免疫組織化學(xué)抗體試劑及檢測(cè)試劑盒注冊(cè)申報(bào)資料的基本要求

免疫組織化學(xué)抗體試劑及檢測(cè)試劑盒注冊(cè)申報(bào)資料的基本規(guī)定-01-0401:48免疫組織化學(xué)抗體試劑及檢測(cè)試劑是指一類運(yùn)用免疫學(xué)原理結(jié)合酶催化底物顯色的化學(xué)辦法，檢測(cè)組織標(biāo)本中抗原的檢測(cè)試劑。這類試劑為待測(cè)抗原特異性單克隆或多克隆抗體，或抗體與顯色系統(tǒng)、對(duì)照試劑、質(zhì)控片及其它輔助試劑一同包裝成試劑盒形式的檢測(cè)試劑盒。該類產(chǎn)品檢測(cè)項(xiàng)目繁多，應(yīng)用廣泛，檢測(cè)過程為多環(huán)節(jié)檢測(cè)，影響因素多，在臨床上重要用于檢測(cè)細(xì)胞的特異性抗原以擬定細(xì)胞的表型。該類產(chǎn)品的預(yù)期用途與診療、鑒別診療、預(yù)后判斷、指導(dǎo)用藥有關(guān)，按照三類體外診療試劑管理?；谠擃惍a(chǎn)品臨床應(yīng)用的重要性及特殊性，根據(jù)現(xiàn)在注冊(cè)申報(bào)工作的需要、根據(jù)《體外診療試劑注冊(cè)管理方法（試行）》、《體外診療試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》以及《體外診療試劑闡明書編寫指導(dǎo)原則》的有關(guān)規(guī)定，結(jié)合臨床及病理檢測(cè)中的應(yīng)用實(shí)踐、臨床病理專家和生產(chǎn)公司的建議，現(xiàn)對(duì)免疫組織化學(xué)抗體試劑及檢測(cè)試劑盒注冊(cè)申報(bào)資料提出下列基本規(guī)定（對(duì)于本規(guī)定未提及的部分，申請(qǐng)人均應(yīng)根據(jù)有關(guān)法規(guī)規(guī)定提交注冊(cè)申報(bào)資料）。本《規(guī)定》是在現(xiàn)在科學(xué)技術(shù)認(rèn)識(shí)水平及現(xiàn)階段免疫組化類產(chǎn)品技術(shù)審評(píng)基礎(chǔ)上形成的，審評(píng)人員會(huì)親密關(guān)注有關(guān)技術(shù)的最新進(jìn)展，隨著認(rèn)識(shí)的提高將適時(shí)調(diào)節(jié)。由于該類產(chǎn)品種類繁多，《基本規(guī)定》不能涵蓋全部該類產(chǎn)品的特殊狀況，如某些規(guī)定不合用，申請(qǐng)人也可采用其它方式證明產(chǎn)品的技術(shù)性能，建議申請(qǐng)人對(duì)此進(jìn)行具體闡明，并提交對(duì)應(yīng)的性能驗(yàn)證資料。

根據(jù)免疫組化不同標(biāo)志物的臨床應(yīng)用狀況，將其分為二個(gè)大類：A類：Her2/Neu、ER、PR、ALK、CD117、c-met、CD20、EGFR等與臨床治療、用藥親密有關(guān)的標(biāo)志物；其它全新標(biāo)記物，含有新的臨床意義。B類：臨床使用多個(gè)指標(biāo)綜合診治的標(biāo)志物之一，與輔助診療、鑒別診療、病情監(jiān)測(cè)、預(yù)后有關(guān)標(biāo)志物：如：Ki67、CK5/6等。一、產(chǎn)品闡明書1.【產(chǎn)品名稱】：?jiǎn)为?dú)的第一抗體試劑通用名稱建議采用下列命名方式：待測(cè)抗原特異性抗體+試劑（免疫組織化學(xué)法）?？贵w與顯色系統(tǒng)、對(duì)照試劑、質(zhì)控片及其它輔助試劑一同包裝成試劑盒形式的檢測(cè)試劑盒通用名稱建議采用下列命名方式：待測(cè)抗原+檢測(cè)試劑盒（免疫組織化學(xué)法）。如：雌激素受體抗體試劑（免疫組織化學(xué)法）、孕酮受體檢測(cè)試劑盒（免疫組織化學(xué)法）。2.