實驗三培養(yǎng)基的制備與滅菌

關(guān)于實驗三培養(yǎng)基的制備與滅菌一、實驗目的

明確培養(yǎng)基的配制原理通過對基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配制，掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟第2頁,共13頁，2024年2月25日，星期天

培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物

生長繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的

營養(yǎng)物質(zhì)的混合物

培養(yǎng)基的原材料：碳源、氮源、無機鹽、

生長因素、水二、基本原理第3頁,共13頁，2024年2月25日，星期天根據(jù)微生物的種類和實驗目的不同，培養(yǎng)基有不同的種類按成分：天然培養(yǎng)基，合成培養(yǎng)基，半合成培養(yǎng)基按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基，半固體培養(yǎng)基，

液體培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基第4頁,共13頁，2024年2月25日，星期天三、實驗器材與試劑溶液和試劑：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂1mol/LNaOH、1mol/LHCl儀器或其它用具：三腳架、培養(yǎng)基分裝器、

天平、牛角匙、

高壓蒸汽滅菌鍋等第5頁,共13頁，2024年2月25日，星期天

稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞

→包扎→滅菌→擱置斜面四、操作步驟第6頁,共13頁，2024年2月25日，星期天

1）稱量：按實際用量計算后，按配方稱取各種藥品放入大燒

杯中。牛肉膏可放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱

水溶解后倒入大燒杯；也可放在稱量紙上稱量，隨

后放人熱水中，牛肉膏便會與稱量紙分離，立即取

出紙片。蛋白胨極易吸潮，故稱量時要迅速。

2）加熱溶化：在燒杯中加入少于所需要的水量，并用玻棒

攪拌，待藥品完全溶解后再補充水分至所需

量。若配制固體培養(yǎng)基，則加入瓊脂再加熱

融化，此過程中需不斷攪拌，以防瓊脂糊底

或溢出，最后補足所失的水分。第7頁,共13頁，2024年2月25日，星期天3）調(diào)pH：檢測培養(yǎng)基的pH，若偏酸，可逐滴滴加1mol?L-1NaOH邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙檢測，直至達到所需pH

范圍。若偏堿，則用1mol?L-1HCl進行調(diào)節(jié)。pH的調(diào)節(jié)通常放在加瓊脂之前。應注意pH值不要調(diào)過

頭，以免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。4）過濾

趁熱過濾，固體培養(yǎng)基可用4層紗布趁熱過濾，以利結(jié)

果的觀察。但是供一般使用的培養(yǎng)基，該步可省略。第8頁,共13頁，2024年2月25日，星期天固體分裝5）分裝：披實驗要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或三角

瓶內(nèi)。分裝時可用漏斗以免使培養(yǎng)基沾在管口或瓶

口上面造成污染

分裝量：固體培養(yǎng)基約為試管高度的1／5，滅菌后制成斜

面。分裝入三角瓶內(nèi)以不超過其容積的一半為宜。

半固體培養(yǎng)基以試管高度的1/3為宜。滅菌后垂直

待凝

半固體

液體分裝試管三角燒瓶試管三角燒瓶1/3<1/4

<1/2<1/5<1/2第9頁,共13頁，2024年2月25日，星期天6）加塞：試管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脫脂棉)制

作的棉塞。以阻止外界微生物進入培養(yǎng)，并保

持良好通氣性7）包扎：加塞后，將三角瓶的棉塞外包一層牛皮紙，以防

滅菌時冷凝水沾濕棉塞8）滅菌：將上述培養(yǎng)基以0.103MPa，121℃，20min高壓蒸氣滅菌9）擱置斜面：將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50℃左右（以防

斜面上冷凝水太多），將試管口端擱在玻

棒或其他合適高度的器具上，擱置的斜面

長度以不超過試管總長的一半為宜。第10頁,共13頁，2024年2月25日，星期天

培養(yǎng)基分裝斜面制作包扎成捆掛標簽第11頁,共13頁，2024年2月25日，星期天附：高壓蒸汽滅菌法1．加水將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，以水面與三角架相平為至。2．裝料將裝料桶放回鍋內(nèi)，裝入待滅菌的物品。裝有培養(yǎng)基的容器放置時要防止液體溢出，瓶塞不要緊

貼桶壁，以防冷凝水沾濕棉塞。3．加蓋將蓋上的排氣軟管插人內(nèi)層的排氣槽內(nèi)，再以兩

兩對稱的方式同時旋轉(zhuǎn)相對的兩個螺栓，使螺栓

松緊一致，勿使漏氣。4．排氣加熱，待水煮沸后，水蒸汽和空氣一起從排氣孔排出。一般認為，當水沸后約5min，表明鍋內(nèi)空