微生物學實驗-課件

ppt課件1徐州師范大學生命科學學院微生物學實驗ppt課件1徐州師范大學1ppt課件2一、實驗內容實驗一實驗室環(huán)境和人體表面微生物的檢查（3學時）實驗二器皿的清洗包裝及干熱滅菌（3學時）實驗三培養(yǎng)基的制備及高壓蒸汽滅菌（3學時）實驗四細菌的單染色及接種技術（6學時）實驗五放線菌的形態(tài)觀察（3學時）實驗六細菌的革蘭氏染色及芽孢染色（3學時）實驗七細菌大小的測定（3學時）實驗八酵母菌形態(tài)觀察、死活細胞鑒別和數量測定（3學時）實驗九溫度對微生物生長的影響（3學時）實驗十平板菌落計數法及比濁法（6學時）實驗十一綜合設計性實驗（9學時）ppt課件2一、實驗內容實驗一實驗室環(huán)境和人體表面微生2精品資料精品資料3你怎么稱呼老師？如果老師最后沒有總結一節(jié)課的重點的難點，你是否會認為老師的教學方法需要改進？你所經歷的課堂，是講座式還是討論式？教師的教鞭“不怕太陽曬，也不怕那風雨狂，只怕先生罵我笨，沒有學問無顏見爹娘……”“太陽當空照，花兒對我笑，小鳥說早早早……”微生物學實驗--ppt課件4ppt課件5二、微生物實驗安排與考核課程簡介：必修課，45學時、1個學分基礎實驗：80%，10次自主設計實驗：20%，設計方案、實驗操作、總結、匯報考試成績按以下公式計算：平時（10％）＋操作考試（20％）＋筆試（70％）ppt課件5二、微生物實驗安排與考核課程簡介：必修課，45學5ppt課件6三、課堂紀律嚴格遵守實驗室規(guī)章制度嚴肅課堂紀律不允許無故曠課、早退（1次）遲到（2次）工作服ppt課件6三、課堂紀律嚴格遵守實驗室規(guī)章制度6ppt課件7四、實驗室安全和衛(wèi)生安全實驗室嚴禁吸煙。注意用水、防電和防火正確使用化學試劑和儀器衛(wèi)生每次實驗需留下6位同學值日，協助保持實驗室清潔ppt課件7四、實驗室安全和衛(wèi)生安全衛(wèi)生7ppt課件8實驗一實驗室環(huán)境和人體

表面微生物的檢查ppt課件8實驗一實驗室環(huán)境和人體

表面微8ppt課件9一、實驗目的1.證明實驗室環(huán)境與體表存在微生物。2.比較來自不同場所與不同條件下細菌的數量和類型。3.觀察不同類群微生物的菌落形態(tài)特征。4.體會無菌操作的重要性。ppt課件9一、實驗目的9ppt課件10二、實驗原理

平板培養(yǎng)基含有細菌生長所需要的營養(yǎng)成分，當取自不同來源的樣品接種于培養(yǎng)基上，在合宜溫度下培養(yǎng)，1-2天內每一菌體即能通過很多次細胞分裂而進行繁殖，形成一個可見的細胞群體的集落，稱為菌落。每一種細菌所形成的菌落都有它自己的特點，例如菌落的大小，表面干燥或濕潤、隆起或扁平、粗糙或光滑，邊緣整齊或不整齊，菌落透明或半透明或不透明，顏色以及質地疏松或緊密等。因此，可通過平板培養(yǎng)來檢查環(huán)境中細菌的數量和類型。ppt課件10二、實驗原理10ppt課件11三、實驗材料

棉簽、平皿（1/1人）、酒精燈、廢物缸等四、操作步驟1、寫標簽：在皿底上2、制培養(yǎng)基3、倒平板4、靜置5、接種環(huán)境或體表微生物手指（洗前后）、頭發(fā)、咳嗽、抹布、空氣中等6、培養(yǎng)37℃培養(yǎng)24h-48hppt課件11三、實驗材料11ppt課件12五、實驗報告觀察并記錄結果，觀察環(huán)境中細菌菌落形態(tài)與類型。ppt課件12五、實驗報告12ppt課件131.認識微生物學實驗基本材料及其清洗方法；

2.了解消毒和滅菌的原理，掌握干熱滅菌方法的操作步驟；3.為后續(xù)實驗做準備。一、實驗目的實驗二器皿的清洗包裝及干熱滅菌ppt課件131.認識微生物學實驗基本材料及其清洗方法；

13ppt課件14二、實驗內容（一）器皿的種類1．試管（testtube）：制作瓊脂斜面、成液體培養(yǎng)基用、制作無菌水用。2．吸管（又稱移液管，pipette）：轉移液體菌落3．培養(yǎng)皿（petridish）：由正反兩平面板互扣而成，專為防治空氣中微生物的污染而設計的。在培養(yǎng)皿內倒入適量固體培養(yǎng)基制成平板，用于分離、純化、鑒定菌種、微生物計數以及抗生素、噬菌體效價等。4．三角燒瓶（Erlenmeyerflask）與燒杯（beaker）：三角燒瓶常用的有100、250、500、1000ml等不同的大小，常用來成無菌水、培養(yǎng)基和搖瓶發(fā)酵等。燒杯用來配制培養(yǎng)基和藥品。6．載玻片（slide）與蓋玻片（coverslip）：用于微生物涂片、染色，作形態(tài)觀察用。7．接種工具：接種環(huán)、針、鏟、鉤。8.玻璃涂布器。ppt課件14二、實驗內容（一）器皿的種類14ppt課件15

