四光柵技術與檢測技術概覽分析

2023/12/12帝肯4光柵酶標儀研發(fā)十年帝肯從1999年研發(fā)第一臺4光柵多功能酶標儀〔Safire〕開始，一直致力于為科研及藥物研發(fā)提供最先進的檢測設備。目前帝肯提供包括InfiniteM200Pro,InfiniteNanoquantPro,以及M1000在內的3款4光柵多功能酶標儀.光柵的根本原理基于入射光照射到微小pattern上時衍射光的光干預而實現(xiàn)的光色散相比傳統(tǒng)的平板直刻條紋光柵〔ruledmonochromator〕，曲面Holograph蝕刻光柵〔concavedholographmonochromator〕由于更容易加工，以及具有更緊湊的結構及更佳的分光能力而得到廣泛的利用。.雙光柵技術光線在經(jīng)過一級光柵分光后經(jīng)由中間狹縫(IntermediateSlit)到達第二級光柵進一步分光口，由出口狹縫〔ExitSlit〕得到高純度的單色光雙光柵技術可以極大地抑制雜光的影響〔一級光柵可將雜光抑制到10-3，二級光柵可將雜光抑制到10-6〕.Additive/Subtractive雙光柵雙光柵可選擇采用加和式〔Additive〕或差減式(Subtractive)配置差減式配置采用特別的光軸配置，在有效抑制雜光及高次分光的同時，二級光柵通過可實現(xiàn)光線的位相均一化，相當于一個BandpassFilter。差減式雙光柵被廣泛應用于熒光/發(fā)光光度計中帝肯的Safire采用的是加和式雙光柵配置，Safire2以后的所有光柵型酶標儀那么均采用差減式雙光柵配置.四光柵的根本原理4光柵〔Quad4Chromator〕光路包括雙光柵激發(fā)光光路及雙光柵發(fā)射光光路。使用雙光柵光路的最大好處是可以極大的抑制雜光〔StrayLight〕對檢測結果的影響;好的雙光柵可以將雜光抑制到入射光強的10-6以下帝肯最新一代PremiumQuad4Chromator更是將雜光率降低至2x10-7的極低水平。.帝肯4光柵動畫

