兔單B細(xì)胞單抗制備服務(wù)技術(shù)問(wèn)答-20240109

兔單抗制備過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題及解決措施在制備兔單抗的過(guò)程中，可能會(huì)遇到一些常見(jiàn)問(wèn)題，以下是一些可能的問(wèn)題和相應(yīng)的解決方法：兔單抗的特異性不足是什么導(dǎo)致的？抗體如果發(fā)生了與非目標(biāo)蛋白的結(jié)合，那么可能導(dǎo)致抗體的特異性不足。發(fā)生這種情況可以重新評(píng)估抗原選擇，優(yōu)化抗原的純度和質(zhì)量，調(diào)整免疫方案以提高特異性[1]。用流式可以一次分選多少個(gè)抗原特異性的單個(gè)B細(xì)胞？目前，F(xiàn)ACS法的通量是一天可以分選10板抗原特異性的單B細(xì)胞?？贵w的產(chǎn)量低該怎么辦？如出現(xiàn)抗體產(chǎn)量低的情況，可以調(diào)整免疫方案，適當(dāng)增加免疫次數(shù)，也可以使用強(qiáng)化的免疫佐劑。抗體親和力低怎么辦？如出現(xiàn)抗體親和力低的情況，可以調(diào)整免疫方案，重新評(píng)估抗原選擇，也可以通過(guò)親和純化步驟來(lái)提高親和力FACS分選單B細(xì)胞，除特異性抗原標(biāo)記外，還需要其他什么surfacemarker染色？小鼠B細(xì)胞可以用CD19作為表面marker，然后通過(guò)IgG陽(yáng)性，IgM陰性來(lái)分選單細(xì)胞。兔子B細(xì)胞的表面marker目前信息比較少，分選的時(shí)候可以先根據(jù)物理參數(shù)，比如大小、顆粒度進(jìn)行分選，然后再根據(jù)IgG陽(yáng)性IgM陰性以及抗原特異性上進(jìn)行分選[2]。培養(yǎng)的記憶B細(xì)胞可以分泌抗體嗎？需要先增殖后分化成漿細(xì)胞嗎？是的，記憶B細(xì)胞需要分化成終端的漿細(xì)胞，才能分泌抗體[3]。用單個(gè)B細(xì)胞技術(shù)制備抗體，記憶B細(xì)胞和漿細(xì)胞哪種細(xì)胞更有優(yōu)勢(shì)？?jī)煞N細(xì)胞各有優(yōu)勢(shì)，記憶B細(xì)胞抗體基因拷貝數(shù)較低但在B細(xì)胞中的比例比漿細(xì)胞高。漿細(xì)胞在B細(xì)胞中的比例很低，但每個(gè)細(xì)胞含有抗體基因的拷貝數(shù)相對(duì)較高。卡梅德生物擁有豐富的經(jīng)驗(yàn)積累、嚴(yán)格的質(zhì)控體系，提供的兔單B細(xì)胞單抗制備服務(wù)的周期短、不限種屬、可獲得抗體序列，得到的抗體具有更高的特異性和親和力。為了滿足客戶的不同需求，卡梅德生物能夠提供從抗原設(shè)計(jì)，合成與修飾，到動(dòng)物免疫，噬菌體文庫(kù)構(gòu)建與篩選，下游抗體修飾與應(yīng)用鑒定等一站式技術(shù)服務(wù)。參考文獻(xiàn)GrossA,SchoendubeJ,ZimmermannS,etal.TechnologiesforSingle-CellIsolation.IntJMolSci.2015;16(8):16897-16919.[2]WallaceJL,ArforsKE,McknightGW.AmonoclonalantibodyagainsttheCD18leukocyteadhesionmoleculepreventsindomethacin-inducedgastricdamageintherabbit[J].Gastroenterology,1991,100(4):878-883.DOI:10.1016/0016-5085(91)90259-N.[3]Powell,WilliamC,Hicks,etal.Anewrabbitmonoclonalantibody(4B5)fortheimmunohistochemical(IHC)determinationoftheHER2statusinbreastcancer:comparisonwithCB11,fluorescenceinsituhybridization(FISH),andinterlaboratoryreproducibility.[J].ApplImmu