1．新玻璃器皿的洗滌方法：新購置的玻璃器皿含游離堿較多，因在酸溶液內先浸泡數小時。酸溶液一般用2%的鹽酸或洗液。浸泡后用自來水沖洗干凈。

2．使用過的玻璃器皿的洗滌方法

:

(1)試管、培養(yǎng)皿、三角燒瓶、燒杯等可用瓶刷或海綿沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗滌劑刷洗，然后用自來水充分沖洗干凈。

(2)玻璃吸管吸過血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管（包括毛細吸管），使用后應立即投入盛有自來水的量筒或標本瓶內，免得干燥后難以沖洗干凈。（二）玻璃器皿的清洗方法ppt課件151．新玻璃器皿的洗滌方法：新購置的玻璃器皿含15ppt課件16

(3)載玻片與蓋玻片用過的載玻片與蓋玻片如滴有香柏油，要先用皺紋紙擦去或浸在二甲苯內搖晃幾次，使油垢溶解，再在洗衣粉水中煮沸5—10分鐘。

檢查過活菌的載玻片和蓋玻片，吸過活菌的吸管應先投入盛有2%的來蘇水或0.25%的新潔爾滅消毒液中浸泡24h后，按上述方法洗滌。帶病原菌的培養(yǎng)物應先行高壓蒸汽滅菌，然后將培養(yǎng)物倒去，再進行洗滌。玻璃器皿經洗滌后，若內壁的水均勻分布呈一薄層，表示污垢完全洗凈，若掛有水珠，則還需要用洗液浸泡數小時，然后再用自來水充分沖洗。在潔凈的載玻片上滴上水滴后應均勻散開。若成水珠狀，還應進行充分洗滌。ppt課件16

(3)載玻片與蓋玻片用過的載玻片與蓋玻片16ppt課件17（三）培養(yǎng)皿的包扎培養(yǎng)皿：以舊報紙密密包緊，一般以6套做一包，待滅菌。吸管：在距其粗頭頂端約0.5cm處，塞一小段1.5cm長的棉花。棉花要塞得松緊恰當（過緊，吹吸液體太費勁；過松，吹氣時棉花會下滑），然后分別將每支吸管尖端斜放在舊報紙條的的近左端，與報紙約呈60o角，并將右端多余的報紙打一小結。ppt課件17（三）培養(yǎng)皿的包扎培養(yǎng)皿：以舊報紙密密包緊，一17ppt課件18試管的捆扎

ppt課件18試管的捆扎18ppt課件19（四）干熱滅菌法1、原理利用高溫使微生物細胞內的蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。所需溫度(160-170℃)，時間長(1-2h)。2、實驗步驟恒溫降溫開箱取物升溫裝入待滅菌物品ppt課件19（四）干熱滅菌法恒溫降溫開箱取物升溫裝入待滅菌19ppt課件20（五）紫外線滅菌法（示范）1、原理

紫外線殺菌機理主要是因為它誘導了胸腺嘧啶二聚體的形成和DNA鏈的交聯，從而抑制了DNA的復制。另一方面，由于輻射能使空氣中的氧電離成[O]，再使O2氧化生成臭氧或使水氧化生成H2O2。O3和H2O2均有殺菌作用。

適用于無菌室，接種箱，手術室內的空氣及物體表面的滅菌。ppt課件20（五）紫外線滅菌法（示范）20ppt課件211.清洗玻璃器皿，易碎，請注意規(guī)范操作，安全。2.干熱滅菌法：（1）物品擺得不要太擠，以防空氣流通，物品不要接觸內壁，以防烤焦起火。（2）電熱干燥箱觀察窗的玻璃溫度很高，避免直接接觸導致燙傷。（3）干熱滅菌溫度不能超過180℃，否則，包器皿的紙或棉塞就會燒焦，甚至引起燃燒。3.紫外線可以灼傷皮膚和眼睛,注意戴手套和防護鏡操作。三、實驗報告注意事項ppt課件211.清洗玻璃器皿，易碎，請注意規(guī)范操作，安全。21ppt課件22（一）實驗目的1、明確培養(yǎng)基的配制原則；2、掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟；3、了解高壓蒸汽滅菌的基本原理及應用范圍；4、掌握高壓蒸汽滅菌技術，了解幾種常用滅菌方法。實驗三培養(yǎng)基的制備及高壓蒸汽滅菌ppt課件22（一）實驗目的1、明確培養(yǎng)基的配制原則；實驗三22ppt課件23（二）實驗原理

培養(yǎng)基是按照微生物生長繁殖或積累代謝產物所需的各種營養(yǎng)物質，用人工方法配制而成的一種基質。它包括碳源、氮源、能源、生長因子、無機鹽和水六類營養(yǎng)要素。由于不同微生物細胞組成不同，因而所需營養(yǎng)基質不同，為了分離、培養(yǎng)和鑒定不同的微生物，必須根據其需要，配制合適的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的種類繁多，根據培養(yǎng)基的成分、物理性狀不同，可分為天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。ppt課件23（二）實驗原理培養(yǎng)基是按照微生物生長繁23ppt課件24常用加熱滅菌法：1、干熱滅菌：用火焰燒灼或電熱干燥箱內高溫熱空氣滅菌2、濕熱滅菌

⑴高壓蒸汽滅菌法

⑵間歇滅菌法

⑶煮沸消毒法

滅菌是指應用物理或化學的方法，殺滅物體表面和內部一切微生物營養(yǎng)體、芽孢和孢子。滅菌方法很多，可分為加熱、過濾、照射和化學藥品法等。ppt課件24常用加熱滅菌法：滅菌是指應用物理24ppt課件25培養(yǎng)基配方：四、實驗內容高氏1號培養(yǎng)基：固體培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基：由液體培養(yǎng)基加1.5-2％瓊脂ppt課件25培養(yǎng)基配方：四、實驗內容高氏1號培養(yǎng)基：固體培25ppt課件26（一）、培養(yǎng)基的配制：同學們先將試管貼好標簽。注明培養(yǎng)基名稱，組別，日期。標簽粘貼位置在離管口1/3管身處。注意：標簽用鉛筆書寫，以防高溫滅菌時蒸汽模糊字跡。

