醒腦開(kāi)竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用

關(guān)于醒腦開(kāi)竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用醒腦開(kāi)竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用對(duì)醒腦開(kāi)竅法的認(rèn)識(shí)醒腦開(kāi)竅法為什么可廣泛應(yīng)用于中風(fēng)醒腦開(kāi)竅代表藥的實(shí)驗(yàn)研究第2頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天醒腦開(kāi)竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用對(duì)醒腦開(kāi)竅法的認(rèn)識(shí)醒腦開(kāi)竅法為什么可廣泛應(yīng)用于中風(fēng)醒腦開(kāi)竅代表藥的實(shí)驗(yàn)研究第3頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天醒腦開(kāi)竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用關(guān)于開(kāi)竅法：是通過(guò)開(kāi)閉通竅以蘇醒神志的治療方法分涼開(kāi)和溫開(kāi)兩大類(lèi)第4頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天醒腦開(kāi)竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用具體方法：清熱開(kāi)竅－安宮牛黃丸、紫雪丹、至寶丹溫通開(kāi)竅－蘇合香丸辟穢開(kāi)竅－行軍散豁痰開(kāi)竅－菖蒲郁金湯通腑開(kāi)竅－大承氣湯通瘀開(kāi)竅－通竅活血湯第5頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天直接開(kāi)竅法－芳香開(kāi)竅安宮牛黃丸蘇合香丸君麝香.冰片芳香開(kāi)竅醒神君麝香.冰片.蘇合香.安息香芳香開(kāi)竅醒神牛黃清熱、化痰、定驚臣犀角.黃連.黃芩.梔子助牛黃清熱臣木香.檀香.沉香.乳香.丁香.香附行氣解郁辟穢散寒郁金助麝香開(kāi)竅佐朱砂.珍珠.金箔安神佐蓽茇.白術(shù)溫中補(bǔ)氣雄黃助牛黃解毒朱砂安神使蜂蜜和胃調(diào)中犀角、訶子反佐醒腦開(kāi)竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用第6頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天麝香（臍香，當(dāng)門(mén)子，麝臍香）始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品。《本草求真》：“辛溫芳烈，開(kāi)關(guān)利竅。無(wú)處不到，如邪氣著人淹閉不起，則關(guān)竅閉塞，登時(shí)眼翻手握。僵仆昏地，故必用此辛香自?xún)?nèi)達(dá)外，則毫毛骨節(jié)俱開(kāi)，而邪始從外出……”《本草綱目》：“蓋麝香走竄，能通諸竅之不利，開(kāi)經(jīng)絡(luò)壅遏。若諸風(fēng)、諸氣、諸血、諸痛、驚癇、癥瘕諸病，經(jīng)絡(luò)壅閉，孔竅不利者，安得不用為引導(dǎo)以開(kāi)之、通之耶？”麝香第7頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天冰片（龍腦，梅片，龍腦香，梅花腦），為龍腦香料植物龍腦香樹(shù)脂的加工品，始載于《新修本草》。味辛苦，微寒無(wú)毒，性善走竄，無(wú)往不達(dá)。《本草綱目》：“通諸竅，散郁火?！薄侗静菅芰x》“獨(dú)行則勢(shì)弱、佐使則有功”。冰片第8頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天醒腦開(kāi)竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用醒腦開(kāi)竅法介紹醒腦開(kāi)竅法為什么可廣泛應(yīng)用于中風(fēng)醒腦開(kāi)竅代表藥的實(shí)驗(yàn)研究第9頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天中風(fēng)病因病機(jī)積損正衰飲食不節(jié)情志所傷外邪入中病因風(fēng)火痰虛瘀病機(jī)中風(fēng)發(fā)病中經(jīng)絡(luò)中臟腑閉證脫證第10頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天中風(fēng)病因病機(jī)水瘀互結(jié)毒損腦絡(luò)神竅閉阻中風(fēng)病機(jī)新觀(guān)點(diǎn)第11頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天意識(shí)產(chǎn)生的機(jī)制意識(shí)水平——開(kāi)關(guān)系統(tǒng)特異上行投射系統(tǒng)（影響?。