飼料中維生素的快速鑒別

飼料中維生素的快速鑒別

維生素是飼料中的重要組成部分。這是一組不同結(jié)構(gòu)、不同生理功能和營(yíng)養(yǎng)功能的化學(xué)。動(dòng)物對(duì)維生素的需要量極微,但其生理、營(yíng)養(yǎng)作用顯著。所以在飼料中是否加入維生素、加入的量是否準(zhǔn)確,對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)、發(fā)育和養(yǎng)殖企業(yè)獲得的經(jīng)濟(jì)效益都會(huì)受到很大的影響。《飼料添加劑品種目錄》列出的維生素有32種,分為兩類:一類是脂溶性維生素,包括維生素A、維生素D3、維生素E、維生素K3;另一類是水溶性維生素,包括B族維生素和維生素C等。維生素的測(cè)定方法包括高效液相色譜法、分光光度法、熒光光度法。而高效液相色譜法是目前使用最多、比較理想的維生素分析方法,它具有分離效果好、靈敏度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn),特別對(duì)于預(yù)混合飼料和配合飼料中的維生素,含量低,干擾成分多的情況下,只能用高效液相色譜法進(jìn)行鑒別及含量分析。本文主要介紹了維生素預(yù)混合飼料或配合飼料中維生素的鑒別及含量分析方法,以提供給廣大飼料生產(chǎn)和養(yǎng)殖企業(yè)作為參考。1.1維生素A的鑒別及含量測(cè)定方法單體的維生素A肉眼看為淡褐色或灰黃色顆粒。1.1.1預(yù)混合飼料中維生素A的鑒別方法。取試樣2~3g,加氯仿10mL,充分研磨,靜置片刻后取少許上清液于點(diǎn)滴板上,加入1滴三氯化銻試液,即呈藍(lán)色。該法可鑒定出維生素A含量低至50mg/kg的預(yù)混料。操作中要注意的是必須充分研磨試樣,因?yàn)榫S生素A原料一般均用明膠包膜,充分研磨才能使維生素A充分釋放出來。如果只用溶劑溶解而未研磨,那么在鑒定低含量維生素A的預(yù)混料時(shí)可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)論。1.1.2飼料中維生素A的含量測(cè)定。根據(jù)《GB/T17817—2010飼料中維生素A的測(cè)定高效液相色譜法》標(biāo)準(zhǔn)可進(jìn)行真?zhèn)闻袆e。該標(biāo)準(zhǔn)是近年新修訂的分析方法,是在原來皂化提取法的基礎(chǔ)上新增加了直接提取法。對(duì)于維生素預(yù)混合飼料中的維生素A乙酸酯的測(cè)定簡(jiǎn)單、快捷了。該標(biāo)準(zhǔn)含有兩種分析方法。第一法:皂化提取法(仲裁法),適用于配合飼料、濃縮飼料、復(fù)合預(yù)混合飼料、維生素預(yù)混合飼料中的維生素A的測(cè)定。定量限為:1000IU/kg。其原理為堿溶液皂化試樣后,用乙醚將維生素A提取出來,蒸除溶劑,殘?jiān)苡谶m當(dāng)溶劑,用正相或反相高效液相色譜分析柱,在326nm波長(zhǎng)條件下測(cè)定,外標(biāo)法計(jì)算維生素A的含量。第二法:直接提取法適用于維生素預(yù)混合飼料中的維生素A乙酸酯的測(cè)定,定量限為:344mg/kg(106IU/kg)。其原理為維生素預(yù)混合飼料中的維生素A乙酸酯用甲醇溶液提取,試液注入反相色譜分離,在326nm波長(zhǎng)條件下測(cè)定,外標(biāo)法計(jì)算維生素A的含量。1.2維生素D3的鑒別及含量測(cè)定方法1.2.1預(yù)混合飼料中維生素D3的鑒別方法。取試樣2~3g,加氯仿10mL充分研磨后過濾或靜置,然后取少許濾液或上清液于小試管,滴加乙酸酐6滴,搖勻,沿管壁滴2滴硫酸,觀察液面變化,若含維生素D3,在硫酸與液面接觸時(shí)應(yīng)立即顯藍(lán)色,漸漸又轉(zhuǎn)為紫紅色。與單體鑒別及含量測(cè)定方法相比,操作時(shí)應(yīng)注意幾個(gè)問題:一是硫酸與樣品溶液接觸時(shí)立即就顯藍(lán)色,一般看不到由黃變紅的變化;二是必須充分研磨樣品,因商品維生素D3大多制成包膜微粒,需研磨維生素D3才能釋放出來;三是遇到難以過濾的樣品,可取上清液試驗(yàn);四是加硫酸時(shí)最好不要搖勻,而是讓其沿試管壁緩緩接觸液面,并留意觀察硫酸與液面接觸一剎那顏色的變化,這一點(diǎn)對(duì)鑒別維生素D3含量較低的預(yù)混料(小于5mg/kg)尤其重要,因有時(shí)一振搖反而會(huì)看不到反應(yīng)現(xiàn)象了。1.2.2飼料中維生素D3的含量測(cè)定。《GB/T17818—2010飼料中維生素D3的測(cè)定高效液相色譜法》標(biāo)準(zhǔn)也是近年新修訂的分析方法,與維生素A相同。