操作圖示：ppt課件26（一）、培養(yǎng)基的配制：26ppt課件271.稱量

按照培養(yǎng)基配方，準確稱量各成份放于燒杯中。對于不是粉狀（如肉膏），應用稱量紙或燒杯稱量。

培養(yǎng)基的制備過程

稱量---溶解----調節(jié)pH值----過濾----分裝及包扎----滅菌----滅菌后試管擺放斜面ppt課件271.稱量

按照培養(yǎng)基配方，準確稱量各成份放27ppt課件282.配調

向燒杯中加入適量的水，攪拌，使其溶解（可加熱助溶）。如是配制固體培養(yǎng)基，在瓊脂的熔化時，需不斷攪拌，并控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。待完全熔化后，補足所失水分。如果配方中含有淀粉，先將淀粉用少量冷水調成糊狀并在火上加熱攪拌，然后加足水分及其他藥品，待完全熔化后補足所失水分。ppt課件282.配調

向燒杯中加入適量的水，攪拌，28ppt課件293.調節(jié)pH值

培養(yǎng)基溶解均勻并冷卻至室溫時用pH試紙測pH，然后根據要求加酸或堿（一般用1molHcl和1molNaOH），要緩慢少量且多加攪拌。培養(yǎng)基配方為自然pH時，不用調節(jié)。

4.過濾

用濾紙或多層紗布過濾，一般無特殊要求可省去。

ppt課件293.調節(jié)pH值

培養(yǎng)基溶解均勻并冷卻29ppt課件305.分裝

將制好的培養(yǎng)基分裝入試管內或三角瓶內，管（瓶）口塞上棉塞。固體培養(yǎng)基要趁熱裝。分裝時要避免培養(yǎng)基粘染管（瓶）口，引起污染。分裝量可分為下面幾方面：

（1）斜面：裝量為管長的1/4-1/5。

（2）液體培養(yǎng)基、高層培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基：裝載量不超過管長的1/3。

（3）三角瓶：裝量不超過容積1/2。ppt課件305.分裝

將制好的培養(yǎng)基分裝入試管內或30ppt課件31（二）高壓蒸汽滅菌

1、原理利用加熱一個密閉的加壓滅菌鍋，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產生蒸氣。由于蒸氣不能溢出，而增加了滅菌鍋內的壓力，從而使沸點增高，得到高于100℃的溫度。導致菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。一般培養(yǎng)基用0.1Mpa，121.5℃,15～30min2、步驟加水裝待滅菌物品加蓋加熱滅菌時間到后斷電源壓力降為零開箱取物ppt課件31（二）高壓蒸汽滅菌加水裝待滅加蓋加熱滅菌時間31ppt課件326.滅菌

塞棉塞，包扎，滅菌。

高壓蒸汽滅菌法：是在密閉的加壓容器內進行，加熱使器內的水產生蒸汽，由于密閉，增加了器內的壓力，使水的沸點升高，從而獲得高于100℃的蒸汽溫度。在同一溫度下，濕熱殺菌效力比干熱大，因為在濕熱情況下，菌體吸收水分，使蛋白質易于凝固，同時濕熱穿透力強，而且當蒸汽與被滅菌物體接觸凝成水分時，又可放出熱量，使溫度迅速增高，從而增加滅菌效力。ppt課件326.滅菌

塞棉塞，包扎，滅菌。

32ppt課件33高壓蒸汽滅菌，1210C滅菌20分鐘。ppt課件33高壓蒸汽滅菌，1210C滅菌20分鐘。33ppt課件34試管的分裝ppt課件34試管的分裝34ppt課件35滅菌后試管擺放斜面ppt課件35滅菌后試管擺放斜面35ppt課件36擺斜面ppt課件36擺斜面36ppt課件37試管的捆扎ppt課件37試管的捆扎37ppt課件38棉塞制作（示范）ppt課件38棉塞制作（示范）38ppt課件39ppt課件3939ppt課件40注意事項1、稱取藥品時嚴防藥品混雜，一把牛角匙稱一種藥品；2、蛋白胨極易吸濕，稱取時動作要迅速；2、配制固體培養(yǎng)基時，先將其他藥品加熱溶解到快沸時，再將稱好的瓊脂加入，繼續(xù)加熱至瓊脂完全熔化，此過程要不斷攪拌，以免瓊脂糊底，并控制火力，防止沸騰外溢；4、分裝量根據試管大小和實際需要而定，固體培養(yǎng)基裝量約為管高的1/5，液體培養(yǎng)基的裝量約為管高的1/4，三角瓶的裝量不超過瓶體的1/2

