日本藥典中心靜脈營養(yǎng)輸液中微量鋁元素的檢出方法介紹解讀

公布日期0728欄目化藥藥品評(píng)價(jià)>>化藥質(zhì)量控制標(biāo)題日本藥典中心靜脈營養(yǎng)輸液中微量鋁元素的檢出辦法介紹作者張星一部門審評(píng)三部正文內(nèi)容

近年來,隨著某些重大藥害事件的逐步披露,公眾對(duì)于注射劑的質(zhì)量問題越來越關(guān)注。藥品監(jiān)管部門也出臺(tái)了某些列方法來提高注射劑的安全性控制原則。在國外出現(xiàn)了使用TbrN制劑的腎功效障礙患者出現(xiàn)鋁毒性(中樞神經(jīng)系統(tǒng)或骨)的報(bào)道[1],日本藥典附錄中收載了中心靜脈腸外營養(yǎng)輸液(TotalbrarenteralNutrition,TbrN)中微量鋁元素的測定辦法的內(nèi)容。從7月起[2],FDA規(guī)定生產(chǎn)廠家對(duì)大多數(shù)腸外營養(yǎng)液中的鋁進(jìn)行定量。大容積的注射用溶液,如葡萄糖、氨基酸、脂肪乳和注射用蒸餾水,規(guī)定其鋁含量低于25μg/L;但對(duì)小溶劑的注射用溶液,如電解質(zhì)、維生素和微量元素,則沒有規(guī)定鋁含量的上限。腸外營養(yǎng)液中的鋁腸外營養(yǎng)液中并沒有補(bǔ)入鋁的規(guī)定,其中存在的鋁屬于一種藥品污染[3]。

鑒于現(xiàn)在國內(nèi)營養(yǎng)輸液在外科術(shù)后康復(fù)和腫瘤輔助治療中應(yīng)用越來越廣泛,而有關(guān)“微量鋁污染”的質(zhì)量控制手段尚未見報(bào)道,故將《日本藥局方第十五改正版》(日文版)(下列簡稱:日本藥典)中“參考情報(bào):16中心靜脈栄養(yǎng)剤中の微量アルミニウム試験法”有關(guān)內(nèi)容翻譯介紹,供國內(nèi)同行參考,以進(jìn)行有關(guān)的防治和檢控工作。

一、日本藥典微量鋁檢測辦法[1]

現(xiàn)有的微量鋁分析辦法重要有:1)熒光檢測HbrLC法,2)電感耦合等離子體發(fā)射光譜法(ICbr-AES)和3)ICbr-MS等。熒光檢測HbrLC法的檢測敏捷度約為1μg/L(ppb)。如使用特別的附屬裝置ICbr-AES法和ICbr-MS法能夠得到更高的檢測敏捷度。由于TbrN是營養(yǎng)劑,含有糖類、氨基酸類、電解質(zhì)等多樣的營養(yǎng)成分,構(gòu)成很復(fù)雜。由于這些成分對(duì)測定有著很大的影響,因此要特別注意根據(jù)產(chǎn)品的狀況選擇適宜的分析辦法。

考慮到作為分離分析辦法的高效液相色譜現(xiàn)在應(yīng)用很普及,日本藥典選用了使用2種熒光性螯和試劑的熒光檢測HbrLC法作為TbrN微量鋁檢測辦法:1)羥基喹啉(quinolinol)螯合物法,和2)熒光鎵(lumogallion)螯合物法。

(1)羥基喹啉螯合物法

在供試液中形成鋁離子的羥基喹啉螯合物,采用熒光誘導(dǎo)的液體高效液相法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

供試液的配制

對(duì)的量取實(shí)驗(yàn)樣品液(TbrN制劑)1mL,加水10μL,再加流動(dòng)相至10mL,作為供試品溶液。

原則曲線系列原則液的配制

分別對(duì)的量取鋁實(shí)驗(yàn)用水1mL,對(duì)的加入鋁原則溶液(1)~(5)各10μL,加流動(dòng)相至10mL,作為原則曲線系列原則液(鋁離子濃度:0,1.25,2.5,5.0及10.0ppb)。

原則實(shí)驗(yàn)法

分別對(duì)的取供試品溶液和原則曲線系列原則液0.1mL,按照下列條件進(jìn)行高效液相法實(shí)驗(yàn)。采用原則曲線法,計(jì)算供試品溶液中的鋁濃度。

實(shí)驗(yàn)條件

檢測器:熒光光度計(jì)(激發(fā)波長:380nm,熒光波長520nm)

色譜柱:內(nèi)徑4.6mm,長度15cm的不銹鋼管,填充物為液相色譜用苯基鍵合硅膠。

柱溫:40℃附近恒定

流動(dòng)相:8-羥基喹啉的乙腈溶液(3→100)/稀釋的0.5mol/L醋酸胺試液(2→5)混合溶液(1:1)

