HYT 228-2018 藻類脂肪酸的測定 氣相色譜法

藻類脂肪酸的測定氣相色譜法2018-02-13發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由國家海洋局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國海洋標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC283)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：國家海洋局第一海洋研究所、中國科學(xué)院海洋研究所、中國海洋大學(xué)。1藻類脂肪酸的測定氣相色譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了藻類中脂肪酸的氣相色譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于藻類中脂肪酸的測定。其他藻類中脂肪酸的測定可參考使用。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3方法原理藻類樣品中的脂肪酸，經(jīng)氫氧化鈉甲醇溶液皂化和鹽酸甲醇溶液甲酯化，經(jīng)正己烷提取后，用氣相色譜法測定。4試劑和材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。4.1.1氫氧化鉀(KOH)。4.1.6無水硫酸鈉(Na?SO?):400℃灼燒4h,冷卻后密閉保存，有效期1個(gè)月。4.2試劑配制4.2.1飽和氫氧化鉀甲醇溶液：稱取40g氫氧化鉀溶解在100mL甲醇中，攪拌溶解，澄清備用，室溫下可放置2個(gè)月。4.2.2鹽酸甲醇溶液(1mol/L):量取10mL鹽酸溶解在110mL甲醇中，混勻，室溫下可放置2個(gè)月。4.2.3飽和氯化鈉溶液：稱取360g氯化鈉溶解在1L蒸餾水中，攪拌溶解，澄清備用，室溫下可放置2個(gè)月.4.3標(biāo)準(zhǔn)品4.3.1十一碳酸甘油三酯，純度大于99%。4.3.2十一碳酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品，純度大于99%。24.3.3混合脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品。4.3.4單個(gè)脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品(可根據(jù)需求購買),純度大于99%。4.4.1十一碳酸甘油三酯內(nèi)標(biāo)溶液(0.15mg/mL):準(zhǔn)確稱取15mg十一碳酸甘油三酯(4.3.1)至100mL容量瓶中，用甲醇定容，冰箱4℃避光冷藏保存，有效期1個(gè)月。4.4.2單個(gè)脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(1mg/mL):準(zhǔn)確稱取100mg脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(4.3.4)于100mL容量瓶中，用正己烷定容，貯存于一20℃冰箱4.4.3混合脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/mL):取出適量脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(4.3.3)移至10mL容量瓶中，用正已烷定容，配制成脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度為10μg/mL溶液。貯存于一20℃冰箱，有效期3個(gè)月。5儀器和設(shè)備5.1氣相色譜儀：具有氫火焰離子化檢測器。5.2電熱恒溫水浴鍋：控溫范圍25℃~100℃,控溫精度±1℃。5.5具塞離心管。6分析步驟6.1藻粉的制備藻類經(jīng)冷凍干燥24h。干燥后大型藻經(jīng)過粉碎機(jī)(4.4)粉碎過80目篩，微藻直接進(jìn)行6.2。用天平稱取藻粉約20mg,放入研缽(5.7)中，準(zhǔn)確加入0.2mL十一碳酸甘油三酯內(nèi)標(biāo)溶液(4.4.1),加入液氮反復(fù)研磨2次～3次，每次5min,用6.0mL飽和氫氧化鉀甲醇溶液(4.2.1)分2次~3次將研磨后的藻粉轉(zhuǎn)移至具塞離心管(5.5)中，混勻。將離心管放入60℃水浴鍋內(nèi)加熱處理60min,每隔10min取出振蕩5s～10s,處理結(jié)束后取出離心管冷卻至室溫。皂化后的試樣加入4mL1mol/L鹽酸甲醇溶液(4.2.2),混勻，將離心管放入60℃水浴鍋內(nèi)加熱處理20min,每隔10min取出振蕩5s～10s,處理結(jié)束后取出離心管冷卻至室溫。甲基化后的試樣準(zhǔn)確加入1mL正己烷，加入3mL飽和氯化鈉溶液(4.2.3),將管蓋擰緊，渦旋振蕩2min,靜置3min～5min待溶液分層后，取大約0.5mL上層正己烷，用無水硫酸鈉脫水后進(jìn)行氣相色譜分析。3 ——升溫程序：初溫50℃,保持5min,25℃/min升到180℃,1℃/min升到190℃,保持10min,1℃/min升到205℃,保持10min,20℃/min升到240℃,保持5min。A;——藻類中脂肪酸甲酯i組分的峰面積；1.0067——十一碳酸甘油三酯轉(zhuǎn)化成十一碳酸甲酯的轉(zhuǎn)換系數(shù)。 (2)4式中：A,'——標(biāo)準(zhǔn)品中脂肪酸i組分的峰面積。)重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果絕對(duì)差值不大于兩次測定結(jié)果算數(shù)平均值的10%,以大于這兩個(gè)測定值的算數(shù)平均值的10%的情況下不超過5%為前提。再現(xiàn)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果絕對(duì)差值不大于兩次測定結(jié)果算數(shù)平均值的15%,以大于這兩個(gè)測定值的算數(shù)平均值的15%的情況下不超過5%為前提。(資料性附錄)脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液典型參考圖譜參見圖A.1。圖A.1脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液典型參考圖譜6(規(guī)范性附錄)脂肪酸甲酯的檢出限和定量限脂肪酸甲酯的檢出限和定量限見表B.1。表B.1脂肪酸甲酯的檢出限和定量限檢出限/(pg/mL)定量限/(μg/mL)1己酸甲酯2辛酸甲酯3456789二十