2型糖尿病合并高脂血癥快速造模方法的研究

2型糖尿病合并高脂血癥快速造模方法的研究

據(jù)臨床報道，2型糖尿病并發(fā)癥并發(fā)癥的發(fā)病率最近升高，關(guān)于這種臨床疾病的藥物篩選試驗(yàn)也在增加。本實(shí)驗(yàn)對這種疾病的模型進(jìn)行了研究。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動物的飼料鏈脲佐菌素(STZ,SigmaUSA)0.1mol/L檸檬酸緩沖液pH=4.2(自配,0.22nm濾膜過濾滅菌)。高脂飼料(H.E)(配方:10.0%豬油,10.0%蔗糖,2.5%膽固醇,0.4%膽酸鈉,77.1%的基礎(chǔ)飼料)訂購于湖北省實(shí)驗(yàn)動物中心。Wistar大白鼠[SPF級,體重(200±20)g],雄性48只,購于湖北省實(shí)驗(yàn)動物中心,動物合格證號:SCXK(鄂)2003-0005。強(qiáng)生便攜血糖儀及強(qiáng)生8號血糖試紙。1.2大鼠的飲食和飲水動物購進(jìn)后,觀察1周,選取健康動物隨機(jī)分為正常組、STZ組、H.E組、H.E+STZ組,其中,正常組、STZ組給予正常飲食、飲水,H.E組和H.E+STZ組給予正常飲水和H.E,大鼠自由采食。1.3兩組stz檸檬酸緩沖液的注射在實(shí)驗(yàn)動物給予10dH.E后,STZ組和H.E+STZ組空腹腹腔注射9g/LSTZ檸檬酸溶液(45mg/kg)一次,正常組和H.E組注射相同給藥容量的檸檬酸緩沖液。全部實(shí)驗(yàn)動物正常飲水。1.4d空腹血糖d電STZ注射后斷尾取血測定1、2、3、10、20d空腹血糖;在注射后第10天每組6只頸動脈放血處死,取血,分離血清送檢驗(yàn)科測血脂全套,取肝臟、胰腺做病理;注射后第20天同樣處理剩下的大鼠。1.5stz注射前后大鼠變化每4d觀測動物外觀和體重并做記錄。在STZ注射之前動物皮毛光澤油亮、順滑,精神狀態(tài)佳,行動敏捷,糞尿正常。STZ注射后第3天2個注射組老鼠發(fā)生明顯變化,精神萎靡,活動明顯減少,皮毛干燥粗糙,尿量增多。注射組體重明顯下降。隨著時間推移逐漸恢復(fù),但動物狀態(tài)仍然比非注射組差,體重也比非注射組輕。體重變化見圖1。1.6統(tǒng)計處理所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果用統(tǒng)計軟件SPSS8.0進(jìn)行分析,結(jié)果均以表示,用配對t檢驗(yàn)比較結(jié)果。2結(jié)果2.1造模和血糖檢測注射STZ后大鼠血糖明顯升高,其中H.E+STZ組要高于STZ組,3d時有明顯趨勢,但無統(tǒng)計學(xué)意義。10d和20d時P<0.05(表1),且兩組動物都達(dá)到2型糖尿病的造模標(biāo)準(zhǔn)。H.E組血糖有少量升高。本實(shí)驗(yàn)中也觀察到了Wistar大白鼠STZ造模后的自我恢復(fù)現(xiàn)象,但因?yàn)樽⑸銼TZ后飼養(yǎng)的時間不長尚無法知道結(jié)果。2.2血液中的血液抑制見表2。說明STZ對血脂的升高有明顯協(xié)同作用。其具體機(jī)制是STZ的直接作用還是造成胰島損傷后引發(fā),或者是其他機(jī)制還不清楚。2.3病理結(jié)果3不同劑量stz和h.e對大鼠血糖和胰腺組織結(jié)構(gòu)的影響2型糖尿病作為世界第三大疾病,對人們的健康危害很大。其有一系列的并發(fā)癥,并發(fā)高血脂現(xiàn)在比較常見。據(jù)文獻(xiàn)報道在中國的發(fā)病率也有上升。2型糖尿病病人體內(nèi)存在胰島素抵抗,而胰島素抵抗可以直接導(dǎo)致脂質(zhì)代謝紊亂,高血糖易伴發(fā)高血脂。雖然這些相互作用的機(jī)制還不清楚,但在動物體內(nèi)也需要考慮這些因素間的相互作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明聯(lián)合應(yīng)用STZ和H.E與單獨(dú)應(yīng)用其中的一種是有較大的區(qū)別的。以前曾經(jīng)有血糖的變化對STZ的劑量有依從性,高脂喂養(yǎng)大鼠的胰島B細(xì)胞對STZ的敏感性增大的報道。本實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)一步說明STZ應(yīng)用后對血脂的升高作用很強(qiáng),而合用H.E也可以降低STZ的用量,且同樣可以有很好的高血糖造模效果。大鼠的生命周期較短,本實(shí)驗(yàn)室以往的研究表明單純給予H.E,TG需要較長時間才能達(dá)到造摸標(biāo)準(zhǔn),而且在模型成功時動物的肝臟已經(jīng)發(fā)生不易逆轉(zhuǎn)的脂肪肝甚至肝纖維化。一次大劑量給予STZ對動物的副作用比較大,動物的死亡率要高于低劑量STZ聯(lián)合H.E,而且STZ的成本很高。所有這些表明聯(lián)合應(yīng)用STZ和H.E在短時間內(nèi)造成可以被逆轉(zhuǎn)的高血脂高血糖模型有很大的優(yōu)勢。特別是隨著人們生活水平的提高,保健品的研究越來越多,這個造摸方法在保健品的研究領(lǐng)域會有更大的應(yīng)用空間。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時各組動物肝臟外觀正常,病理顯示肝小葉結(jié)構(gòu)清晰,肝細(xì)胞索排列整齊,肝竇正常,細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰可見,未見脂肪變性及炎癥反應(yīng)。無脂肪肝和纖維化改變,說明動物還屬于高脂血癥(圖2~4)