宮衣凈酊急性毒性實驗研究

宮衣凈酊急性毒性實驗研究

宮衣凈湯是由急性子和中藥制成的湯劑。臨床上主要用于預防和控制奶牛的胎衣不足，促進子宮收縮，消除不良子宮萎縮。宮衣凈酊預防奶牛胎衣不下有效率達95%,治療總有效率達85.7%。本試驗通過對小鼠灌胃給藥,研究了宮衣凈酊對小鼠灌胃的急性毒性,從小鼠體重、臟器指數、血常規(guī)指標和病理變化等方面對其安全性進行了初步評價,為臨床安全用藥提供理論依據。1材料和方法1.1飼養(yǎng)小鼠產品昆明小鼠40只,體重18~22g,雌、雄各半,購自農業(yè)部蘭州生物制品研究所。飼養(yǎng)小鼠的室溫為20℃左右,自然光照,飼喂小鼠專用料,自由采食和飲水。試驗前小鼠飼養(yǎng)7d,觀察其健康狀況,選擇健康、營養(yǎng)狀況良好小鼠進行試驗。1.2%氯化鈉注射液宮衣凈酊(1mL相當于原生藥0.5g),由本實驗室自制;0.9%氯化鈉注射液。CELL-DYN1200全自動血細胞分析儀(美國雅培公司)、CP223C電子天平(上海奧豪斯儀器有限公司)、鼠籠、小鼠飼料、一次性注射器等。1.3小鼠的一般情況調查預試驗按改良寇氏法設計,測定半數致死量(LD50),結果小鼠全部存活,未能找出最小致死劑量,無法測出LD50,故進行最大給藥量試驗。參照文獻的試驗方法,將40只小鼠隨機分為2組,每組雌、雄各10只。給藥組按每千克體重40g宮衣凈酊灌胃,對照組按每千克體重80mL生理鹽水灌胃,分2次灌服,2次給藥間隔8h。首次灌胃前禁食12h但不禁水,間隔期間不供食。給藥后常規(guī)飼養(yǎng),觀察7d,每天觀察小鼠的采食、飲水、精神、死亡、被毛、糞便和運動等情況,記錄小鼠是否出現毒性反應等異常變化。給藥第8天上午將所有小鼠稱重,摘眼球采血,血液保存于加有抗凝劑的試管,進行血常規(guī)分析。主要分析白細胞(WBC)、淋巴細胞(LYM)、中間細胞(MID)、粒細胞(GRA)、淋巴細胞百分率(L%)、中間細胞百分率(M%)、粒細胞百分率(G%)、紅細胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細胞壓積(HCT)、紅細胞平均體積(MCV)、平均血紅蛋白含量(MCH)、平均血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細胞分布寬度(RDW)、血小板(PLT)等15項指標。隨后剖檢,觀察實質性臟器有無肉眼病理變化,對心、肝、脾、肺、腎稱重并計算臟器指數(臟器濕重/體重×100%)。1.4處理數據試驗數據以平均數±標準差(x±S)來表示,采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計分析,組間數據比較用單因素方差分析。2結果2.1小鼠口服宮衣凈消費小鼠口服宮衣凈酊無法測出LD50。進行最大給藥量試驗期間,未見小鼠死亡,故小鼠口服宮衣凈酊的日最大給藥量為40g/kg。相當于奶牛臨床日用量(0.4g/kg)的100倍,這表明宮衣凈酊較為安全。2.2小鼠臟器指數變化小鼠體重變化情況見表1。從表中可以看出,給藥組小鼠增重和相對增重略低于對照組,但給藥組末重(第8天體重)、增重和相對增重都與對照組無顯著差異(P>0.05)。小鼠臟器指數變化見表2。從表中可以看出,給藥組心臟、肺臟和脾臟指數略高于對照組,肝臟和腎臟指數略低于對照組,但均與對照組無顯著差異(P>0.05)。這表明口服宮衣凈酊對小鼠的機體尤其是實質性臟器的生長無明顯不良影響。2.3血常規(guī)指標檢測小鼠主要血常規(guī)指標變化見表3和表4。對小鼠的血常規(guī)15項指標分析表明,給藥組淋巴細胞百分率顯著高于對照組(P<0.05),中間細胞百分率和粒細胞百分率顯著低于對照組(P<0.05)。給藥組其他血常規(guī)指標指標與對照組無顯著差異。這說明該制劑具有提高免疫的作用。2.4小鼠急性毒性試驗總結構及病理組織學觀察給藥當天,給藥組小鼠精神沉郁,采食、飲水和自主活動減少,有些小鼠臥地不起,運動時步態(tài)不穩(wěn),給藥次日逐漸恢復正常。連續(xù)觀察7d后,所有小鼠被毛有光澤,采食、活動均正常,無小鼠死亡。試驗結束時,給藥組和對照組小鼠解剖后觀察皮下、心、肝、脾、肺、腎和胃腸道等器官無明顯肉眼病變。表明宮衣凈酊不會引起實質性臟器的病理損傷。3對小鼠口服宮衣凈土指標的影響最大給藥量試驗是指在合理的給藥濃度及合理的給藥容量的條件下,以允許的最大劑量給予試驗動物,觀察動物出現的反應。由于許多中藥制劑的毒性較小,常常無法測出LD50,多采用最大耐受量或最大給藥量來測定其對試驗動物的急性毒性。為此,本試驗采用最大給藥量試驗研究了宮衣凈酊的毒性。體重是反映動物機體發(fā)育、疾病和營養(yǎng)狀況的主要指標,內臟器官是其生理功能的物質基礎,也是評價臟器生理功能和發(fā)育程度的重要指標之一,可以較為宏觀地反映動物總的營養(yǎng)狀態(tài)、臟器的生長狀況和內臟器官病變的性質和程度。血細胞是組成血液的主要成分,常分為紅細胞、白細胞和血小板三大類,其分類計數結果可以反映動物機體的健康狀態(tài),也是毒性試驗檢測的重要指標之一。試驗中對這些指標的測定結果表明,小鼠口服宮衣凈酊的日最大給藥量相當于臨床奶牛日用量的100倍,該制劑對小鼠實質性臟器的生長和體重增加無明顯影響,對實質性臟器也無明顯病理損傷。對血常規(guī)指標,除淋巴細胞百分率