；5、分裝過程中注意不要將培養(yǎng)基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。ppt課件40注意事項1、稱取藥品時嚴防藥品混雜，一把40ppt課件41四、實驗報告記錄本實驗配制培養(yǎng)基的名稱、數量，并圖解說明其配制過程，指明要點。五、作業(yè)題l．配制培養(yǎng)基有哪幾個步驟?在操作過程中應注意些什么問題?為什么?2．培養(yǎng)基配制完成后，為什么必須立即滅菌?若不能及時滅菌應如何處理?已滅菌的培養(yǎng)基如何進行無菌檢查?3.為什么濕熱滅菌比干熱滅菌法更有效？ppt課件41四、實驗報告41ppt課件42實驗四細菌的單染色及接種技術一、實驗目的學習并掌握普通光學顯微鏡的構造和油鏡的使用技術及維護的基本知識學習微生物涂片、單染色的基本技術初步認識細菌的形態(tài)特征，學習無菌操作技術，掌握各種微生物接種的基本操作技術。ppt課件42實驗四細菌的單染色及一、實驗目的學習并掌握42ppt課件43二、實驗原理細菌的單染色細菌細胞微小，透明，不易觀察，需染上顏色。利用單一染料對細菌進行染色，使經染色后的菌體與背景形成明顯的色差，從而能更清楚地觀察到其形態(tài)和結構。

染色前必須固定細菌，其目的是：一是殺死細菌并使菌體粘附于玻片上。二是增加其對染料的親和力。常用的有加熱和化學固定兩種方法。固定時盡量維持細胞原有的形態(tài)。

ppt課件43二、實驗原理細菌的單染色43ppt課件44三、實驗材料普通光學顯微鏡美蘭、結晶紫、復紅染色液。培養(yǎng)24h的大腸桿菌（E.coli)、枯草芽孢桿菌載玻片、接種環(huán)、酒精燈、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙等。ppt課件44三、實驗材料普通光學顯微鏡44ppt課件45四、實驗步驟（一）、制作細菌觀察片現場演示無菌操作涂片干燥固定染色水洗干燥鏡檢ppt課件45四、實驗步驟（一）、制作細菌觀察片現場演示無菌45ppt課件46單染色方法

ppt課件46單染色方法46ppt課件47將有菌的材料或純粹的菌種轉移到另一無菌的培養(yǎng)基上，這個過程就稱為接種。常用的幾種方法如下：斜面接種液體接種平板接種（二）、微生物接種技術ppt課件47將有菌的材料或純粹的菌種轉移到另一無菌的培養(yǎng)基47ppt課件481.斜面接種：從已長好微生物的菌種管移接到另一斜面管的方法。此法用于好氣性微生物的接種。左手持菌種管和斜面管，使斜面向上，并盡量放平。用右手先將棉塞擰轉松動，再拿接種環(huán)，用右手的小指、無名指和手掌撥下棉塞并夾緊，同時將管口在火焰上燃燒一圈，接種環(huán)灼燒滅菌后插入管內，冷卻、挑菌，立即轉入斜面管底部，沿斜面劃曲線或直線。ppt課件481.斜面接種：48ppt課件49斜面接種示意圖ppt課件49斜面接種示意圖49ppt課件50ppt課件5050ppt課件512.液體接種（示范）由斜面菌接種到液體培養(yǎng)基（如試管或三角瓶等）中的方法。操作與上法基本一致，只是在將接種環(huán)送入液體培養(yǎng)基中時使環(huán)在液體與管壁接觸的地方輕輕磨擦，使菌體分散，然后塞上棉塞，再輕輕搖動均勻，即可培養(yǎng)。如果菌種是培養(yǎng)在液體培養(yǎng)基中時，一般用移液管或滴管接種。ppt課件5151ppt課件523.穿刺接種（示范）用接種針挑取菌種后，插入深層固體培養(yǎng)基內，（不要刺到底部），再沿原路拔出，此法用于厭氣性細菌接種、檢查細菌的運動能力。4.平板接種：將菌種接至培養(yǎng)皿的方法，平板接種的目的是觀察菌落形態(tài)、分離純化菌種，活菌計數以及在平板上進行各種試驗時采用的一種接種方法，可分為下面幾種：

ppt課件523.穿刺接種（示范）52ppt課件53a.平板劃線法b.平板點種法：一般用于觀察霉菌和酵母細胞，輕輕點在平板的表面（根霉點一點，曲霉、酵母可點3-4點）即可。

交叉劃線法連續(xù)劃線法ppt課件53a.平板劃線法交叉劃線法53ppt課件541.倒平板

將菌液分離樣品搖勻，用無菌移液管取1ml的菌液移至無菌培養(yǎng)皿中，然后將融化，涼至50℃左右的培養(yǎng)基，在每個培養(yǎng)皿內各倒入約15ml，搖勻，凝固，制成平板。

ppt課件541.倒平板54ppt課件552.平板劃線分離法：

將菌液分離樣品搖勻，以無菌操作用接種環(huán)直接取試管中待分離純化的菌液，將接種環(huán)通過稍打開皿蓋的縫隙（約30℃）伸入平板，將菌液點種在平板邊緣一處，取出接種環(huán)，燒去多余的菌種，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環(huán)冷卻,然后從接種有菌的部位在平板上自左向右輕輕劃線，劃線時平板面與接種環(huán)面成30-40℃，以手腕力量在平板表面輕巧滑動劃線,接種環(huán)不要嵌入培養(yǎng)基內劃破培養(yǎng)基,線條要平行密集，充分利用平板表面積，注意勿使前后兩條線重疊，劃線完畢，關上皿蓋.灼燒接種環(huán)，待冷卻后放置接種架上。

ppt課件552.平板劃線分離法：55ppt課件56平板劃線菌落分離效果圖ppt課件56平板劃線菌落分離效果圖56ppt課件571.不準擅自拆卸顯微鏡的任何部件,以免損壞。2.鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度3.觀察標本時，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用油鏡。當目視接目鏡時，特別在使用油鏡時，切不可使用粗調節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。4.拿顯微鏡時，一定要右手拿鏡臂，左手托鏡座，不可單手拿，更不可傾斜拿。顯微鏡保養(yǎng)和使用中的注意事項ppt課件571.不準擅自拆卸顯微鏡的任何部件,以免損壞。顯57ppt課件58二、顯微操作現場演示1.低倍鏡觀察：粗調、細調。依次再進行中倍、高倍觀察2.油鏡觀察：高倍鏡下找到清晰的物象后，提升聚光鏡，在標本中央滴一滴香柏油，使油鏡鏡頭浸入香柏油中，細調至看清物象為止。3.換片：另換新片，必須從第一條開始操作。4.用后復原：觀察完畢，上懸鏡筒，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，然后再用擦鏡紙沾取少量二甲苯擦去殘留的油，最后用擦鏡紙擦去殘留的二甲苯，后將鏡體全部復原。