【預(yù)期用途】：應(yīng)明確檢測(cè)的樣本類型（冰凍和/或石蠟包埋等）；明確抗體的類型、克隆號(hào)、陽性著色特點(diǎn)；明確臨床用途（診療、鑒別診療、預(yù)后判斷、指導(dǎo)用藥）；指明“對(duì)任何陽性或陰性成果的解讀，應(yīng)由病理醫(yī)生結(jié)合病理形態(tài)學(xué)、臨床體現(xiàn)及其它檢測(cè)辦法進(jìn)行，不作為單獨(dú)的診療指標(biāo)?！?.【樣本規(guī)定】：應(yīng)明確對(duì)合用樣本的取材、固定、包埋及穩(wěn)定性（樣本解決前、后的儲(chǔ)存條件及使用期）的具體規(guī)定；對(duì)于骨組織進(jìn)行脫鈣解決等規(guī)定。此部分內(nèi)容可參考國內(nèi)、外有關(guān)原則操作性文獻(xiàn)內(nèi)容進(jìn)行編寫。4.【檢測(cè)辦法】：應(yīng)注明原則操作程序（手工和/或自動(dòng)化），明確推薦的染色前解決環(huán)節(jié)、抗原修復(fù)方式、各環(huán)節(jié)解決時(shí)間、所用緩沖液的配制及pH等內(nèi)容；如果申報(bào)產(chǎn)品只包含第一抗體，應(yīng)注明配套使用的第二抗體及顯色系統(tǒng)的具體信息；如果抗體為濃縮型抗體，還需明確推薦抗體工作液的濃度、稀釋液的具體信息；應(yīng)明確具體的“質(zhì)量控制”辦法，為顧客提供可作為（內(nèi)部）陽性和陰性對(duì)照的組織名稱。5.【檢測(cè)成果的解釋】：配合彩色圖片對(duì)成果判讀進(jìn)行闡明，明確陽性著色特點(diǎn)，涉及顏色及著色部位。對(duì)可能出現(xiàn)的假陰性、假陽性狀況進(jìn)行闡明，并明確提出出現(xiàn)該狀況后的解決辦法。彩色圖片應(yīng)最少包含，陽性及陰性質(zhì)控片成果圖例；對(duì)于A類產(chǎn)品，應(yīng)包含不同級(jí)別（如合用）陽性及陰性質(zhì)控片的成果圖例。6.【參考值（參考范疇）】：公司可根據(jù)合用狀況進(jìn)行編寫；如不合用，無需編寫。另：由于病理產(chǎn)品不存在“檢查”說法，建議申請(qǐng)人，將闡明書各項(xiàng)標(biāo)題中，全部【“檢查”】修改為【“檢測(cè)”】。二、

重要原材料研究資料應(yīng)包含下列內(nèi)容：1.抗體的免疫源資料。2.抗原的特性。3.具體的抗體制備資料，涉及抗體的克隆選擇、抗體的純化。4.抗體性質(zhì)鑒定資料，資料應(yīng)包含對(duì)抗體類型、特異性、抗體識(shí)別表位、親和力及效價(jià)的測(cè)定。申請(qǐng)人可通過雙向瓊脂擴(kuò)散法、ELISA、westernblot等辦法進(jìn)行研究。5.公司內(nèi)部質(zhì)控片及試劑盒配套質(zhì)控片（如合用）的研究資料。建議在試劑盒中，設(shè)立弱陽性質(zhì)控品（如合用），可更加敏捷的監(jiān)控實(shí)驗(yàn)過程中可能出現(xiàn)的錯(cuò)誤成果。6.封閉液的研究資料，封閉液應(yīng)能夠封閉非特異結(jié)合、內(nèi)源性酶活性或內(nèi)源性生物素等。三、反映體系研究資料由于染色溫度、時(shí)間、抗原修復(fù)與否、修復(fù)方式等實(shí)驗(yàn)條件對(duì)于染色成果有較大影響，對(duì)于檢測(cè)過程各環(huán)節(jié)的實(shí)驗(yàn)條件，均應(yīng)有充足的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證資料支持。四、分析性能評(píng)定資料1.應(yīng)最少包含免疫反映性及精密度研究資料。（1）免疫反映性：正常組織：對(duì)30種正常人體組織（見表1），每種組織類型不少于3例，進(jìn)行特異性評(píng)價(jià)，同時(shí)對(duì)著色位置及染色特點(diǎn)進(jìn)行描述。非正常組織：對(duì)有關(guān)良性、惡性病變組織進(jìn)行特異性評(píng)價(jià)，每種組織類型不少于3例。（2）精密度：在進(jìn)行精密度評(píng)價(jià)時(shí)，除申報(bào)試劑本身的影響外，還應(yīng)對(duì)檢測(cè)時(shí)間（日內(nèi)/日間）、批次（三個(gè)批次）、合用機(jī)型（如合用）等要素進(jìn)行有關(guān)的驗(yàn)證。