高效液相色譜的維護與保養(yǎng)培訓課件

高效液相色譜的維護與保養(yǎng)色譜泵的保養(yǎng)流動相要過濾常用緩沖液時，停泵前要用水沖洗，并用水沖洗柱塞桿清洗孔擰緊排液閥時，不要太用力，以不滲液為準更換流動相時，要保證兩種溶劑的互溶性,如不互溶，要用一種中間溶劑過渡.

例如:使用無機鹽緩沖液時,用前和用后均須用水過渡2高效液相色譜的維護與保養(yǎng)流動相的脫氣流動相脫氣的目的使色譜泵的輸液準確輸液均勻準確，并且脈動減小保留時間及色譜峰面積的重現(xiàn)性提高提高檢測的性能防止氣泡引起的尖峰基線穩(wěn)定，信噪比增加溶劑的紫外吸收本底降低保護色譜柱減少死體積防止填料的氧化3高效液相色譜的維護與保養(yǎng)流動相脫氣的方法加熱簡單，如同抽真空一起使用，其效果很好。但容易造成流動相組成的變化抽真空同上，一般在溶劑抽濾的同時，也有脫氣的效果超聲波簡單，但效果不理想。通惰性氣體（一般用氦氣）可保持連續(xù)脫氣，多用于低壓梯度在線脫氣機可保持連續(xù)脫氣，多用于低壓梯度4高效液相色譜的維護與保養(yǎng)色譜泵的排氣操作使用前，應先確認泵頭內(nèi)沒有氣體，如有氣體要按以下步驟排氣：將排液閥反時針轉(zhuǎn)2-3圈，用10ml注射器抽，直到出液按以下方法之一將泵的后面放空將U6K的C閥打開，或717設在PURGE狀態(tài)或，將參比閥打開或，把色譜柱摘下打開電源開關(guān)開大流速到6~9ml/min同時用10ml注射器從排液閥注入流動相直到泵后的流速穩(wěn)定無氣泡為止5高效液相色譜的維護與保養(yǎng)色譜泵的運行注意用外部控制器與用泵面板控制的區(qū)別有些型號的外部控制器與面板不能同時用如需要面板控制，需要斷開控制線或關(guān)閉控制器排氣后的色譜泵即可運行注意∶排氣后，先設流速為0恢復排氣時斷開的部分，如∶進樣器、色譜柱如需要，恢復排氣時斷開的控制線根據(jù)色譜柱的不同，逐漸提高流速到設定值6高效液相色譜的維護與保養(yǎng)液相色譜對流動相的要求除色譜柱對流動相的要求外，還有∶與檢測器匹配脫氣避免鹵素離子（不銹鋼系統(tǒng)）溶劑的粘度防止細菌的生長7高效液相色譜的維護與保養(yǎng)流動相的保存有機溶劑流動相:室溫下密封,避光保存緩沖鹽流動相:當日現(xiàn)配現(xiàn)用低溫下密封保存,一般不超過3天防止長菌有機溶劑與水（緩沖鹽）混配的流動相:低溫密封保存防止有機相的揮發(fā)選用適宜的容器8高效液相色譜的維護與保養(yǎng)2星期1天1星期1小時新鮮配制5101520250分保存于聚乙烯瓶中的超純水測試條件水樣:40mltraceenrichment@2.0ml/min色譜柱:C18反相柱(Waters)梯度:線性100%水－100%乙腈波長:254nm9高效液相色譜的維護與保養(yǎng)1天1星期新鮮配制5101520250分保存于標準棕色玻璃瓶中的超純水測試條件水樣:40mltraceenrichment@2.0ml/min色譜柱:C18反相柱(Waters)梯度:線性100%水－100%乙腈波長:254nm10高效液相色譜的維護與保養(yǎng)檢測器的保養(yǎng) 如長時間不用檢測器可以關(guān)掉紫外燈在4小時以上不用時，太頻繁開關(guān)也不好不要讓緩沖液長期停滯在檢測池內(nèi)用純水沖洗示差檢測器及熒光檢測器注意流動池的耐壓，不要在后面加壓11高效液相色譜的維護與保養(yǎng)關(guān)于自動進樣器的針清洗PurgeInjector與NeedleWash洗針溶劑瓶(綠色塑料管)不要放在717plus的上部，應放于717plus同一水平面洗針溶劑根據(jù)流動相的不同應有不同：異丙醇？12高效液相色譜的維護與保養(yǎng)液相色譜系統(tǒng)的清洗與鈍化一般采用30％磷酸作為清洗劑，用6M硝酸作為鈍化劑，先清洗再鈍化清洗的目的是去除不銹鋼管路及系統(tǒng)內(nèi)的污垢鈍化的目的是使不銹鋼管路的內(nèi)表面形成光滑均勻的氧化膜13高效液相色譜的維護與保養(yǎng)高效液相色譜的維護與保養(yǎng)色譜柱的使用及保養(yǎng)14高效液相色譜的維護與保養(yǎng)測柱效–良好的色譜實驗習慣拿到一根新色譜柱時，先測柱效保留在新色譜柱上測得的色譜圖，并記錄色譜測試條件定期檢測柱效定期檢測儀器的譜帶展寬15高效液相色譜的維護與保養(yǎng)計算色譜柱的柱效N理論塔板數(shù)計算公式：W s