注意：油鏡使用完畢后一定要用二甲苯擦拭鏡頭ppt課件58二、顯微操作現場演示1.低倍鏡觀察：粗調、細調58ppt課件59五、問題與討論1.涂片為何要固定？固定加熱時間過長會怎樣？2.使用油鏡時，為什么必須用香柏油？3.鏡檢標本時，為什么先用低倍鏡觀察，而不是直接用高倍鏡或油鏡觀察？4.接種時，為何要盡量使試管平放？六、實驗報告ppt課件59五、問題與討論1.涂片為何要固定？固定加熱時間59ppt課件60本次實驗課結束

請確保油鏡頭擦拭干凈！

請第一組同學留下值日

下周再見！ppt課件60本次實驗課結束

請確保油鏡頭擦拭干凈！

請60ppt課件61（一）實驗目的1、學習并掌握觀察放線菌形態(tài)的基本方法；2、初步了解放線菌帶形態(tài)特征。實驗五放線菌的形態(tài)觀察ppt課件61（一）實驗目的1、學習并掌握觀察放線菌形態(tài)的基61ppt課件62二、實驗內容：

觀察放線菌菌落及菌絲、分生孢子形態(tài)。

三、材料：

1、菌種：鏈霉菌

2、0.1%美藍染液、載片和蓋片。ppt課件62二、實驗內容：62ppt課件63四、實驗步驟1、菌落形態(tài)及菌苔特征：

以無菌操作分別取鏈霉菌制成菌懸液在平板培養(yǎng)基上用劃線法接種，25-28℃培育5-7天，觀察菌落的表面形狀、大小、顏色和邊緣等；并注意放線菌在基質上著生緊密情況。區(qū)別基內菌絲，氣生菌絲及孢子絲的著生部位，取斜面培養(yǎng)鏈霉菌觀察菌苔特征，注意孢子顏色，營養(yǎng)菌絲顏色和色素分泌情況等。ppt課件63四、實驗步驟63ppt課件64A：卡特利鏈霉菌；B：弗氏鏈霉菌；C：吸水鏈霉菌金淚亞種；D：卡那霉素鏈霉菌；E：除蟲鏈霉菌；F：生磺酸鏈霉菌ppt課件64A：卡特利鏈霉菌；B：弗氏鏈霉菌；C：吸水鏈霉64ppt課件652、個體形態(tài)特征的觀察

取一個平板，選擇菌絲和孢子生長較薄的部位，直接置于低倍鏡和高倍鏡下觀察?；蛴媒臃N鏟連同菌苔一薄層培養(yǎng)基取下一小塊，平置于載玻片上進行觀察，注意放線菌菌絲直徑大小，孢子絲的形狀。

鏈霉菌形態(tài)觀察放線菌的孢子絲描繪圖ppt課件652、個體形態(tài)特征的觀察鏈霉菌形態(tài)觀察放線菌的孢65ppt課件66插片法將放線菌接種在瓊脂平板上，插上滅菌蓋玻片后培養(yǎng)，使放線菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻上，觀察時，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可以觀察到放線菌自然生長狀態(tài)下的特征，而且便于不同生長期的形態(tài)。ppt課件66插片法66ppt課件67印片法將要觀察帶放線菌帶菌落或菌苔，先印在載玻片上，經染色后觀察。這種方法主要用于觀察孢子絲帶形態(tài)、孢子帶排列及其形狀等。該方法簡便、但形態(tài)特征可能有所改變。ppt課件67印片法67ppt課件683、印片法步驟：取一蓋片，輕輕放在菌落表面按壓一下，使孢子貼附在蓋片上，然后在載片上加一小滴0.1%美藍染液（或加一滴水），將蓋片帶有孢子的面向下，蓋在染液上，用吸水紙吸去多余的染液，在高倍鏡或油鏡下觀察孢子形狀以及斷裂方式。印片→微熱固定→0.1%美藍染液染色1min→水洗→晾干→鏡檢ppt課件683、印片法步驟：印片→微熱固定→0.1%美藍68ppt課件691、鏟菌苔時注意不要將瓊脂鏟得太厚，以免影響壓片；2、玻片不要太熱，以免瓊脂融化，干擾放線菌的附著；3、制片過程中切不可涂片，以免破壞菌絲形態(tài)；4、印片完畢后注意將印有放線菌的一面朝上進行固定，印片不要用力過大壓壞瓊脂培養(yǎng)基，也不要挪動，以免改變放線菌的自然形態(tài)；5、觀察時宜采用略暗的光線。注意事項ppt課件691、鏟菌苔時注意不要將瓊脂鏟得太厚，以免影響壓69ppt課件70四、實驗報告繪圖觀察的放線菌形態(tài)。五、作業(yè)1．在高倍鏡或油鏡下如何區(qū)分放線菌的基內菌絲和氣生菌絲?2．用插片法和印片法如何制備放線菌標本，其主要優(yōu)點是什么?可否用此法觀察其他微生物?為什么?ppt課件70四、實驗報告70ppt課件71實驗六細菌的革蘭氏染色及芽孢染色1、學習微生物涂片、染色的操作技術；2、掌握細菌的革蘭氏染色的方法；3、初步掌握無菌操作技術；4、掌握革蘭氏染色反應原理、操作步驟和意義。一、實驗目的ppt課件71實驗六細菌的革蘭氏染色1、學習微生物涂片71ppt課件72