2.對(duì)于半定量的免疫組化檢測(cè)試劑，應(yīng)對(duì)不同強(qiáng)度分別進(jìn)行研究。如有手工和自動(dòng)兩種修復(fù)、染色方式，還應(yīng)對(duì)兩種方式之間的精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。3.對(duì)于已廣泛應(yīng)用的與治療用藥及預(yù)后有關(guān)的病理產(chǎn)品，應(yīng)提供充足的文獻(xiàn)支持資料，論證標(biāo)記物與療效、生存率之間的關(guān)系。支持資料可覺得文獻(xiàn)資料或?qū)嶒?yàn)室/多中心臨床實(shí)驗(yàn)資料。對(duì)于新病理產(chǎn)品且預(yù)期用途與治療用藥及預(yù)后有關(guān)，支持資料應(yīng)涉及文獻(xiàn)資料及實(shí)驗(yàn)室/多中心臨床實(shí)驗(yàn)資料。4.建議公司主動(dòng)參加國內(nèi)（衛(wèi)生部病理質(zhì)控評(píng)價(jià)中心、各省直轄市臨床病理質(zhì)控中心等）、國際（NordiQC、UKNEQUAS、CAP等）質(zhì)控機(jī)構(gòu)的質(zhì)控活動(dòng)，并提交質(zhì)控成果報(bào)告（如有）。五、穩(wěn)定性研究資料由于抗體開瓶/稀釋后的穩(wěn)定性根據(jù)不同的貯存條件有較大變化，且開瓶使用后效價(jià)變化較快，直接影響實(shí)驗(yàn)成果，因此，申請(qǐng)人除貨架穩(wěn)定性外，還應(yīng)提交開瓶、機(jī)載穩(wěn)定性研究資料。對(duì)于濃縮型的抗體，還應(yīng)提交稀釋后抗體工作液的穩(wěn)定性研究資料。六、參考值（范疇）擬定資料對(duì)于上述A類產(chǎn)品中部分陽性級(jí)別與治療用藥有關(guān)的標(biāo)記物，應(yīng)提交染色特點(diǎn)的研究資料及參考值擬定資料。由于這類免疫組化診療標(biāo)記物的參考值，隨研究/應(yīng)用的進(jìn)展不停變化，參考值擬定資料可提交參考文獻(xiàn)資料。對(duì)于上述其它A類及B類產(chǎn)品，僅需提交染色特點(diǎn)的研究資料。七、臨床實(shí)驗(yàn)資料1.臨床實(shí)驗(yàn)機(jī)構(gòu)：該類產(chǎn)品臨床實(shí)驗(yàn)應(yīng)在不少于三家省級(jí)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)中完畢，應(yīng)在通過病理權(quán)威機(jī)構(gòu)認(rèn)證的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行（如有）。2.臨床樣本：（1）樣本選用：因免疫組化實(shí)驗(yàn)在臨床上作為HE染色的后續(xù)環(huán)節(jié)，應(yīng)選擇已有HE染色病理診療的石蠟包埋組織和/或冰凍樣本作為入選樣本，該診療應(yīng)在原始數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)表中予以體現(xiàn)，必要時(shí)，其成果應(yīng)在臨床總報(bào)告中列表進(jìn)行總結(jié)。（2）樣本例數(shù)：對(duì)于上述分類A類產(chǎn)品，臨床總樣本數(shù)最少應(yīng)滿足1000例，陽性樣本例數(shù)不應(yīng)少于300例；上述B類產(chǎn)品，臨床總樣本數(shù)最少應(yīng)滿足500例，陽性樣本例數(shù)不應(yīng)少于150例。如合用冰凍樣本，也需進(jìn)行臨床實(shí)驗(yàn)，且最少滿足冰凍樣本總例數(shù)不少于200例，其中應(yīng)包含不少于60例陽性樣本。對(duì)于發(fā)病率低的病種，臨床實(shí)驗(yàn)陽性樣本可適宜減少。（3）樣本類型：應(yīng)涉及闡明書預(yù)期用途聲稱的陽性樣本。