┓翘禺惿闲型渡湎到y(tǒng)（影響大）腦干網(wǎng)狀上行激活系統(tǒng)腦干網(wǎng)狀上行抑制系統(tǒng)意識(shí)內(nèi)容——大腦皮層的高級(jí)活動(dòng)記憶、思維、定向、情感、精神、視、聽(tīng)、語(yǔ)言、技巧性運(yùn)動(dòng)、復(fù)雜反應(yīng)第12頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天上行投射系統(tǒng)腦干上部網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)效應(yīng)區(qū)丘腦非特異性核團(tuán)邊緣系統(tǒng)舊皮質(zhì)新大腦皮質(zhì)被蓋中央腹側(cè)束被蓋中央背側(cè)束腦干網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)聯(lián)絡(luò)區(qū)特異性上行投射系統(tǒng)下丘腦后區(qū)中央灰質(zhì)腦干下部網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)尾狀核側(cè)支紅色：激活通路黑色：抑制通路第13頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天中風(fēng)病因病機(jī)風(fēng)閉中風(fēng)之后便無(wú)風(fēng)，風(fēng)過(guò)則凋敝狹義的閉竅僅指思維、意識(shí)、精神狀態(tài)、認(rèn)知能力等功能障礙。廣義之“閉竅”則泛指由腦神受損所導(dǎo)致的一切外在生命活動(dòng)的障礙，中風(fēng)病無(wú)論有無(wú)神志障礙均可視為“竅閉神匿、神不導(dǎo)氣”。病因之風(fēng)、癥狀之風(fēng)病機(jī)之風(fēng)、病名之風(fēng)第14頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天中風(fēng)病因病機(jī)積損正衰飲食不節(jié)情志所傷外邪入中病因風(fēng)火痰虛瘀病機(jī)中風(fēng)發(fā)病中經(jīng)絡(luò)中臟腑閉證脫證腦竅閉阻第15頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天醒腦開(kāi)竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用為什么古代醫(yī)家認(rèn)為開(kāi)竅方藥不宜早用和久用？第16頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天醒腦開(kāi)竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用醒腦開(kāi)竅法介紹醒腦開(kāi)竅法為什么可廣泛應(yīng)用于中風(fēng)醒腦開(kāi)竅代表藥的實(shí)驗(yàn)研究第17頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天醒腦開(kāi)竅法在中風(fēng)中的應(yīng)用麝香配伍冰片對(duì)局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠影響的實(shí)驗(yàn)研究國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（編號(hào)：300400580）廣東省科技廳項(xiàng)目（編號(hào)：2004B33001014）第18頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天一:麝香配伍冰片抗大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的療效觀(guān)察大鼠神經(jīng)功能障礙、腦梗死體積;腦組織含水量、BBB通透性;神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的改變。實(shí)驗(yàn)研究二:麝香配伍冰片抗大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的分子機(jī)制研究