二、實驗原理革蘭氏染色法法可將所有的細菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌(G－)和革蘭氏陰性菌(G＋)兩大類，是細菌學上是常用的鑒別染色法。該染色法所以能將細菌分為G－菌和G＋菌，是由這兩類菌的細胞壁結構和成分的不同所決定的。G－菌的細胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質，而且肽聚糖層較薄、交聯度低，故用乙醇或丙酮脫色時溶解了類脂質，增加了細胞壁的通透性，使初染的結晶紫和碘的復合物易于滲出，結果細菌就被脫色，再經番紅復染后就成紅色。G＋菌細胞壁中肽聚糖層厚且交聯度高，類脂質含量少，經脫色劑處理后反而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細菌仍保留初染時的顏色。ppt課件72二、實驗原理革蘭氏染色法法可將所有的細菌區(qū)72ppt課件73

細菌的芽胞具有厚而致密的壁，透性低，不易著色，若用一般染色法只能使菌體著色而芽胞不著色(芽胞呈無色透明狀)。芽胞染色法就是根據芽胞既難以染色而一旦染上色后又難以脫色這一特點而設計的。所有的芽胞染色法都基于同一個原則：除了用著色力強的染料外，還需要加熱，以促進芽胞著色。當染芽胞時，菌體也會著色，然后水洗，芽胞染上的顏色難以滲出，而菌體會脫色。然后用對比度強的染料對菌體復染，使菌體和芽胞呈現出不同的顏色，因而能更明顯地襯托出芽胞，便于觀察。ppt課件73細菌的芽胞具有厚而致密的壁，透性低，不易73ppt課件741、革蘭氏染色：（1）

黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大腸桿菌（E.coli）、枯草桿菌，待測菌菌液l～2種；（2）

革蘭氏染色液(結晶紫染液、盧戈氏碘液、95％乙醇、石炭酸復紅液等)、（3）香柏油、二甲苯；顯微鏡、擦鏡紙、接種環(huán)、載玻片、吸水紙、試管、小滴管、酒精燈。三、實驗材料ppt課件741、革蘭氏染色：三、實驗材料74ppt課件75四、

操作步驟（一）革蘭氏染色法

1、制片（1）涂菌用無菌操作方法從試管中沾取菌液一環(huán)，用接種環(huán)在潔凈無脂的載玻片上做一薄而均勻、直徑約1cm的菌膜。涂菌后將接種環(huán)火焰滅菌。（2）干燥于空氣中自然干燥。亦可把玻片置于火焰上部略加溫加速干燥(溫度不宜過高)。（3）固定目的是殺死細菌并使細菌粘附在玻片上，便于染料著色，常用加熱法，即將細菌涂片面向上，通過火焰3次，以熱而不燙為宜，防止菌體燒焦、變形。此制片可用于染色。ppt課件75四、操作步驟75ppt課件762、染色（1）初染：于制片上滴加結晶紫染液，染1min后，用水洗去剩余染料。（2）滴加盧戈氏碘液，1min后水洗：（3）滴加95％乙醇脫色，搖動玻片至紫色不再為乙醇脫退為止(根據涂片之厚薄需時30s至1min)。（4）復染滴加石炭酸復紅液復染1min，水洗。（5）用濾紙吸干，油鏡鏡檢。

制片→初染（結晶紫1min）→水洗→媒染（碘液1min）→水洗→脫色（乙醇20-30s）→水洗→復染（番紅2min）→水洗→干燥→觀察ppt課件762、染色制片→初染（結晶紫1min）→水洗→媒76ppt課件773、結果革蘭氏陽性菌染成籃紫色，革蘭氏陰性菌染成淡紅色。

革蘭氏陰性桿菌革蘭氏陽性桿菌ppt課件773、結果革蘭氏陰性桿菌革蘭氏陽性桿菌77ppt課件78（二）、芽孢染色法(1)取37℃培養(yǎng)18～24h的枯草芽孢桿菌作涂片，并干燥，固定。(2)于載片上滴入3～5滴5％孔雀綠水溶液。(3)用試管夾夾住載玻片在火焰上用微火加熱，自載玻片上出現蒸汽時，開始計算時間約4～5min。加熱過程中切勿使染料蒸干，必要時可添加少許染料。(4)傾去染液，待玻片冷卻后，用自來水沖洗至孔雀綠不再褪色為止。(5)用0.5％沙黃水溶液(或0.05％堿性復紅)復染1min，水洗。(6)制片干燥后用油鏡觀察。芽孢呈綠色，菌體紅色。ppt課件78（二）、芽孢染色法78ppt課件79制片→染色（孔雀綠5min）→水洗→復染（蕃紅花紅2-3min）→水洗→干燥→鏡檢芽孢染色切勿煮干ppt課件79制片→染色（孔雀綠5min）→水洗→復染（蕃紅79ppt課件80芽孢染色結果（芽孢呈綠色，營養(yǎng)體及芽孢囊呈紅色）ppt課件80芽孢染色結果80ppt課件811．載玻片要潔凈無脂，否則菌液涂不開。涂片時，滴水不要過多，挑菌量宜少，菌膜宜薄，切忌過厚。2．在染色過程中，不可使染液干涸。3．在革蘭氏染色過程中脫色時間十分重要，過長，則脫色過度，會使陽性菌被染成陰性菌，另外，老齡菌因體內核酸減少，會使陽性菌被染成陰性菌，故不能選用。4．供芽孢染色用的菌種應控制菌齡，使大部分芽孢仍保留在菌體上為宜。注意事項ppt課件811．載玻片要潔凈無脂，否則菌液涂不開。涂片時，81ppt課件82五、實驗報告(一)繪圖1．繪出你所觀察到的細菌的形態(tài)。2．枯草芽孢桿菌菌體及芽孢形態(tài)，芽孢的著生位置。(二)記錄革蘭氏染色法法步驟，并進行結果分析。六、作業(yè)1．涂片在染色前為什么要先進行固定?固定時應注意什么問題?2．制備染色裝片時應注意哪些事項，為什么?制片為什么要完全干燥后才能用油鏡觀察？3．什么是革蘭氏染色法?染色過程應注意什么?ppt課件82五、實驗報告82ppt課件83一、實驗目的