流速:調(diào)節(jié)使鋁/羥基喹啉螯合物的峰保存時(shí)間約為9分鐘。

系統(tǒng)合用性

采用原則曲線系列原則液做成的原則曲線的有關(guān)系數(shù)在0.99以上。

也能夠采用不在流動(dòng)相中加入8-羥基喹啉,而在供試品溶液配制階段加入8-羥基喹啉,使生成鋁/羥基喹啉螯合物之后,再進(jìn)行熒光檢測的液體高效液相色譜實(shí)驗(yàn)。由于流動(dòng)相中不含有螯合試劑,必須要預(yù)先生成更穩(wěn)定的鋁/羥基喹啉螯合物。尚有,由于熒光檢測的分析波長不同(激發(fā)波長:370nm,熒光波長504nm),測定的敏捷度也有所差別,檢測用原則曲線應(yīng)在0~25ppb的范疇內(nèi)適宜選擇。另外,由于色譜柱的尺寸、柱溫以及流動(dòng)相的構(gòu)成也不相似,為了對(duì)的測定供試品溶液中的微量的鋁,一定要認(rèn)真選擇適宜的實(shí)驗(yàn)條件。

(2)熒光鎵(lumogallion)螯合物法

在供試液中形成鋁離子的熒光鎵螯合物,采用熒光誘導(dǎo)的液體高效液相法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

供試液的配制

對(duì)的量取實(shí)驗(yàn)樣品液(TbrN制劑)70μl,對(duì)的加入鹽酸熒光鎵溶液0.15mL之后,對(duì)的加入鋁實(shí)驗(yàn)用pH緩沖液0.6ml?；旌弦涸?0℃放置4小時(shí)后,作為供試品溶液。

原則曲線系列原則液的配制

分別對(duì)的量取鋁原則溶液(1)~(5)各1mL,加入稀釋后的鋁實(shí)驗(yàn)用硝酸(1→100)至100mL。從中對(duì)的量取70μL,對(duì)的加入鹽酸熒光鎵溶液0.15mL和pH7.2的鋁實(shí)驗(yàn)用緩沖液0.6mL,混合后,在40℃放置4小時(shí),作為原則曲線系列原則液(鋁離子濃度:0,1.07,2.13,4.27及8.54ppb)。

原則實(shí)驗(yàn)法

分別對(duì)的取供試品溶液和原則曲線系列原則液0.1mL,按照下列條件進(jìn)行液體高效液相法實(shí)驗(yàn),采用原則曲線法,計(jì)算供試品溶液中的鋁濃度。

實(shí)驗(yàn)條件

檢測器:熒光光度計(jì)(激發(fā)波長:505nm,熒光波長574nm)

色譜柱:內(nèi)徑6.0mm,長度10cm的不銹鋼管,填充物為液相色譜用辛烷基鍵合硅膠。

柱溫:40℃附近恒定

流動(dòng)相:向100mL2-丙醇中加入稀釋的pH5.0的1mol/L醋酸·醋酸鈉緩沖液(1→10)到1000mL。

流速:調(diào)節(jié)使鋁/熒光鎵螯合物的峰保存時(shí)間約為5分鐘。

系統(tǒng)合用性

采用原則曲線系列原則液做成的原則曲線的有關(guān)系數(shù)在0.99以上。

二、有關(guān)注意事項(xiàng)[1]

1)實(shí)驗(yàn)中使用的水以及其它的實(shí)驗(yàn)用溶媒、試劑、器具等,均應(yīng)選擇鋁污染小的產(chǎn)品,除此之外,也應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中的塵埃的鋁污染。

2)檢測前一定要注意檢測樣品的本身特性對(duì)鰲合物的形成不存在影響。

3)日本分析化學(xué)協(xié)會(huì)現(xiàn)在能夠提供已知鋁濃度的金屬成分分析用河川水原則物質(zhì),在實(shí)驗(yàn)辦法和實(shí)驗(yàn)成果的合用性評(píng)價(jià)時(shí),能夠使用這些原則物質(zhì)。

三、原則溶液及試劑、試液的配制[1]

本實(shí)驗(yàn)中,除日本藥典規(guī)定試劑之外,應(yīng)使用下列的原則溶液和試劑、試液。

鋁原則溶液

取一定量的鋁實(shí)驗(yàn)用水或鋁原則原液,用稀釋后的鋁實(shí)驗(yàn)用硝酸(1→100)稀釋,分別配制鋁濃度為0,1.25,2.5,5.0及10.0ppm的鋁原則溶液(1)~(5)。

鋁實(shí)驗(yàn)用水

除滿足“精制水”的規(guī)定外,鋁濃度應(yīng)低于1ppb。

鋁實(shí)驗(yàn)用硝酸

硝酸中的鋁濃度應(yīng)低于1ppb。

鋁實(shí)驗(yàn)用緩沖液

取pH7.2的N,N-bis(2-羥基乙基)-2-氨基乙基亞磺酸106.6g,溶解于鋁實(shí)驗(yàn)用水800mL后,加入鋁實(shí)驗(yàn)用氫氧化四甲基銨調(diào)節(jié)pH至7.2,加鋁實(shí)驗(yàn)用水至1000mL。