麝香配伍冰片對(duì)腦缺血再灌注后腦水腫相關(guān)因子AQP-4mRNA定量表達(dá)的影響。麝香配伍冰片對(duì)腦缺血再灌注后炎癥反應(yīng)相關(guān)因子ICAM-1mRNA定量表達(dá)的影響。第19頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天藥物

麝香、冰片懸濁液（每毫升含人工麝香0.1mg，冰片0.3mg），用1%吐溫80液配成；麝香懸濁液（每毫升含人工麝香0.1mg），用1%吐溫80液配成；冰片懸濁液（每毫升含冰片0.3mg）；用1%吐溫80液配成；動(dòng)物分組給藥方法在造模前3天開(kāi)始灌胃給藥(10ml/kg/d)，每天兩次，再于缺血前30min給藥一次，缺血后12h與24h各給藥一次假手術(shù)組模型組麝香配伍冰片組麝香組冰片組SD大鼠第20頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、神經(jīng)功能缺損評(píng)分

Bederson氏6級(jí)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),主要通過(guò)觀(guān)察動(dòng)物的行為變化進(jìn)行評(píng)分。

0分:沒(méi)有可見(jiàn)的神經(jīng)功能缺失；

1分:左側(cè)前爪不能伸直；

2分:行走時(shí)斷續(xù)向左側(cè)傾斜劃圈；

3分：向左側(cè)持續(xù)轉(zhuǎn)圈；

4分:向左側(cè)傾倒；

5分：不能行走。觀(guān)察指標(biāo)第21頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、腦梗死體積測(cè)定(TTC染色法)大鼠腦缺血2h再灌注24h后，麻醉后斷頭處死，迅速取出大鼠大腦;將大腦置0℃生理鹽水中15min，再取出從額極間隔2mm連續(xù)做6個(gè)腦組織冠狀切片;置2％TTC溶液中，37℃水浴箱恒溫孵育30min;置10%甲醛中固定24后，數(shù)碼相機(jī)拍照，病理圖像分析軟件測(cè)量梗死灶面積，以梗死灶體積占全腦體積的百分率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。觀(guān)察指標(biāo)第22頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天

假手術(shù)組模型組麝冰組結(jié)果:組別n神經(jīng)功能缺損評(píng)分相對(duì)腦梗死體積％假手術(shù)組600模型組73.71±0.4918.08±6.51麝冰組72.14±0.69△

8.96±4.85◎麝香組62.83±0.75◎12.19±6.7冰片組63.17±0.7515.38±6.99△與模型組比較P<0.01，◎與模型組比較P<0.05第23頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)三麝香配伍冰片對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠腦含水量及血腦屏障通透性影響

腦含水量

干濕重法測(cè)定BBB通透性（Evans-blue檢測(cè)法）1、伊文思藍(lán)—甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備將伊文思藍(lán)5mg溶于10ml的甲酰胺中,然后梯度稀釋成不同濃度;

在紫外分光光度計(jì)上測(cè)定其吸光度，測(cè)定波長(zhǎng)為620nm，以濃度(C)為橫坐標(biāo)，以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，求得回歸方程:

Y=0.0423X+0.0447

(Y為吸光度，X為濃度)第24頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、BBB通透性實(shí)驗(yàn)方法：腦缺血2h再灌注23h（處死前1小時(shí)），從大鼠股靜脈注入2%Evansblue生理鹽水液(3ml/kg);1小時(shí)后打開(kāi)胸腔，用生理鹽水經(jīng)左心室灌注，將血管中的伊文思藍(lán)沖洗干凈，斷頭取腦。第25頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天取缺血側(cè)大腦皮質(zhì)，用濾紙吸干表面水分，精密稱(chēng)重，并置于含4ml二甲基甲酰胺的試管中，50℃孵育48h，再離心15min(3000r/min),取上清液用HitachiU2001分光光度計(jì)測(cè)定其吸光度，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程得出伊文思藍(lán)的濃度（ug/g）。

第26頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天結(jié)果組別腦含水量（％）EB含量（μg/g腦組織）nn假手術(shù)組678.42±0.1960.52±0.73模型組681.51±0.53710.65±3.99麝冰組880.47±0.67*73.96±2.07*麝香組780.95±0.6267.27±5.62冰片組580.79±0.9364.87±1.83**與模型組比較P<0.05第27頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)四麝香配伍冰片對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠

神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)影響

觀(guān)察指標(biāo)：神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化神經(jīng)元突觸超微結(jié)構(gòu)變化第28頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天

