié)石與膽囊癌。此外，在胃液與血清中測(cè)定CA199及CEA，可提高篩選胃癌的敏感性和特異性。

170（2）糖類抗原CA1251981年Bast等用卵巢漿性乳頭狀囊腺癌細(xì)胞制備出單抗OC125，由它識(shí)別的抗原稱為CA125，高分子糖蛋白，200KD，僅微量存在于健康成人上皮組織中，而不存在于正常卵巢中，也是一種腫瘤相關(guān)抗原。171臨床意義1.

對(duì)卵巢上皮腺癌的診斷及其嚴(yán)重程度判斷、療效監(jiān)測(cè)和腫瘤復(fù)發(fā)具有較高的靈敏度、特異性和臨床符合率，其陽性率為82-96%。2.對(duì)其他婦科惡性腫瘤（如子宮內(nèi)膜癌、子宮肉瘤、輸卵管癌、宮頸癌）等有輔助診斷價(jià)值。1723.CA125抗原的水平與卵巢功能密切相關(guān)，其含量隨月經(jīng)周期有輕度變化。妊娠及子宮內(nèi)膜異位癥等良性婦科疾病血清CA125水平亦可有所升高，但多不大于100U/ml4.血清CA125水平在胃腸道惡性腫瘤（如胰腺癌、結(jié)直腸癌、膽管癌、肝癌）、肺癌、乳腺癌患者也可見升高。此外在肝硬化患者（尤其失代償期患者）亦可見血清CA125水平明顯升高，應(yīng)予以鑒別173（3）糖類抗原CA72-4(胃癌相關(guān)抗原)CA72-4是胃腸道和卵巢癌標(biāo)志物,為一高分子量類粘蛋白分子。[臨床意義]1.CA72-4對(duì)胃癌的檢測(cè)特異性較高，明顯優(yōu)于CA199和CEA，故又稱為胃癌相關(guān)抗原2.與CA125聯(lián)合檢測(cè)可作為卵巢腫瘤的標(biāo)志，若兩者均陽性174（4）糖類抗原CA153(乳腺癌相關(guān)抗原)

CA153是一種高分子糖蛋白，在乳腺癌患者血清中可發(fā)現(xiàn)高水平的CA153，故又稱為乳腺癌相關(guān)抗原[正常值]

<25U/ml（15.3±5.9U/ml），性別無差異，一般應(yīng)建立本實(shí)驗(yàn)室的參考值

175臨床意義

1．乳腺癌的輔助診斷和預(yù)后判斷。若大于50U/ml，提示預(yù)后差，有可能轉(zhuǎn)移，但對(duì)早期乳腺癌敏感性不高。2.CA15-3含量與腫瘤大小十分相關(guān)，75-95%腫瘤浸潤(rùn)者均伴有含量增高>50U/ml。176臨床意義

3.治療監(jiān)控：CA15-3可作為生物學(xué)標(biāo)志物用以最早最有效觀察治療效果。4.探測(cè)復(fù)發(fā)：血清CA15-3是檢測(cè)乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的最佳指標(biāo)，其含量增高可在顯現(xiàn)臨床癥狀之前3-6月，若標(biāo)志物含量增高，尚未呈現(xiàn)臨床演進(jìn)癥狀須進(jìn)行非常近期隨訪。5.其它腫瘤檢測(cè)：卵巢癌、肺癌、子宮頸癌177（5）前列腺特異性抗原（PSA）PSA是前列腺上皮細(xì)胞的標(biāo)志蛋白，是由胞內(nèi)漿小泡產(chǎn)生的糖蛋白，34KD，僅存在于前列腺腺泡、管道上皮及精液中，不存在于其他組織及非前列腺的惡性腫瘤中。血清PSA測(cè)定被認(rèn)為是前列腺癌診斷的靈敏指標(biāo)美國(guó)泌尿協(xié)會(huì)和腫瘤協(xié)會(huì)已推薦50歲以上的男性，每年作一次直腸指診和血清PSA測(cè)定，以便早期發(fā)現(xiàn)前列腺癌

[正常值]0-4μg/L178（5）人絨毛膜促性腺激素β亞基（HCG-β）HCG是由胎盤絨毛滋養(yǎng)葉細(xì)胞合成與分泌的糖蛋白，由α及β兩個(gè)亞基組成的多肽，36KD。而β亞基系人絨毛膜促性腺激素的生物活性所在。測(cè)定HCG-β能準(zhǔn)確反映HCG的水平，提高診斷的特異性，降低交叉反應(yīng)

[正常值]