了解目鏡測微尺和鏡臺測微尺的構造和使用原理，掌握微生物細胞大小的測定方法。二、實驗原理

微生物細胞的大小是微生物重要的形態(tài)特征之一，由于菌體很小，只能在顯微鏡下來測量。用于測量微生物細胞大小的工具有目鏡測微尺和鏡臺測微尺。

實驗七細菌大小的測定ppt課件83一、實驗目的實驗七細菌大小的測定83ppt課件84n1n2測微尺的校正（標定）：兩重合線間鏡臺測微尺格數Ⅹ10目鏡測微尺每格長度(μm)=

兩重合線間目鏡測微尺格數ppt課件84n1n2測微尺的校正（標定）：84ppt課件85三、實驗內容注意事項：觀察時光線不宜過強,否則難以找到鏡臺測微尺的刻度;換高倍鏡和油鏡校正時,務必十分小心,防止接物鏡壓壞鏡臺測微尺和損壞鏡頭。細菌大小的測定：利用制好的血球器浸片，用高倍鏡、油鏡測出寬和長各占目鏡測微尺的格數，再將測到的格數乘以目鏡測微尺（用高倍鏡時標定的）每格所代表的長度，即為細菌的實際大小。結果計算長μm＝平均格數×校正值寬μm＝平均格數×校正值大小表示：寬μm×長μmppt課件85三、實驗內容注意事項：觀察時光線不宜過強,否則85ppt課件86四、實驗器材活材料：枯草桿菌(Baccillussubtilis)染色標本片。器材：顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺測微尺、蓋玻片、載玻片、滴管、雙層瓶、擦鏡紙。五、實驗方法鏡測微尺的校正：在低倍鏡和高倍鏡、油鏡下分別進行校正。細菌大小的測定移去鏡臺測微尺，換上細菌單染色片，先在低倍鏡下找到目的物，然后在高倍鏡、油鏡下用目鏡測微尺來測量菌體的長，寬各占幾格（不足一格的部分估計到小數點后一位數）。測出的格數乘上目鏡測微尺每格的校正值，即等于該菌的長和寬。一般測量菌體的大小要在同一個標本片上測定10—20個菌體，求出平均值，才能代表該菌的大小。而且一般是用對數生長期的菌體進行測定。ppt課件86四、實驗器材86ppt課件87六、實驗結果及討論表1

目鏡測微尺校正結果123456789101112131415平均值長寬表2細菌大小測定記錄

（格）物鏡目尺格數臺尺格數目尺校正值（μm）10×40×100×ppt課件87六、實驗結果及討論表1

目鏡測微尺校正結果87ppt課件88實驗八酵母菌形態(tài)觀察、死活細胞鑒別和數量測定（一）實驗目的1、觀察酵母菌的細胞形態(tài)及出芽生殖方式；2、學習掌握區(qū)分酵母菌死、活細胞的染色方法；3、掌握酵母菌的一般形態(tài)特征及其與細菌的區(qū)別。4、了解顯微鏡計數的原理；5、學習并掌握使用血球計數板進行微生物直接計數的方法。ppt課件88實驗八酵母菌形態(tài)觀察、（一）實驗目的1、88ppt課件89（二）實驗原理

酵母菌是多形的、不運動的單細胞真核微生物。無性繁殖主要是出芽生殖。ppt課件89（二）實驗原理酵母菌是多形的、89ppt課件90

本實驗通過用美藍染色浸片來觀察生活的酵母形態(tài)和出芽生殖方式。ppt課件90本實驗通過用美藍染色浸片來觀察生活的酵90ppt課件91美藍（氧化型）藍色美藍（還原型）無色還原劑氧化劑

美藍是一種無毒性染料，它的氧化型是藍色的，而還原型是無色的，用它來對酵母的活細胞進行染色。ppt課件91美藍（氧化型）美藍（還原型）還原劑氧化劑91ppt課件92死活細胞鑒別原理美藍（氧化型）藍色美藍（還原型）無色酵母活細胞新陳代謝還原能力ppt課件92死活細胞鑒別原理美藍（氧化型）美藍（還原型）酵92ppt課件93（三）實驗器材1.菌種

釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae）菌懸液2、染色液和試劑：0.05％和0.1%呂氏堿性美藍染液3、器材：廢液缸、載玻片、蓋玻片、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡等。