對(duì)于上述A類標(biāo)記物，不同臨床適應(yīng)癥均應(yīng)涉及，每種適應(yīng)癥陽性樣本不應(yīng)少于100例，總陽性樣本例數(shù)不應(yīng)少于300例；對(duì)于B類標(biāo)記物，規(guī)定陽性病例在闡明書預(yù)期用途聲稱的體現(xiàn)組織中均應(yīng)有所涉及，每種組織類型陽性樣本不應(yīng)少于30例。陰性樣本除了癌旁正常對(duì)照外，還應(yīng)涉及易混淆的良、惡性疾病病例等。注：對(duì)于合用樣本類型為石蠟包埋切片的檢測(cè)試劑，臨床實(shí)驗(yàn)樣本也可使用組織芯片進(jìn)行。3.對(duì)照試劑的選擇：由于該類試劑現(xiàn)在在境內(nèi)注冊(cè)較少，建議臨床實(shí)驗(yàn)選擇公認(rèn)較好的試劑進(jìn)行比對(duì)，如：該抗體克隆通過國際權(quán)威機(jī)構(gòu)（如NordiQC等）年度評(píng)分成績(jī)較好。與對(duì)照試劑不符的樣本應(yīng)使用最后臨床診療成果進(jìn)行確認(rèn)。4.成果報(bào)告：（1）原始數(shù)據(jù)：1）應(yīng)提交CRF匯總表，內(nèi)容應(yīng)涉及：性別、年紀(jì)、被考核試劑檢測(cè)成果、對(duì)照試劑檢測(cè)成果、HE染色成果等。2）應(yīng)提交入選樣本染色代表性彩色圖片。（2）統(tǒng)計(jì)：大多數(shù)免疫組化標(biāo)記物的臨床應(yīng)用為定性類產(chǎn)品，普通應(yīng)使用四格表進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，報(bào)告敏感性、特異性或陽性符合率、陰性符合率等；對(duì)于指導(dǎo)用藥的定量、半定量產(chǎn)品而言，除了進(jìn)行整體數(shù)據(jù)線性有關(guān)分析外，還應(yīng)根據(jù)成果鑒定辦法進(jìn)行分級(jí)統(tǒng)計(jì)。各成果應(yīng)報(bào)告95%置信區(qū)間并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)檢查。5.質(zhì)控：由于免疫組化實(shí)驗(yàn)前解決環(huán)節(jié)較多，造成判讀成果可能會(huì)在實(shí)驗(yàn)人員間、實(shí)驗(yàn)室間產(chǎn)生差別。為了客觀單一評(píng)價(jià)試劑性能，盡量減少這種人為差別對(duì)最后成果造成的影響，臨床實(shí)驗(yàn)開始前，各臨床機(jī)構(gòu)應(yīng)進(jìn)行判讀一致性實(shí)驗(yàn)及統(tǒng)一的質(zhì)量控制，統(tǒng)一操作環(huán)節(jié)，確保同樣的染色片在不同醫(yī)院的判讀成果保持一致。該預(yù)評(píng)定內(nèi)容，實(shí)現(xiàn)辦法、成果等應(yīng)在臨床報(bào)告中體現(xiàn)。6.其它：除上述規(guī)定外：（1）如該抗體試劑合用不同檢測(cè)體系，如配合使用的第二抗體、顯色劑等，則不同檢測(cè)體系（涉及不同組合）均需在一種檢測(cè)體系滿足臨床實(shí)驗(yàn)最低例數(shù)規(guī)定的前提下，增加的另外檢測(cè)體系應(yīng)再提交臨床樣本最少各200例。（2）如抗體試劑包含濃縮型與即用型、手工操作與上機(jī)操作等不同劑型，在一種劑型滿足臨床實(shí)驗(yàn)最低例數(shù)規(guī)定的前提下，另一種劑型，需提交臨床樣本最少200例。以上（1）、（2）需在不少于3家臨床實(shí)驗(yàn)機(jī)構(gòu)完畢，且選擇的臨床樣本應(yīng)包含一定比例的陽性樣本。表1：正常組織列表中樞神經(jīng)系統(tǒng)腦、大腦（灰質(zhì)與白質(zhì)神經(jīng)元、膠質(zhì)等）腦、小腦內(nèi)分泌系統(tǒng)腎上腺（皮質(zhì)與髓質(zhì)）卵巢胰腺（胰島與外分泌胰腺）甲狀旁腺垂體（腺垂體與神經(jīng)垂體）睪丸甲狀腺（濾泡上皮、濾泡旁細(xì)胞、膠體等）乳腺乳腺（乳腺小葉、乳腺管、肌上皮細(xì)胞等）造血組織脾