實(shí)驗(yàn)四-氨基酸的紙層析法

中國海洋大學(xué)試驗(yàn)報(bào)告2013年11月13日姓名：郭沈杰年級(jí)專業(yè)：2012級(jí)生物科學(xué)同組者：蔡萍萍學(xué)號(hào)：12050011012實(shí)驗(yàn)四氨基酸的紙層析法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私獠⒄莆瞻被峒垖游龇ǖ脑砗头椒?。二、?shí)驗(yàn)原理以濾紙為支持物的層析法，稱為紙層析法。紙層析所用展層劑大多由水和有機(jī)溶劑組成。展層時(shí)，水為固定相，它與濾紙纖維親和力強(qiáng)；有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，它與濾紙纖維親和力弱。有機(jī)溶劑在濾紙上又下向上移動(dòng)的，稱為上行法；有上向下移動(dòng)的，稱為下行法。將樣品在濾紙上確定的原點(diǎn)處展層，由于樣品中各種氨基酸在兩相中不斷進(jìn)行分配，且他們的分離系數(shù)各不相同，所以不同的氨基酸隨流動(dòng)相移動(dòng)的速率也不相同，于是各種氨基酸在濾紙上就相互分離出來，形成距原點(diǎn)不等的層析點(diǎn)。 在一定條件下（室溫、展層劑的組成、濾紙的質(zhì)量、PH值等不變），不同的氨基酸有固定的移動(dòng)速率（Rf值）Rf=原點(diǎn)到層析點(diǎn)中心的距離/原點(diǎn)到溶劑前沿的距離 混合氨基酸做樣品時(shí)，如果只用一種溶劑展層，由于某些氨基酸的移動(dòng)速率相同或相近，就不能將它們分開，為此，當(dāng)用一種溶劑展層后，可將濾紙旋轉(zhuǎn)90度，以第一次所的層析點(diǎn)為原點(diǎn)，在用另一溶劑展層，從而達(dá)到分離的目的。這種方法稱為雙向?qū)游龇ā?氨基酸無色，利用茚三酮反應(yīng)，可將氨基酸層析點(diǎn)顯色作定性、定量用。本實(shí)驗(yàn)主要介紹的是單向?qū)游龇?。其中混合氨基酸有精氨酸、苯丙氨酸。三、?shí)驗(yàn)儀器1、

新華濾紙2、

層析缸3、

細(xì)線4、

點(diǎn)樣管5、

橡皮筋6、

電吹風(fēng)7、

噴霧器8、鉛筆9、直尺四、實(shí)驗(yàn)試劑1、精氨酸、苯丙氨酸、混合氨基酸（精氨酸、苯丙氨酸）2、展層劑：正丁醇：12%氨水：95%乙醇：蒸餾水=13：3：3：1（v:v）3、0.5%茚三酮—無水丙酮溶液：0.5g茚三酮溶于100ml無水丙酮，貯于棕色瓶中五、實(shí)驗(yàn)步驟1、取濾紙剪成20×10厘米的濾紙條一張，在一端打孔，系一根細(xì)線，在另一端2~3cm處用鉛筆畫一橫線，在上面相同間隔畫3圓點(diǎn)（原圈直徑約5mm）。2、取毛細(xì)管3支，分別吸取精氨酸、苯丙氨酸、氨