顯微鏡、血球計數板、酒精燈、接種環(huán)、無菌水、吸管、蓋玻片、計數器。ppt課件93（三）實驗器材1.菌種93ppt課件94在載玻片中央加一滴0.1％呂氏堿性美藍染色液，用接種環(huán)挑取少量酵母菌苔放入上述液滴里，混合均勻；用鑷子取一塊蓋玻片，先將一邊與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下使其蓋在菌液上；(四）實驗方法（美藍浸片）染液不宜過多或過少蓋玻片不宜平著放下ppt課件94在載玻片中央加一滴0.1％呂氏堿性美藍染色液，94ppt課件95將制片放置約3min，先低倍鏡后高倍鏡觀察酵母形態(tài)和出芽情況，并根據顏色區(qū)別死活細胞。染色30min后再次觀察，注意死活細胞數量的變化；用0.05％的呂氏堿性美藍染色液重復上述操作。ppt課件95將制片放置約3min，先低倍鏡后高倍鏡觀察酵母95ppt課件961、加染液不宜過多或過少，否則，在蓋上蓋玻片時，菌液會溢出或出現大量氣泡而影響觀察；2、蓋玻片不宜平著放下，以免產生氣泡影響觀察。注意事項ppt課件961、加染液不宜過多或過少，否則，在蓋上蓋玻片時96ppt課件97（二）血球計數板直接計數

利用血球計數板在顯微鏡下直接計數，是微生物實驗中一種十分重要的常用微生物計數方法。此法的優(yōu)點是直觀、快速，不論微生物的生理狀況如何，都可以在顯微鏡下一一計數。由于此法得到的是活菌和死菌的總和，故又稱為總菌計數法。

ppt課件97（二）血球計數板直接計數利用血97ppt課件98血球計數板是一塊特制的載玻片，其上四條縱槽構成了三個平臺，中間的平臺又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺上各刻有一個方格網，每個方格網共分成9個大方格，中央的大方格為計數室。計數室邊長1mm，共有400個小方格，加蓋玻片于突起部分上時，即形成一個體積為0.1mm3的計數室。計數室的規(guī)格有兩種：一種是25個中方格×16個小格，另一種是16個中方格×25個小格，所以小方格的總數是相同的，都為400個。ppt課件98血球計數板是一塊特制的載玻片，其上四條縱槽構成98ppt課件9916小格×25大格計數室

25小格×16大格計數室

計數室的兩種刻度形式ppt課件9916小格×25大格計數室25小格×199ppt課件100

Thoma血球計數板

A.正面圖B.縱切面圖

1.血球計數板2.蓋玻片3.計數室ppt課件100Thoma血球計數板100ppt課件101ppt課件101101ppt課件102在計數時，通常數五個中方格的總菌數，然后求得每個中方格的平均值，再乘上16或25，就得出一個大方格中的總菌數，然后再換算成1ml菌液中的總菌數。如果設五個中方格的總菌數為A，菌液稀釋倍數為B，那么，一個大方格中的總菌數即（0.1mm3中的總菌數）為A／5×16(或25)×B。所以1ml菌液中的總菌數=A／5×16（或25）×10×1000×B。ppt課件102在計數時，通常數五個中方格的總菌數，然后求得102ppt課件103（四）實驗方法1.稀釋

將酵母菌懸液進行適當稀釋，菌液如不濃，可不必稀釋。2.鏡檢計數室

在加樣前，先對計數板的計數室進行鏡檢。若有污物，則需清洗后才能進行計數。3．加樣品

將清潔干燥的血球計數板蓋上蓋玻片，再用無菌的細口滴管將稀釋的酵母菌液由蓋玻片邊緣滴一小滴（不宜過多）讓菌液沿縫隙靠毛細滲透作用自行進入計數室，一般計數室均能充滿菌液。注意不可有氣泡產生。ppt課件103（四）實驗方法1.稀釋103ppt課件1044.顯微鏡計數

靜置幾分鐘，將計數板放在顯微鏡下，先用低倍鏡找到計數室，再換成高倍鏡進行計數；每個計數室選右上右下、左上左下和中間的五個中方格中的菌體進行計數，每個樣品重復計數兩次5.清洗血球計數板

計數完畢，將計數板在水龍頭下沖洗干凈后自行晾干或用吹風機吹干，鏡檢觀察每小格內無殘留物為止。ppt課件1044.顯微鏡計數104ppt課件1051、加樣時先搖勻菌液，計數室中不可有氣泡產生；2、計數時，格線上的菌體只數上方和右邊線上的；3、如遇酵母出芽，芽體大小達到母細胞的一半時，作為兩個菌體計算；4、清洗計數板時切勿用手或硬物刷洗。注意事項ppt課件105注意事項105ppt課件106（六）實驗作業(yè)

繪圖說明你所觀察到的酵母菌的細胞結構及出芽生殖方式。1、呂氏堿性美藍染液濃度和作用時間的不同，對酵母菌死細胞數量有何影響？試分析其原因。

2、在顯微鏡下，酵母菌有哪些突出的特征區(qū)別于一般細菌？ppt課件106（六）實驗作業(yè)繪圖說明你所觀察106ppt課件107（一）實驗目的（二）實驗原理（三）實驗器材（四）實驗方法（五）實驗作業(yè)實驗九環(huán)境條件對微生物生長的影響ppt課件107（一）實驗目的實驗九環(huán)境條件對微生物107ppt課件108（一）實驗目的1、了解溫度、化學藥品對微生物生長的影響；2、區(qū)別微生物的最適生長溫度、pH與最適代謝溫度、pH

。ppt課件108（一）實驗目的1、了解溫度、化學藥品對微生物108ppt課件109（二）實驗原理

微生物生長繁殖要有一定的溫度條件，不同的微生物要求不同的生長溫度范圍。如溫度超過最高或最低溫度時，微生物均不能生長，或處于休眠狀態(tài)，甚至死亡。微生物的生長繁殖，需要一定的pH值范圍