YYT 0878.1-2013 醫(yī)療器械補體激活試驗 第1部分血清全補體激活

I本部分為YY/T0878的第1部分。Ⅱ作為血液的重要組分，補體系統(tǒng)激活后產(chǎn)生的效應(yīng)分子將直接影響醫(yī)療補體不適當(dāng)?shù)募せ羁赡軙?dǎo)致機體的嚴重急/慢性反應(yīng)。YY/T0878的本部分所描述的體外全補體激12規(guī)范性引用文件下列縮略語適用于本文件。Ab:抗體(溶血素)5綿羊RBC的制備5.1將市售的綿羊紅細胞(SRBC)保存在Alsever溶液中，4℃貯存。貯存超過8周或者目測檢查第二5.2將5mLSRBC在1000g下離心10min。2次(共計3次清洗)。5.5通過分光光度計或血液分析儀的測定，用冷的BBS-GM工作液調(diào)配得到10mL濃度為驗)。推薦抗體稀釋度在1:400與1:25600之間。向無RBC對照試管中再加入0.1mLBBS-GM。3YY/T0878.1—20137.5向兩組加入抗體試管的一組中加入1.0mL冷BBS-GM(無補體對照)。除全部裂解對照組試管外，向其余所有試管中加入0.5mL冷BBS-GM,然后再加入0.5mL稀釋至1:100或1:200的吸附過7.71h后，將試管架置于冰上。然后將冷的試管在4℃條件下1000g離心10min,將上清液輕輕移7.8在412nm波長處測量上清液的吸光度。每支試驗管和對照管的裂解百分率的計算是用其在412nm處的吸光度減去無RBC對照的吸光度(指3支相同試管的平均值),然后除以完全裂解對照值(指3支相同試管的平均值),再乘以100%,見式(1)。7.9每種條件的最終裂解百分率表示為每組3支相同試管的3個裂解百分率的z±SD。7.10繪制特異性裂解百分率與對應(yīng)的溶血素濃度倒數(shù)的滴定曲線。在滴定曲線的平穩(wěn)段取剛進入8全補體滴定測定最佳血清稀釋度8.1若需要對結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析，則在每種條件下，宜用3支13×100mm的一次性玻璃試管對全補體(無C)、帶有和不帶有溶血素的試驗組(稀釋人血清-HS)以及無RBC(使用最高濃度血清的補體8.2除無RBC的試管以外，將清洗過的RBC加入所有試管中(0.1mL/管的1.5×10?細胞/mL懸浮液)。無RBC試管中加入0.1mL冷緩沖液。8.3向完全裂解試管中加入1.1mL蒸餾0.5mL的稀釋血清(見8.5)進行還原。向無C’試管中加入1.0mLBBS-GM。8.5冷血清用冷BBS-GM稀釋至所需濃度(具有最小激活作用)。建議在1:50～1:300之間先進行HS測試。向除了完全裂解試管和無C試管以外的所有試管中加入0.5mL稀釋血清，宜用BBS-GM8.6試管按7.6～7.9中所述進行處理。8.7特定量人血清的最佳稀釋度確定為非特異性裂解(HS+RBC,無溶血素抗體)≤10%,而特異性裂解在20%～80%之間[全部裂解(RBC+Ab+HS)減去非特異性裂解],即：特異性裂解在補體滴定曲線的直線段。試驗中大量吸附的人血清的典型最佳稀釋度為1:200,體積為0.5mL。49.1.1將冷的、已吸附的人補體放入冰上放置的φ13mm×100mm一次性玻璃試管的底部，I?(冰2,最大補體活性對照)。9.1.2將M和NM試管的上半部分用手加熱，避免粉末因濕潤附著在試管壁上將確定數(shù)量的粉末放入37℃的水浴中，孵育1h。I?和I?仍放在冰上。9.1.6然后將每支試管中的內(nèi)容物在冷試管中稀釋至最佳人血清稀釋度(見87),并放置在冰上。宜在1h內(nèi)測定血清的補體活性(見第10章)。9.2纖維或片狀固體9.2.1固體纖維或片狀材料對全補體激活作用的測定方法與9.1中粉末采用的方法基本相同，不同的是：確定數(shù)量的纖維或材料(mg量，剛好水浴中，I?和I?放置在冰上。將M和NM試管放置1h后，立即從39.3.2由于對每一條件來說，宜測定其特異性溶血%,因此需測定全溶血%(Ab+RBC+HS)和非特異性溶血%(RBC+HS),且每種條件測定3次，同時建議每個技術(shù)人員一次試驗中測定試驗樣品的總數(shù)不超過10個(從而不超過約100只試管的最終測定規(guī)模)。10步驟B——補體缺失的血清測定5致敏RBC的試管中。6加入約400mL水中制備。用1mol/LHCl調(diào)整pH至7.35,然后在容量瓶中加至最終體積為調(diào)整pH(使用1mol/LHCl或1mol/LNaOH)至7.35,然后在容量燒瓶中加水至最終體積為水中，調(diào)整pH(使用1mol/LNaOH或1mol/LHCl)至7.65,然后在容量燒瓶中加水至體積為[1]Giclas,P.C.,“ComplementTests,”ManualofClinicalLaboratoryImmunoloedsN.R.Rose,E.C.deMacario,J.D.Folds,H.C.Lane,andR.M.Nakamura,ASMPrespp.181-186[2]Gee,A.P.,“MolecularTitrationofComponentsoftheClassicalComplementPatodsinEnzymology,Vol93,Immunochemical[4]Lin,W-Q.,White,Jr.,K.L.,“Complement