液相色譜法基本原理

液相色譜法根本原理島津LC-2023AHT簡(jiǎn)介JiangXue液相色譜法簡(jiǎn)介1.色譜法及其起源2.液相色譜法根本原理及其應(yīng)用3.液相色譜儀根本構(gòu)造4.樣品前處理JiangXue色譜法起源石油醚（流動(dòng)相）碳酸鈣顆粒（色譜柱）色素混合物（試樣）色譜分離組分JiangXue液相色譜根本原理色譜法：利用組分在兩相間分配系數(shù)不同而進(jìn)行別離的技術(shù)流動(dòng)相：攜帶樣品流過整個(gè)系統(tǒng)的流體，如甲醇，乙腈等固定相：靜止不動(dòng)的一相，色譜柱色譜是一種別離技術(shù).色譜的主要目的是對(duì)混合物中的目標(biāo)物別離和定量JiangXue液相色譜應(yīng)用范圍以液體作為流動(dòng)相的色譜別離方法適用于高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性和熱穩(wěn)定性差的化合物的分析。如廣泛應(yīng)用于食品分析，環(huán)境分析，農(nóng)業(yè)分析，石油化工分析等領(lǐng)域。JiangXue液相色譜根本原理液相色譜方法的分類液相色譜別離方法大致可以分為正相色譜、反相色譜、離子交換色譜、疏水作用色譜、體積排除色譜、親和色譜以及手性色譜。在高效液相色譜法中，目前應(yīng)用得最廣泛的是正相色譜和反相色譜，其中反相色譜是重點(diǎn)應(yīng)用。

色譜別離原理正相色譜的別離原理：根據(jù)溶質(zhì)極性的不同而產(chǎn)生的溶質(zhì)在吸附劑上吸附性強(qiáng)弱的差異而別離。反相色譜的別離原理：根據(jù)因溶質(zhì)疏水性的不同而產(chǎn)生的溶質(zhì)在流動(dòng)相與固定相之間分配系數(shù)的差異而別離。JiangXue液相色譜根本原理反相液相色譜柱C18(ODS)C8(octyl)C4(butyl)苯基TMS氰基流動(dòng)相極性大于固定相極性，流動(dòng)相具有運(yùn)載樣品分子和選擇性別離的雙重作用。-Si-C18H37Si非極性色譜柱JiangXue液相色譜根本原理分析條件柱

:Shim-packCLC-ODS流動(dòng)相

:MeOH:H2O=7:3流速

:1.0mL/min溫度

:40C進(jìn)樣體積

:10uL檢測(cè)器

:UV-254nm峰1.苯甲酸甲脂2.苯甲酸乙脂3.n-苯甲酸丙酯4.n-苯甲酸丁酯ODSC8TMSJiangXue液相色譜根本原理流動(dòng)相的選擇不改變固定相任何性質(zhì)高純度〔HPLC，無機(jī)械雜質(zhì)〕較低粘度對(duì)樣品溶解度適宜水的等級(jí)與檢測(cè)器相匹配JiangXue液相色譜根本原理水的等級(jí)純化水蒸餾水去離子水波長(zhǎng)(nm)純化水去離子水吸光率使用純水機(jī)或超純水機(jī)制備的HPLC用水應(yīng)為18.2MΩ的超純水，并通過0.22μm的濾膜，除去熱源、有機(jī)物、無機(jī)離子等。去離子水重蒸；二次或三次重蒸水；JiangXue液相色譜根本原理溶劑的前處理過濾：0.45um或更小孔徑濾膜脫氣：除去流動(dòng)相中溶解或因混合而產(chǎn)生的氣泡氣泡對(duì)測(cè)定的影響：?泵中氣泡使液流波動(dòng)，改變保存時(shí)間和峰面積?色譜柱中氣泡使流動(dòng)相繞流，峰變形?檢測(cè)器中的氣泡產(chǎn)生基線波動(dòng)方法：超聲脫氣，減壓脫氣，在線脫氣JiangXue液相色譜根本原理常用檢測(cè)器紫外檢測(cè)器〔包括二極管陣列檢測(cè)器〕熒光檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器電導(dǎo)檢測(cè)器蒸發(fā)光散射檢測(cè)器質(zhì)譜檢測(cè)器JiangXue液相色譜根本原理紫外檢測(cè)器?原理：基于被分析組分對(duì)特定波長(zhǎng)的選擇性吸收?定量根底：朗伯-比耳定律，A＝kCL?優(yōu)點(diǎn)：1〕靈敏度高2〕對(duì)溫度和流速不敏感3〕可用于梯度洗脫?注意：僅適用于測(cè)定有紫外吸收的物質(zhì)JiangXue液相色譜根本原理梯度洗脫?流動(dòng)相由幾種不同極性的溶劑組成。?通過在某些時(shí)間段改變流動(dòng)相中各溶劑組成的比例改變流動(dòng)相的極性。?使樣品中的各組分可在最短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)最正確別離。如：0-3min使用40%水+60%甲醇，3-15min40%水→10%，同時(shí)60%甲醇→90%JiangXue液相色譜根本原理

不同組成的流動(dòng)相對(duì)樣品別離有很大的影響。20%H2O+80%甲醇

30%H2O+70%甲醇

40%H2O+60%甲醇JiangXue島津LC-2023AHT簡(jiǎn)介ShimadzuLC-2023AHT色譜柱：Shim-PackVP-ODS150mmΦ4.6mm檢測(cè)器：UV200nm-650nm 流動(dòng)相：甲醇(HPLC)，水分析物質(zhì)：酚類〔五種〕，鄰苯二甲酸酯類〔兩種〕JiangXue島津LC-2023AHT簡(jiǎn)介由流動(dòng)相組成的溶劑在輸液泵的作用下，通過管道輸入系統(tǒng)內(nèi)，并保持穩(wěn)定而準(zhǔn)確的流速。進(jìn)樣器是樣品進(jìn)入液相色譜儀的地方，在流動(dòng)相的帶動(dòng)下，樣品進(jìn)入色譜柱，柱溫箱可以為色譜柱保持恒定的溫度，樣品經(jīng)過別離最后進(jìn)入檢測(cè)器。檢測(cè)器記錄下來的數(shù)據(jù)由專門的數(shù)據(jù)處理工作站完成。輸液泵進(jìn)樣器

色譜柱柱溫箱檢測(cè)器溶劑數(shù)據(jù)處理JiangXue島津LC-2023AHT簡(jiǎn)介

A泵進(jìn)樣器色譜柱柱溫箱檢測(cè)器

B

泵AB時(shí)間

濃度JiangXue島津LC-2023AHT簡(jiǎn)介流動(dòng)相JiangXue島津LC-2023AHT簡(jiǎn)介酚類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜圖1、苯酚2、間甲酚3、2,4-二氯酚4、2,4,6-三氯酚5、五氯酚JiangXue液相色譜法根本原理島津LC-2023AHT簡(jiǎn)介結(jié)束JiangXueJiangXue島津LC-2023AHT簡(jiǎn)介JiangXu