專(zhuān)題2 課題3 分解纖維素的微生物的分離

專(zhuān)題2微生物的培育與運(yùn)用課題3分解纖維素的微生物的分別一.根底知識(shí)㈠.纖維素與纖維素酶1.纖維素纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是含量最豐富的多糖類(lèi)物質(zhì)。纖維素能被土壤中某些微生物分解利用，這是由于它們可以產(chǎn)生纖維素酶。棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物。纖維素可用于紡織工業(yè)，可造紙；食物中膳食纖維可刺激胃腸蠕動(dòng)和分泌消化液，有助于食物的消化和排泄等。2.纖維素酶纖維素酶是一種復(fù)合酶，普通以為它至少包括三種組分，即C1酶(外切酶)、CX酶(內(nèi)切酶)和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維二糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶葡萄糖纖維素3.纖維素的分解：能分解纖維素的微生物，有各種細(xì)菌、真菌和少數(shù)放線(xiàn)菌。㈡.纖維素分解細(xì)菌的挑選：1.方法：剛果紅染色法。2.原理：剛果紅可以與纖維素構(gòu)成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物無(wú)法構(gòu)成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以經(jīng)過(guò)能否產(chǎn)生透明圈來(lái)挑選纖維素分解菌。3.優(yōu)點(diǎn)：該方法可以經(jīng)過(guò)顏色反響直接挑選。二.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作㈠.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：〖旁欄思索題〗本實(shí)驗(yàn)的流程與課題2中的實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同？提示：本實(shí)驗(yàn)流程與課題2的流程的區(qū)別如下。課題2是將土樣制成的菌懸液直接涂布在以尿素為獨(dú)一氮源的選擇性培育基上，直接分別得到菌落。本課題經(jīng)過(guò)選擇培育，使纖維素分解菌得到增殖后，再將菌液涂布在選擇培育基上。其他步驟根本一致。土壤取樣選擇培育梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落㈡.操作過(guò)程：1.土壤取樣：采集土樣時(shí)，應(yīng)選擇富含纖維素的環(huán)境。假設(shè)找不到適宜環(huán)境，可將濾紙埋在土壤中一個(gè)月左右，也會(huì)有能分解纖維素的微生物生長(zhǎng)?！寂詸谒妓黝}〗為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋覓纖維素分解菌？答：生物順應(yīng)一定環(huán)境，環(huán)境對(duì)生物具有選擇作用，只需在纖維素含量豐富的環(huán)境中纖維素分解菌的含量才會(huì)高于其它普通環(huán)境，從而提高獲得目的微生物的幾率?！寂詸谒妓黝}〗將濾紙埋在土壤中有什么作用？他以為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？答：人工設(shè)置適宜環(huán)境，使纖維素分解菌相對(duì)聚集。將紙埋于深約10cm的腐殖土壤中。2.選擇培育⑴.選擇培育的目的：添加纖維素分解菌的濃度，以確?？梢詮臉悠分蟹謩e到所需求的微生物。⑵.制備選擇培育基：參照課本29頁(yè)旁欄中的比例配置，回答以下問(wèn)題：①旁欄中的配方是液體培育基還是固體培育基？為什么？答：是液體培育基，緣由是配方中無(wú)凝固劑。②這個(gè)培育基對(duì)微生物能否具有選擇作用？假設(shè)具有，是如何進(jìn)展選擇的？答：有選擇作用，本配方中的碳源是纖維素，所以能分解纖維素的微生物可以大量繁衍。③他能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，闡明選擇培育基的作用答：用牛肉膏蛋白胨培育基與之對(duì)照。⑶選擇培育：將土樣參與裝有30ml選擇培育基的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度下震蕩培育1～2天，直至培育液變渾濁。也可反復(fù)選擇培育?！寂詸谒妓黝}〗為什么選擇培育可以“濃縮〞所需的微生物？提示：在選擇培育的條件下，可以使那些可以順應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁衍，而那些不順應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物的繁衍被抑制，因此可以起到“濃縮〞的作用。3.梯度稀釋按照課題1的稀釋操作方法，將選擇培育后的培育基進(jìn)展等比稀釋101～107倍。4.將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基上⑴制備培育基:參照課本旁欄中的比例配制。⑵倒平板操作。⑶涂布平板：將稀釋度為104～106的菌懸液各取0.1ml涂布到平板培育基上，30℃倒置培育，菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)明顯的透明圈。⑷挑選產(chǎn)生透明圈的菌落(參照課本剛果紅染色法，挑選產(chǎn)生透明圈的菌落,即為分解纖維素的菌落.)染色法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)方法一方法二5.剛果紅染色法方法一：先，再參與剛果紅進(jìn)展顏色反響。方法二：在時(shí)就參與剛果紅?！寂詸谒妓黝}〗這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與缺乏？培育微生物倒平板顏色反響根本上是纖維素分解菌的作用操作繁瑣剛果紅會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜操作簡(jiǎn)便不存在菌落混雜問(wèn)題產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，構(gòu)成明顯的透明圈。三.結(jié)果分析與評(píng)價(jià)㈠.實(shí)驗(yàn)樣品選擇可以在樹(shù)林富含腐殖土中取樣，其環(huán)境表現(xiàn)為潮濕、枯枝落葉多。分解纖維素的菌數(shù)量多。㈡.提示：利用纖維素分解菌的選擇培育基，經(jīng)富集培育后梯度稀釋?zhuān)?jīng)鑒別培育基培育，就可以分別到可以產(chǎn)生透明圈的微生物，它們是纖維素分解菌或者是真菌。㈢.提示：分解纖維素的微生物有很多，有真菌、放線(xiàn)菌及細(xì)菌。四.課外延伸閱讀“課題延伸〞，回答：1.為了確定分別得到的是纖維素分解菌，還需求進(jìn)展