方法Wtan 16 切線法Wh 5.54 半峰高W3s 9 3sW4s 16 4sW5s 25 5s17高效液相色譜的維護與保養(yǎng)色譜柱的正確使用及操作流動相的轉(zhuǎn)換特別是GPC柱流速(壓力)的變化幅度：0.1ml/min凝膠柱（GPC及糖柱）溫度的變化幅度專用色譜柱∶樣品及溶劑的要求18高效液相色譜的維護與保養(yǎng)色譜柱與儀器的聯(lián)接不同公司的色譜柱接頭不同。處理不當時會造成嚴重后果：色譜峰展寬（死體積）致使柱效下降或滲漏解決辦法：自制相應的轉(zhuǎn)換接頭使用“通用”型接頭（錐箍及螺母）這種錐箍在不銹鋼管上是活動的，即stop-depth長度可調(diào)。因此可以換接不同的色譜系統(tǒng)及色譜柱。從WatersPhaseSeparations公司能得到一些PEEK工程塑料的接頭,可用在各種類型的色譜柱上。19高效液相色譜的維護與保養(yǎng)色譜柱的聯(lián)接各種錐箍和管路接頭長度示意圖:20高效液相色譜的維護與保養(yǎng)譜帶展寬連接適當連接不妥由于色譜柱連接不當引起的譜帶展寬，機械問題色譜柱安裝及連接的機械因素連接不妥，造成漏液21高效液相色譜的維護與保養(yǎng)色譜柱的在線保護裝置給色譜柱提供物理的保護除去樣品及流動相中的顆粒給色譜柱提供化學的保護防止分析柱被化學污染裝置在線過濾器自裝填料保護柱預裝保護柱22高效液相色譜的維護與保養(yǎng)在線過濾器In-LineFilter，部件號WAT084560防止顆粒在色譜柱頭累積優(yōu)點：基本不影響柱效在需要高柱效的分析時中常用（如：氨基酸分析）可更換的消耗品更換濾芯，部件號WAT005139(5/pkgs)更換墊圈，部件號WAT084567(10/pkgs)23高效液相色譜的維護與保養(yǎng)保護柱可避免化學污染新型保護柱可提高整個色譜柱的柱效，甚至可作為色譜柱使用保護柱選擇：選用與色譜柱相同的填料真正起到保護作用保證色譜分離結(jié)果24高效液相色譜的維護與保養(yǎng)

使用保護柱延長色譜壽命實例：磺胺藥物分析相同保護柱與色譜柱：第950次進樣更換新SentryGuard保護柱：第951次進樣使用配SymmetryC8保護柱的色譜柱：首次進樣色譜柱的保護25高效液相色譜的維護與保養(yǎng)色譜柱的清洗對所做的樣品要有充分的了解用對該樣品洗脫能力最強的流動相清洗硅膠柱的一般方法先用甲醇洗去極性雜質(zhì)用干燥的二氯甲烷、正庚烷100~200ml依次活化鍵合相柱(烷基)的一般方法20倍柱體積的：甲醇-氯仿-甲醇-水依次沖洗若使用緩沖液，需先用不含鹽的水溶液清洗26高效液相色譜的維護與保養(yǎng)色譜柱的存放存放前的處理除去雜質(zhì)、緩沖鹽合適的存放溶劑避免色譜柱床的干涸避免機械震動防止細菌生長注意存放的溫度27高效液相色譜的維護與保養(yǎng)正確使用色譜柱（一）流動相方面除去微粒純度的要求超純水，梯度實驗時水中有機雜質(zhì)含量要低緩沖液的pH值，在填料的允許范圍內(nèi)緩沖液（鹽）的濃度溶劑：色譜純，并與填料相匹配溶劑