本測(cè)定對(duì)健康婦女黃體生成激素峰值的交叉反應(yīng)為小于3.1U/ml，故3.1U/ml可為臨界值179臨床意義1.早孕診斷，正常育齡婦女的血清HCG-β含量大于5U/ml，提示早孕。2.作為絨毛膜上皮細(xì)胞癌、葡萄胎的早期診斷指標(biāo)。陽性值大于5U/ml，可疑值為3-5U/ml。3.可用于對(duì)絨毛膜細(xì)胞癌、葡萄胎手術(shù)后化療觀察，是有效隨訪監(jiān)測(cè)的手段。180檢測(cè)方法ELISA化學(xué)發(fā)光（直接化學(xué)發(fā)光、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析、電化學(xué)發(fā)光酶免疫分析）181腫瘤標(biāo)志物的臨床應(yīng)用1.惡性腫瘤高危人群的早期檢測(cè)2.診斷中的應(yīng)用3.預(yù)后評(píng)價(jià)4.治療監(jiān)測(cè)5.腫瘤復(fù)發(fā)的早期檢測(cè)1821.惡性腫瘤高危人群的早期檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物普查五項(xiàng)原則：應(yīng)十分清楚該腫瘤的發(fā)病率該腫瘤標(biāo)志物應(yīng)能檢測(cè)早期腫瘤該腫瘤的早期治療比晚期治療更經(jīng)濟(jì)有效測(cè)定方法的靈敏度、特異性和重復(fù)性良好普查所需費(fèi)用能被接受1832.診斷中的應(yīng)用（1）定位腫瘤標(biāo)志物基本上不能對(duì)腫瘤定位。極少數(shù)腫瘤標(biāo)志物如PSA具器官特異性，但不具腫瘤特異性。184（2）確診通常不能進(jìn)行確診。因?yàn)槟[瘤標(biāo)志物無足夠的靈敏度，不能排除假陰性結(jié)果。本周蛋白(多發(fā)性骨髓瘤）、AFP（肝癌）、

-HCG（絨毛膜癌）和降鈣素（甲狀腺C-細(xì)胞癌）等有助確診。185（3）分期大多數(shù)腫瘤標(biāo)志物與疾病分期有關(guān)，且濃度與腫瘤大小通常存在關(guān)聯(lián)。但并不能根據(jù)個(gè)體測(cè)得值來判斷腫瘤大小，也不能以腫瘤標(biāo)志物濃度精確指示各期腫瘤，因?yàn)楦髌谀[瘤的腫瘤標(biāo)志物濃度范圍極廣。1863.治療監(jiān)測(cè)1871884.預(yù)后評(píng)價(jià)術(shù)前濃度增高，術(shù)后降低，表示這些腫瘤標(biāo)志物對(duì)此腫瘤有預(yù)后價(jià)值。在病程監(jiān)測(cè)過程中，腫瘤標(biāo)志物的濃度增高或降低與疾病的預(yù)后密切相關(guān)。1895.腫瘤復(fù)發(fā)的早期檢測(cè)68101214年總生存期無癥狀期

腫瘤標(biāo)志物治療復(fù)發(fā)腫瘤病理組織學(xué)確診手術(shù)復(fù)發(fā)出現(xiàn)臨床癥狀預(yù)測(cè)自檢間隔期190腫瘤標(biāo)志物的其它幾個(gè)問題正常參考范圍的界定方法學(xué)不同而導(dǎo)致的結(jié)果的不統(tǒng)一腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合檢測(cè)191腫瘤標(biāo)志物的正常參考范圍

目前通常以正常人群的95%的可信區(qū)間為正常參考范圍，對(duì)于腫瘤標(biāo)志物，由于雙側(cè)通常是無意義的，因此一般取右單側(cè)95%為正常參考范圍。即有5%的正常人在檢測(cè)時(shí)其值會(huì)超過正常參考范圍，引起臨床的假陽性結(jié)果。192腫瘤標(biāo)志物的正常參考范圍

研究表明，正常參考范圍對(duì)于腫瘤標(biāo)志物來講是意義不大（1）陽性結(jié)果提示該病人罹患腫瘤的概率（2）陰性結(jié)果提示該病人不罹患腫瘤的概率

193腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合應(yīng)用同一腫瘤可以出現(xiàn)幾種腫瘤標(biāo)志物，又可在不同腫瘤出現(xiàn)同一種腫瘤標(biāo)志物。不同的腫瘤患者體內(nèi)，腫瘤標(biāo)志物的質(zhì)和量變化也較大。單獨(dú)檢測(cè)一種腫瘤標(biāo)志物，可能會(huì)因?yàn)闇y(cè)定方法的靈敏度不夠而出現(xiàn)假陰性。聯(lián)合檢測(cè)多種腫瘤標(biāo)志物有利于提高腫瘤的檢出率。腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合應(yīng)用的基本原則是選用不同性質(zhì)、互補(bǔ)的、相對(duì)敏感的3－4個(gè)腫瘤標(biāo)志物。常用腫瘤標(biāo)志物的臨床應(yīng)用病理診斷結(jié)果腫瘤標(biāo)志物肺癌Cyfra21-1,NSE,CEA,SCC肝癌AFP,CA19-9,CEA,ferritin食管癌SCC,Cyfra21-1胃癌CA72-4,CA19-9,CEA結(jié)、直腸癌CEA，CA19-9，CA72-4,AFP胰腺癌CA19-9,CEA,CA125,CA50乳腺癌ER,PR,HER-2,CA15-3,CEA,Cyfra21-1,ferritin卵巢癌CA125,CA72-4宮頸癌SCC,Cyfra21-1子宮內(nèi)膜癌CA125,CEA絨毛膜上皮癌β-HCG前列腺癌PSA,fPSA睪丸癌AFP,β-HCG194195六、自身免疫性疾病的檢測(cè)自身免疫耐受遭到削弱或破壞時(shí)，機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)自身成分發(fā)生免疫應(yīng)答，產(chǎn)生了自身抗體或自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞，這種現(xiàn)象稱為自身免疫(autoimmunity)。當(dāng)某種原因使自身免疫應(yīng)答超過一定強(qiáng)度，導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生病理改變和功能障礙，這種因機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)自身成分發(fā)生免疫應(yīng)答引起的疾病稱為自身免疫性疾病(autoimmunedisease,AID)。196（一）類風(fēng)濕因子檢測(cè)RA:是常見的關(guān)節(jié)及全身系統(tǒng)性自身免疫疾病，國(guó)內(nèi)有350－400萬病人，無有效治療方法。197類風(fēng)濕因子(rheumatoidfactor,RF)是抗變性IgG的自身抗體，靶抗原是變性IgG的Fc段。該抗體無種屬特異性，有IgG、IgM、IgD、IgA、IgE五種類型，主要為IgM型。RF能與人和動(dòng)物變性IgG結(jié)合而不與正常IgG發(fā)生凝集反應(yīng)。198

（1）RF在RA、SLE等多種自身免疫性疾病患者中均可被檢出。疾病陽性率（%）RA79SLE30SS95Sclerosis80MCTD25

臨床意義199（2）RF滴度與RA患者臨床表現(xiàn)呈正相關(guān)，IgM-RF效價(jià)>80IU/ml并伴有嚴(yán)重關(guān)節(jié)功能障礙時(shí)通常提示患者預(yù)后不良。

（3）IgG-RF與RA患者的滑膜炎、血管炎和關(guān)節(jié)癥狀密切相關(guān)，常伴隨IgM-RF同時(shí)出現(xiàn)，在正常人及非RA患者中很難檢出。

（4）IgA-RF與RA患者關(guān)節(jié)癥狀的嚴(yán)重程度及骨質(zhì)破壞有顯著相關(guān)性。200（二）血清抗核抗體的檢測(cè)抗核抗體（ANA）廣義地指抗細(xì)胞核內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總和。其抗原不僅存在于細(xì)胞核內(nèi)，也可以存在于細(xì)胞質(zhì)或其他細(xì)胞器中。無種屬特異性。201抗核抗體(antinuclearantibody,ANA)有IgG（大多數(shù)）、IgM、IgA類ANA陽性（高滴度）標(biāo)志著自身免疫病存在的可能性，正常人群中（尤其老年人）也可出現(xiàn)低滴度的ANA陽性。202根據(jù)細(xì)胞核內(nèi)靶抗原分子的分布和理化特性分為：抗DNA抗體抗組蛋白抗體抗可提取核抗原(extractablenuclearantigenENA)抗體抗非組蛋白抗體抗核仁抗體抗細(xì)胞其他成分抗體ANA的類型及其臨床意義抗DNA抗體：抗dsDNA抗體、抗ssDNA抗體抗組蛋白抗體(AHA)：抗H1、H2A、H2B、H3、H4抗體抗ENA抗體：抗Sm抗體、抗核糖核蛋白(RNP)抗體、抗ss-A抗體、抗ss-B抗體抗核抗體譜抗非組蛋白抗體：Scl-70、Jo-1、Ku、抗增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)抗體、抗類風(fēng)關(guān)相關(guān)核抗原(RANA)抗體、Mi-1、Mi-2、PL-7、PL-12、抗著絲點(diǎn)抗體抗核仁抗體：抗PM-Scl抗體、抗NOR-90抗體、抗U3nRNA抗體、抗Th/To抗體、抗4-6-s-RNA抗體抗細(xì)胞其他成分抗體：抗高爾基體抗體、抗中心體抗體、抗線粒體抗體、抗溶酶體抗體203204間接免疫熒光法示意圖肝組織切片熒光標(biāo)記抗體病人血清（待檢抗體）205206結(jié)果判斷