該法在原來皂化提取法的基礎(chǔ)上新增加了直接提取法。對(duì)于維生素預(yù)混合飼料中的維生素D3的測(cè)定簡(jiǎn)單、快捷了。該標(biāo)準(zhǔn)含有兩種分析方法。第一法:皂化提取法(仲裁法)適用于配合飼料、濃縮飼料、復(fù)合預(yù)混合飼料、維生素預(yù)混合飼料中的維生素D3的測(cè)定。定量限為:12.5μg/kg(500IU/kg)。其原理為堿溶液皂化試樣,乙醚提取維生素D3,蒸除溶劑,殘?jiān)苡诩状疾⒉糠秩芤鹤⑷敫咝б合嗌V反相凈化柱,收集含維生素D3淋洗液,蒸發(fā)至干,溶解于適當(dāng)溶劑中,用正相或反相高效液相色譜分析柱,在264nm波長(zhǎng)條件下測(cè)定,外標(biāo)法計(jì)算維生素D3的含量。第二法:直接提取法適用于維生素預(yù)混合飼料中的維生素D3的測(cè)定,定量限為125mg/kg(5×106IU/kg)。其原理為維生素預(yù)混合飼料中的維生素D3用甲醇溶液提取,試液注入反相色譜分離,在264nm波長(zhǎng)條件下測(cè)定,外標(biāo)法計(jì)算維生素D3的含量。實(shí)踐應(yīng)用中維生素A、D3的測(cè)定通常同時(shí)進(jìn)行。1.3維生素E的鑒別及含量測(cè)定方法維生素E單體的外觀呈白色或淡黃色粉末。1.3.1預(yù)混合飼料中維生素E的鑒別方法。預(yù)混料中維生素E的鑒別與單體維生素E的鑒別方法基本相同,但取樣量要適當(dāng)加大。具體操作如下:取樣品1~2g,加無水乙醇10mL充分研磨過濾,取濾液2mL,加硝酸1mL,置75℃水浴中加熱15min,至溶液呈橙紅或紅色。操作過程中要注意兩點(diǎn):一是溶液加熱后出現(xiàn)橙紅色所需時(shí)間的長(zhǎng)短與維生素E的含量有關(guān),含維生素E量較高的預(yù)混料(如10g/kg以上),其溶液經(jīng)反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)槌燃t色只需2~3min,而低含量預(yù)混料(如1g/kg以下)所需反應(yīng)時(shí)間則長(zhǎng)得多,超過10min,且顏色由淺逐漸變深,因此要耐心觀察,以免誤判。二是加熱時(shí)溫度要控制在75℃以下。1.3.2飼料中維生素E的含量測(cè)定。根據(jù)《GB/T17812—2008飼料中維生素E的測(cè)定高效液相色譜法》標(biāo)準(zhǔn),其分析方法與維生素A相似。該法在原來皂化提取法的基礎(chǔ)上新增加了直接提取法。對(duì)于維生素預(yù)混合飼料中的維生素E的測(cè)定簡(jiǎn)單、快捷了。該標(biāo)準(zhǔn)含有兩種分析方法。第一法:皂化提取法(仲裁法)適用于配合飼料、濃縮飼料、復(fù)合預(yù)混合飼料、維生素預(yù)混合飼料中的維生素E(dl-α-生育酚)的測(cè)定。定量限為:1mg/kg。其原理為用堿溶液皂化試樣,使試樣中的天然生育酚釋放出來,添加的dl-α-生育酚乙酸酯轉(zhuǎn)化為游離的dl-α-生育酚,乙醚提取,蒸發(fā)乙醚,殘?jiān)苡谡和?。注入正相或反相高效液相色譜分析柱,用紫外檢測(cè)器在280nm波長(zhǎng)測(cè)定,外標(biāo)法計(jì)算維生素E(dl-α-生育酚)的含量。第二法:直接提取法適用于維生素預(yù)混合飼料中的維生素E(dl-α-生育酚)的測(cè)定,定量限為20mg/kg。其原理為維生素預(yù)混合飼料中的維生素E(dl-α-生育酚)用甲醇溶液提取,試液注入高效液相色譜分析柱,用紫外檢測(cè)器在285nm波長(zhǎng)條件下測(cè)定,外標(biāo)法計(jì)算維生素E(dl-α-生育酚)的含量。1.4維生素K3的含量測(cè)定方法單體維生素K3是外觀呈白色或灰黃褐色的晶體粉末。根據(jù)《GB/T18872—2002飼料中維生素K3的測(cè)定高效液相色譜法》可進(jìn)行維生素K3的真?zhèn)闻袆e。該標(biāo)準(zhǔn)主要參考《美國(guó)全國(guó)飼料協(xié)會(huì)(NFIA)分析方法概要》發(fā)表的方法《高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定全價(jià)飼料、預(yù)混料和維生素濃縮制劑中的維生素K3》而制定。適用于配合飼料、濃縮飼料、復(fù)合預(yù)混合飼料和維生素預(yù)混合飼料中維生素K3(亞硫酸氫鈉甲萘醌)的測(cè)定。測(cè)量范圍為維生素K3含量在2.0mg/kg以上。其原理為用三氯甲烷氨溶液提取維生素K3并轉(zhuǎn)化成游離甲萘醌,蒸發(fā)三氯甲烷,殘?jiān)芙庥诩状贾小Ｓ酶咝б合嗌V測(cè)定,維生素K3(甲萘醌)經(jīng)