VI_INF200_Quad4small102006.wmv.帝肯光柵型多功能酶標儀的更多專利技術無級可調帶寬技術〔SteplessAdjustableBandwidthSetting〕支持激發(fā)光與發(fā)射光光柵系統(tǒng)的帶寬無級調節(jié)，從而實現(xiàn)對不同的代測熒光體測定條件的最優(yōu)化。.帝肯4光柵與帶寬調節(jié)技術的結合賦予其光柵型酶標儀難以比較的優(yōu)勢：真正的全波長應用Quad4Chromator提供從紫外到紅外的真正全波長應用；由于Quad4Chromator不采用任何波長截斷濾光片，在全波長范圍內不會出現(xiàn)波長失真情況。更高的靈敏度Quad4Chromator采用差減式雙光柵設計，在極大的抑制雜光的同時，保證到達檢測物質的光強。無級可調帶寬技術可實現(xiàn)對特定熒光物質的最正確檢測條件M1000在提供全波長應用的同時，也提供驚異的比美濾光片型酶標儀的敏感度。更快的掃描速度Quad4Chromator技術極大的提高熒光光譜掃描，實現(xiàn)高速3D熒光光譜；這對未知熒光物質的特定與特性剖析極為有用。.帝肯多功能酶標儀提供多彩的檢測模式光吸收模式單或多通道光吸收測量M1000提供高速的“飛行〞測量模式熒光強度模式頂部或底部熒光偏振模式實現(xiàn)高速偏振片切換時間分辨熒光模式結合可變頻激發(fā)模式及無級帶寬可調技術.帝肯多功能酶標儀提供多彩的檢測模式〔續(xù)〕熒光共振能量轉移模式Quad4Chromator提供高速的波長切換，實現(xiàn)高效的比值測定〔ratiomeasurement〕時間分辨熒光能量轉移模式時間分辨與能量結合技術的結合，實現(xiàn)更高的靈敏度發(fā)光模式檢測光纖Z周自動調節(jié)與PMT動態(tài)增益技術持續(xù)發(fā)光〔通常指發(fā)光時間持續(xù)1分鐘以上瞬時發(fā)光〔配合加樣器選件〕以及雙色發(fā)光.光吸收模式.熒光模式.發(fā)光模式.內容提要帝肯公司簡介帝肯Detection事業(yè)部簡介“4光柵〞技術與Infinite系列多功能酶標儀多功能酶標儀的常見應用新產(chǎn)品介紹.多點測量A16.多點測量B17.18尋找微量樣品的信號檢測焦點，減少試劑使用減少檢測器與檢測板間隙，使孔間干擾降到最低檢測器自動/手動Z軸聚焦〔高度調整〕.多功能酶標儀的常見檢測手法光吸收吸光度〔定量〕光譜學特征〔吸光光譜〕熒光熒光強度及其衍生方法熒光光譜學研究〔激發(fā)/發(fā)射/3D〕發(fā)光單色/雙色發(fā)光穩(wěn)態(tài)/瞬時發(fā)光.光吸收應用例1：ELISA:Enzymelinkedimmunosorbantassay抗體抗原E偶聯(lián)物S底物固態(tài)基質〔微孔板〕ESPSP.ELISA為主酶標儀的選擇基準對應波長波長范圍〔F50:400-700nm,Sunrise:340-750nm)常見應用波長濾光片：405/450/492/620nm〔F50/Sunrise)Rainbow濾光片：Sunrise吸光度范圍0-4O.D.對應微孔板格式96孔還是384孔?檢測速度多通道還是單通道檢測？溫控能力有些ELISA應用需要溫度控制，溫度均一性，防止邊界效應震蕩能力數(shù)據(jù)處理能力結果簡化能力自動質控能力.光吸收應用例2：核酸/蛋白質定量A260/A280的吸光度比用于核酸的定性與定量OD260=1.0相當于50g/ml雙鏈DNA40g/ml單鏈DNA〔或RNA〕20g/ml寡核苷酸判斷核酸樣品的純度DNA純品:OD260/OD280=1.8RNA純品:OD260/OD280=2.0A280吸光度值用于蛋白質定量.核酸定量的酶標儀選擇基準對應波長范圍Infinite系列酶標儀器:230nm-1000nm波長準確度InfiniteM200Pro:<±0.3nmforλ≤315nm樣本預計濃度不同，推薦的方法也不同中高濃度核酸〔2ug-3700ug/ml〕/微量體積〔1-2ul〕：吸收光NanoQuant中等濃度核酸〔2ug-200ug/ml〕/普通體積〔100ul〕：吸收光UV透明微孔板低濃度核酸〔1ng/ml-20ug/ml〕：熒光PicoGreen，黑色微孔板.使用NanoQuant對蛋白質定量應用例.蛋白質定量的其他方法BradfordAssay蛋白質與CoomassieBrilliantBlue結合BCA?ProteinAssayCu(+)螯合物ModifiedLowryProteinAssay改進的Lowry法.BradfordAssay.BCA?ProteinAssay.ModifiedLowryProteinAssay.多功能酶標儀的常見熒光/發(fā)光檢測手法FRETPE:BRET2TMInvitrogen:Z’LyteTMInvitrogen:GeneBlazerTMTRFPE:Delfia?TR-FRETCisBio:HTRF?

Invitrogen:LanthaScreenTMPE:LanceTM.多功能酶標儀的常見檢測手法FPInvitrogen:Far-RedPolarScreenTM

Invitrogen:GlucocorticoidReceptorAssayTMLumiFlashLumi–e.g.Ca2+DetectionGlowLumi–e.g.ReporterGeneAssays.FRET原理XnmYnmD給體Ex1/Em1受體AZnmEx2/Em2Em1~Ex2能量轉移10-100?.常見FRET染料對DonorAcceptorFluoresceinTAMRACy3Cy5IAEDANSFluoresceinEDANSDABCYLECFPEYFPCoumarinFluoresceinEuropiumAllophycocyanine,Cy5TerbiumFluorescein,Rhodamine.BRET原理〔給體及受體為發(fā)光蛋白〕.時間分辨測定原理代測熒光團熒光壽命介于微秒到毫秒之間適當?shù)难舆t時間以消除背景熒光的影響優(yōu)選積分時間獲得最大信號優(yōu)點：低背景及高信噪比激發(fā)光托尾積分時間熒光time(

s)400800.TR-FRETTR-FRETABXnmYnmZnmEu,Tb=DONORAllophycocyanine(XL-665),Fluorescein,Rhodamine=ACCEPTOR選用長壽命熒光體作為給體〔通常為稀土類元素〕.TR-FRET原理.熒光偏振原理熒光體〔小分子〕受激發(fā)后高速自轉，幾乎無熒光偏振同大分子結合后熒光體自轉變慢，實現(xiàn)熒光偏振測量.發(fā)光檢測〔持續(xù)發(fā)光或瞬間發(fā)光〕AEQUORINCa2+LUMINESCENCESIGNAL持續(xù)發(fā)光lightLuciferinFIREFLYLUCIFERASEOxyluciferin+AT