均質(zhì)型：抗不溶性DNP抗體、抗組蛋白抗體高效價(jià)見于SLE、低效價(jià)見于RA、傳單、慢性肝臟疾病周邊型(核膜型)：抗dsDNA抗體，幾乎僅見于SLE

顆粒型(斑點(diǎn)型)：抗ENA抗體，

MCTD

核仁型：抗核小體抗體(抗RNA抗體)，見于硬皮病207陰性結(jié)果208

均質(zhì)型209

周邊型210

周邊型

Hep-2細(xì)胞猴肝細(xì)胞211

斑點(diǎn)型212

核仁型2131.抗雙鏈DNA抗體(doublestrandedDNA,dsDNA)

抗原基質(zhì)：Hep-2細(xì)胞靶抗原是細(xì)胞核中DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)?？筪s-DNA抗體識(shí)別成雙堿基對(duì)的DNA，同時(shí)可與天然或單鏈DNA反應(yīng)。214

Hep-2細(xì)胞：核漿均質(zhì)性著染，有絲分裂細(xì)胞中染色質(zhì)呈強(qiáng)均質(zhì)性著染。

215

①對(duì)SLE有較高特異性，70～90%活動(dòng)性SLE患者該抗體陽性；抗體滴度與疾病的活動(dòng)程度有相關(guān)性，抗體滴度的動(dòng)態(tài)測(cè)定為監(jiān)控治療提供了有效的實(shí)驗(yàn)室手段。②在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、混合性結(jié)締組織病(mixedconnectivetissuediseaseMCTD)、干燥綜合征(Sjogrensyndrome)也可陽性。③抗單鏈DNA(singlestrandedDNA,ssDNA)抗體特異性較差，可見于SLE等多種自身免疫病。臨床意義2162.抗Sm抗體

Hep-2細(xì)胞217臨床意義

是SLE的特異性標(biāo)志，疾病特異度達(dá)99%，但在SLE中陽性率較低，僅為30%～40%。2183.抗組蛋白抗體(anti-histonictibody,AHA)組蛋白：是一種與DNA結(jié)合的富含賴氨酸和精氨酸的堿性蛋白，由H1、H2A、H2B、H3、H4五個(gè)亞單位組成。組蛋白常以四聚體形式存在，與ds-DNA相互作用形成復(fù)合物，組成核小體?？乖|(zhì)：Hep-2細(xì)胞熒光圖型：核漿均質(zhì)型，分裂期細(xì)胞染色質(zhì)呈強(qiáng)著染。219①在藥物性狼瘡患者中陽性率達(dá)90%～100%，而SLE病人陽性率僅有20%～35%，類風(fēng)關(guān)病人為36%。②不同類型的AHA有助于疾病發(fā)展的預(yù)測(cè)判斷，如以IgG型AHA為主的SLE病人，其心包炎、腎炎、關(guān)節(jié)炎發(fā)生率高于以IgM型AHA為主的病人。臨床意義2201.抗線粒體抗體一組以線粒體內(nèi)膜和外膜蛋白為靶抗原，具有非器官特異性和非種屬特異性特點(diǎn)的自身抗體。（三）抗組織細(xì)胞抗體檢測(cè)221Hep-2:胞漿中產(chǎn)生一種清晰、粗顆粒熒光

腎：在近曲小管、遠(yuǎn)曲小管細(xì)胞的特點(diǎn)是顆粒聚集成團(tuán)

Hep-2細(xì)胞腎222臨床意義根據(jù)線粒體上靶抗原不同，發(fā)現(xiàn)9種AMAM1:梅毒、干燥綜合征M2:PBCM3:藥物性SLEM4:PBC、慢性活動(dòng)性肝炎M5:SLE、自免溶貧M6:藥物性肝炎2232.抗甲狀腺抗體

（1）抗甲狀腺球蛋白抗體（2）抗甲狀腺微粒體抗體224（1）抗甲狀腺球蛋白抗體(thyroid-globulinantibody,TGA)主要見于：（1）自身免疫性甲狀腺病陽性率淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎（橋本甲狀腺炎）36-100%原發(fā)性黏液性水腫72%Graves’s病

50-98%（2）自身免疫性內(nèi)分泌性病糖尿病20%Addison’s病28%（3）其它：甲狀腺癌13-65%非毒性甲狀腺腫