N,N-bis(2-羥基乙基)-2-氨基乙基亞磺酸

C6H15NO5S白色結(jié)晶或粉末。

鋁實(shí)驗(yàn)用氫氧化四甲基銨

(CH3)4NOH鋁實(shí)驗(yàn)用約為25%的水溶液,但鋁濃度應(yīng)在10ppb下列。

熒光鎵鹽酸溶液

取熒光鎵0.86g溶解于2-丙醇300mL中,對(duì)的加入稀釋的鋁實(shí)驗(yàn)用鹽酸(9→50)350mL和鋁實(shí)驗(yàn)用水至1000mL。

熒光鎵(2,2",4"-Trihydroxy-5-chloroazobenzene-3-sulfonicAcid

4-Chloro-6-(2,4-dihydroxyphenylazo)-1-phenol-2-sulfonicAcid,譯者注)

C12H9ClN2O6S紅褐色~暗褐色的粉末。其中鋁濃度應(yīng)低于1ppm。

鋁實(shí)驗(yàn)用鹽酸

鹽酸中的鋁濃度應(yīng)低于1ppb。

四、小結(jié)與展望

FDA擬定攝入鋁5μg/(kg·d)是安全的,腸外營養(yǎng)液中的鋁毒性是因使用含鋁的腸外營養(yǎng)成分,最后造成鋁在人體內(nèi)蓄積引發(fā)的[4]。Smith等進(jìn)行的研究表明,腸外營養(yǎng)液中鋁的重要來源為鈣和磷酸鹽,如葡萄糖酸鈣、磷酸氫二鉀、醋酸鈉中的鋁占到了腸外營養(yǎng)液樣品中鋁總量的90%[5]。對(duì)國外普通使用的腸外營養(yǎng)輸液的研究顯示,不同廠家的同一產(chǎn)品的鋁含量是不同的,同一廠家的不同規(guī)格的產(chǎn)品鋁含量也是不同的[5]。有文獻(xiàn)報(bào)道,更換腸外營養(yǎng)液的包裝,減少玻璃容器的使用,能夠起到防止的作用。1999年7月在德國上市的聚乙烯安瓿裝葡萄糖酸鈣可明顯減少腸外營養(yǎng)液中鋁的含量。使用聚乙烯安瓿替代玻璃容器分裝葡萄糖酸鈣,可使葡萄糖酸鈣中平均鋁濃度減少了96%(從5000g/L降到195μg/L)[6]?，F(xiàn)在,聚乙烯安瓿裝的葡萄糖酸鈣只有德國使用。

對(duì)注射液中鋁的安全性控制,現(xiàn)在國內(nèi)藥學(xué)領(lǐng)域報(bào)道較少,微量鋁的測定研究多見于環(huán)境水體監(jiān)測,國家藥典原則尚未收載注射劑中微量鋁的檢查辦法。但愿國內(nèi)醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)界和監(jiān)管部門聯(lián)合起來,從外科大容量營養(yǎng)注射液產(chǎn)品的原料藥質(zhì)控、包材選擇和質(zhì)檢辦法等領(lǐng)域著手,進(jìn)一步提高這類藥品的整體品質(zhì)。

[參考文獻(xiàn)]

1、《日本藥局方》第十五改正版(日文版).

2、FoodandDrugAdministration.Aluminuminlargeandsmallvolumeparenteralsusedintotalparenteralnutrition.FedRegist,,65(17):4103-4111.

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4、樊新星,徐廷,金朝暉等.腸外營養(yǎng)液中的鋁污染[J].華西醫(yī)學(xué),,23(1):203-204.

5、SmithBS,KothariH,HayesBD,etal.Effectofadditiveselectiononcalculatedaluminumcontentofparenteralnutrientsolutions[J].AmJHealthSystbrharm,,64(7):730-739.

6、FreyOR,MaierL.brolyethylenevialsofcalciumgluconatereducealuminumcontaminationofTbrN[J].Annbrharmacother,,34(6):811-812.讀書的好處1、行萬里路，讀萬卷書。2、書山有路勤為徑，學(xué)海無涯苦作舟。3、讀書破萬卷，下筆如有神。4、我所學(xué)到的任何有價(jià)值的知識(shí)都是由自學(xué)中得來的。——達(dá)爾文5、少壯不努力，老大徒悲哀。6、黑發(fā)不知勤學(xué)早，白首方悔讀書遲。——顏真卿7、寶劍鋒從磨礪出，梅花香自苦寒來。8、讀書要三到：心到、眼到、口到9、玉不琢、不成器，人不學(xué)、不知義。10、一日無書，百事荒廢?！?/p>