假手術(shù)組模型組麝香配伍冰片組

神經(jīng)細(xì)胞雙層核膜清晰易辨,核較大,核內(nèi)染色質(zhì)無(wú)凝聚現(xiàn)象，胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)較多的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及核旁可見(jiàn)線(xiàn)粒體，線(xiàn)粒體形態(tài)正常神經(jīng)細(xì)胞縮小，胞膜、核膜模糊不清,核內(nèi)染色質(zhì)成團(tuán)塊狀。線(xiàn)粒體腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張。神經(jīng)細(xì)胞周?chē)障睹黠@增多；神經(jīng)細(xì)胞雙層核膜結(jié)構(gòu)完整，染色質(zhì)無(wú)凝聚現(xiàn)象，胞質(zhì)內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張不明顯，小部分線(xiàn)粒體腫脹1、神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化第29頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天麝香組冰片組神經(jīng)細(xì)胞相對(duì)完整，核膜尚清楚，染色質(zhì)分布均勻，胞質(zhì)內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，部分線(xiàn)粒體腫脹雙層核膜結(jié)構(gòu)尚完整，染色質(zhì)分布尚均勻，胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，小部分線(xiàn)粒體腫脹第30頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天假手術(shù)組：神經(jīng)細(xì)胞的軸突、樹(shù)突與膠質(zhì)細(xì)胞旁突相互交織，連結(jié)形成神經(jīng)氈，神經(jīng)氈中突觸數(shù)目眾多，突觸前、后膜致密物質(zhì)厚度對(duì)稱(chēng)，前后界膜分界清楚，輪廓完整，突觸小泡為圓形清亮小泡，大小均等，密集均勻分布于突觸前終末內(nèi)；模型組：神經(jīng)氈內(nèi)突觸減少，結(jié)構(gòu)模糊，前后界膜不清，突觸小泡數(shù)量減少甚至消失，典型的突觸結(jié)構(gòu)已遭破壞。神經(jīng)氈中軸漿電子密度降低，呈空化透明病變；麝香配伍冰片組：突觸數(shù)量較模型組明顯增多，但仍少于正常組，突觸形態(tài)大部分接近正常，線(xiàn)粒體數(shù)量增多，仍有少數(shù)線(xiàn)粒體呈現(xiàn)腫脹病變，無(wú)軸漿空化表現(xiàn)；2、神經(jīng)元突觸變化第31頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天麝香組：與模型組相近似，軸漿空化明顯，突觸數(shù)量少，形態(tài)未恢復(fù)正常，線(xiàn)粒體數(shù)目稍有增多，部分線(xiàn)粒體形態(tài)接近；冰片組：正常突觸數(shù)量較模型組稍有增多，形態(tài)尚未恢復(fù)正常，線(xiàn)粒體數(shù)目增多，但腫脹仍存，軸漿空化病變基本消失；第32頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天突觸數(shù)密度比較突觸數(shù)密度比較組別n突觸數(shù)密度假手術(shù)組526.25±2.4模型組59.30±3.55△麝冰組516.26±2.18◎麝香組511.54±2.62冰片組512.64±2.68△與假手術(shù)組比較P<0.01，◎與模型組比較P<0.05第33頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)五麝香配伍冰片對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠水通道蛋白4(AQP-4)mRNA表達(dá)影響

運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（Taqman探針?lè)ǎ┒繖z測(cè)

AQP-4mRNA的表達(dá)

1、Taqman探針、引物設(shè)計(jì)與合成

2、大鼠腦組織總RNA抽提

3、RT-PCR反應(yīng)

4、PCR擴(kuò)增

5、AQP-4pMD18-T載體的構(gòu)建及標(biāo)準(zhǔn)品的制備

6、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立

7、RealTimePCR反應(yīng)

第34頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天Taqman探針、引物設(shè)計(jì)與合成第35頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

各組樣本熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)

第36頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天結(jié)果

結(jié)果：組別n拷貝數(shù)/μg總RNA假手術(shù)組62.45×106±5.49×105模型組66.37×106±1.63×106

△麝冰組64.18×106±1.45×106

◎麝香組64.68×106±1.49×106冰片組64.24×106±1.68×106

◎△與假手術(shù)