毛發(fā)中氟胺酮、去甲氟胺酮的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

1毛發(fā)中氟胺酮、去甲氟胺酮的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本文件描述了用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)測(cè)定毛發(fā)中氟胺酮、去甲氟胺酮的方法。本文件適用于毛發(fā)中氟胺酮及去甲氟胺酮的定性分析。本文件氟胺酮的方法檢出限為0.01ng/mg，去甲氟胺酮的方法檢出限為0.01ng/mg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GA/T122毒物分析名詞術(shù)語(yǔ)3術(shù)語(yǔ)和定義GA/T122界定的術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。4原理毛發(fā)樣品經(jīng)清洗和冷凍研磨后，以甲醇超聲法提取，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)與平行操作的空白樣品和添加樣品作對(duì)照，以保留時(shí)間、特征離子對(duì)和離子對(duì)豐度比進(jìn)行定性分析。5試劑和材料5.1試劑5.1.1除另有說(shuō)明外，所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682中一級(jí)水的要求。5.1.2甲醇：HPLC級(jí)。5.1.350％甲酸溶液：HPLC級(jí)。5.1.4乙酸銨：HPLC級(jí)。5.1.5丙酮。5.1.6甲氧那明。5.2試劑配制15.2.1含0.1％甲酸的5mmol/L乙酸銨水溶液（以配制500mL為例）：稱取0.1925g乙酸銨，加水溶解后，再加入0.5mL甲酸，用水稀釋至500mL，混勻。5.2.2100μg/mL氟胺酮、去甲氟胺酮標(biāo)準(zhǔn)液：市售氟胺酮、去甲氟胺酮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液。密封，置于冰箱中冷凍保存，保存時(shí)間12個(gè)月。5.2.3氟胺酮、去甲氟胺酮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)工作溶液：試驗(yàn)中所用其他濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)工作溶液均由上述標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液用甲醇稀釋而得。密封，置于冰箱中冷藏保存，保存時(shí)間3個(gè)月。5.2.41.0mg/mL甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取甲氧那明10mg于10mL容量瓶中，加入適量甲醇溶解并定容至刻度，配制成1.0mg/mL甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。密封，置于冰箱中冷凍保存，保存時(shí)間12個(gè)月。5.2.51.0μg/mL甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：移取1.0mg/mL甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液10μL置于10mL容量瓶中，加入適量甲醇溶解并定容至刻度，配制成1.0μg/mL甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。密封，置于冰箱中冷凍保存，保存時(shí)間3個(gè)月。5.2.62.0ng/mL甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：移取1.0μg/mL甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)工作溶液100μL置于50mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，配制成2.0ng/mL甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。密封，置于冰箱中冷凍保存，保存時(shí)間3個(gè)月。5.3材料5.3.1具蓋離心管。5.3.2具蓋研磨管。5.3.3容量瓶。6儀器設(shè)備6.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)。6.2電子天平：感量0.1mg。6.3離心機(jī)。6.4超聲波清洗儀。6.5冷凍研磨儀。6.6恒溫水浴鍋。6.7微量移液器。7操作方法7.1樣品前處理7.1.1案件樣品毛發(fā)樣品依次用適量的水和丙酮振蕩洗滌兩次，晾干后剪成約1mm段，置于冷凍研磨儀中粉碎，呈粉末狀。稱取毛發(fā)粉末20mg，加入1.0mL內(nèi)標(biāo)甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)工作液，超聲30min，離心，移取上清液，于60℃水浴空氣流下吹干。殘留物用200μL甲醇復(fù)溶，供儀器分析。7.1.2空白樣品取空白毛發(fā)樣品20mg，按7.1.1的要求，與案件樣品平行提取操作。7.1.3添加樣品取空白毛發(fā)樣品20mg，添加氟胺酮及去甲氟胺酮對(duì)照品，按7.1.1的要求，與案件樣品平行提取操作。27.2儀器檢測(cè)7.2.1儀器條件7.2.1.1液相色譜條件以下為參考條件，可根據(jù)不同儀器實(shí)際進(jìn)行調(diào)整：a)色譜柱：ZORBAXEclipsePlusC18(2.1cm×50mm，1.8μm)；b)流動(dòng)相：A為5mmol/L乙酸銨和0.1％甲酸緩沖液，B為甲醇，流動(dòng)相洗脫梯度見(jiàn)表1；表1流動(dòng)相梯度洗脫程序55555c)流速：0.3mL/min；d)柱溫：35℃;e)進(jìn)樣量：1.0μL。7.2.1.2質(zhì)譜條件7.2.1.2.1以下條件作為參考，可根據(jù)不同儀器實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整：a)離子源：電噴霧電離-正離子模式(ESI+)；b)檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；c)離子源電壓(IS)：4800V；d)碰撞氣(CAD)、氣簾氣(CUR)、霧化氣(GS1)、輔助氣(GS2)均為高純氮?dú)?，使用前調(diào)節(jié)各氣流流量以使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測(cè)要求；e)噴霧電壓(IS)、去簇電壓(DP)、碰撞能量(CE)等電壓值應(yīng)優(yōu)化至最佳靈敏度。7.2.1.2.2在以上色譜、質(zhì)譜條件下，氟胺酮、去甲氟胺酮和內(nèi)標(biāo)物的定性離子對(duì)和保留時(shí)間見(jiàn)表2。氟胺酮、去甲氟胺酮的MRM色譜圖參見(jiàn)附錄A。表2氟胺酮、去甲氟胺酮和內(nèi)標(biāo)物的定性離子對(duì)和保留時(shí)間7.2.2進(jìn)樣分別吸取案件樣品、空白樣品和添加樣品提取液，按7.2.1的條件進(jìn)樣分析。37.2.3記錄記錄案件樣品、空白樣品和添加樣品中氟胺酮和去甲氟胺酮可疑色譜峰的保留時(shí)間、特征離子和離子對(duì)豐度比。7.2.4定性判斷依據(jù)以保留時(shí)間、質(zhì)譜特征碎片離子峰和離子對(duì)相對(duì)豐度比作為定性判斷依據(jù)。如果案件樣品中出現(xiàn)氟胺酮和去甲氟胺酮的兩對(duì)定性離子對(duì)的特征色譜峰，保留時(shí)間與添加樣品中相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的色譜峰保留時(shí)間比較，相對(duì)誤差在±2.5％內(nèi)，且定性離子對(duì)豐度比與濃度相近添加樣品的離子對(duì)豐度比的相對(duì)誤差不超過(guò)表3規(guī)定的范圍，則可判斷案件樣品中存在該種目標(biāo)物。表3相對(duì)離子對(duì)豐度比的最大允許相對(duì)誤差相對(duì)離子對(duì)豐度比/(%)允許的相對(duì)誤差/(%)8分析結(jié)果評(píng)價(jià)8.1陰性結(jié)果評(píng)價(jià)8.1.1如果案件樣品中僅檢出內(nèi)標(biāo)甲氧那明，未檢出氟胺酮和去甲氟胺酮，則陰性結(jié)果可靠。8.1.2如果案件樣品中未檢出內(nèi)標(biāo)，則陰性結(jié)果不可靠，應(yīng)按第7章重新提取檢驗(yàn)。8.2陽(yáng)性結(jié)果評(píng)價(jià)8.2.1如果案件樣品中檢出氟胺酮、去甲氟胺酮且空白樣品無(wú)干擾，則陽(yáng)性結(jié)果可靠。8.2.2如果案件樣品中檢出氟胺酮、去甲氟胺酮且空白樣品亦