轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物及克隆動(dòng)物TransgenicAnimalandClonalAnimal

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第1頁(yè)內(nèi)容

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物克隆動(dòng)物概述、方法、應(yīng)用體細(xì)胞克隆轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第2頁(yè)第一部分轉(zhuǎn)基因動(dòng)物轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第3頁(yè)1974年Jaenisch等用病毒SV40轉(zhuǎn)化小鼠早期胚胎移植到小鼠子宮內(nèi)，在小鼠后代中檢測(cè)到SV40基因存在，進(jìn)行轉(zhuǎn)基因技術(shù)嘗試，這是最早相關(guān)動(dòng)物轉(zhuǎn)基因報(bào)道。1980年，Gordon等首次采取受精卵原核顯微注射法，首次將皰疹病毒和SV40DNA片段導(dǎo)入小鼠基因組，成功制作轉(zhuǎn)基因小鼠，開創(chuàng)了轉(zhuǎn)基因動(dòng)物新紀(jì)元。一、研究概況轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第4頁(yè)1982年P(guān)almiter-“超級(jí)巨鼠”

華盛頓大學(xué)Palmiter將大鼠生長(zhǎng)激素基因注射到小鼠受精卵內(nèi),

培育出體型顯著大于正常小鼠超級(jí)鼠,

結(jié)果轟動(dòng)一時(shí)。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第5頁(yè)轉(zhuǎn)基因小鼠A生長(zhǎng)速度要比普通小鼠B生長(zhǎng)速度平均快50%。

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第6頁(yè)

1982年P(guān)almiter“超級(jí)巨鼠”重組質(zhì)粒鼠金屬巰基蛋白開啟子之后

大鼠生長(zhǎng)激素基因置于小

Plonucleus（雄原核）顯微注射小鼠子宮卵移植SOUTHERN雜交檢測(cè)超級(jí)巨鼠轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第7頁(yè)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第8頁(yè)1987年

世界上第一只商業(yè)化轉(zhuǎn)基因

綿羊誕生(Roslin研究所)1989年

精子載體法應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物1997年

轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物(Roslin研究所)轉(zhuǎn)基因克隆羊Polly:攜帶有些人凝血因子Ⅸ

1999年

上海遺傳研究所宣告轉(zhuǎn)基因試

管牛“滔滔”誕生

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第9頁(yè)三十幾年里，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)飛速發(fā)展，轉(zhuǎn)基因兔、轉(zhuǎn)基因豬、轉(zhuǎn)基因牛、轉(zhuǎn)基因雞、轉(zhuǎn)基因魚等陸續(xù)育成。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)已廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、畜牧學(xué)等研究領(lǐng)域轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第10頁(yè)轉(zhuǎn)基因鼠轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第11頁(yè)5只克隆出轉(zhuǎn)基因小豬Noel、Angel、Star、Joy和Mary。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第12頁(yè)全球首只轉(zhuǎn)基因猴“Andy”轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第13頁(yè)轉(zhuǎn)基因魚轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第14頁(yè)轉(zhuǎn)基因試管?！疤咸稀鞭D(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第15頁(yè)英國(guó)1990－科研中使用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物百分比圖轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第16頁(yè)

三十年來，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物經(jīng)歷了

興起——高潮——現(xiàn)在相對(duì)平穩(wěn)過程。其主要意義在于人為實(shí)現(xiàn)動(dòng)物物種之間，甚至動(dòng)物與植物、微生物之間遺傳物質(zhì)交換與重組。如：改變動(dòng)物性狀

導(dǎo)入抗病基因轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第17頁(yè)二、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物概念轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（Transgenicanimal）嵌合體動(dòng)物（Chimericanimal）指染色體基因組中整合有外源基

并能穩(wěn)定遺傳給后代一類動(dòng)物部分組織細(xì)胞中整合有外源基因組動(dòng)物轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第18頁(yè)三、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物培育原理

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第19頁(yè)四、方法顯微注射法逆轉(zhuǎn)錄病毒法ES（胚胎干細(xì)胞）法轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第20頁(yè)

精子載體法脂質(zhì)體載體法電脈沖法基因槍法體細(xì)胞核移植技術(shù)（轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第21頁(yè)（一）顯微注射法

（以培育轉(zhuǎn)基因小鼠為例）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第22頁(yè)1.方法轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第23頁(yè)顯微注射制作轉(zhuǎn)基因動(dòng)物流程圖轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第24頁(yè)2.詳細(xì)步驟

（1）前期準(zhǔn)備試驗(yàn)動(dòng)物：供體鼠、受體鼠、結(jié)扎雄鼠儀器設(shè)備：拉針儀、煅針儀、體視鏡、顯微注射儀試驗(yàn)試劑耗材：超排激素：PMSG、HCG、透明質(zhì)酸酶（HE）、小鼠胚胎操作和培養(yǎng)液：M2、M16、注射用礦物油、注射針、持卵針

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第25頁(yè)顯微注射儀轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第26頁(yè)拉針儀煅針儀體視鏡轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第27頁(yè)（2）受精卵采集

供體鼠超排：PMSG,ipHCG,ip

48hr輸卵管膨大部受精卵采集受精卵消化、洗滌、培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第28頁(yè)受精卵采集轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第29頁(yè)受精卵消化、培養(yǎng)消化、洗滌后受精卵原核清楚受精卵轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第30頁(yè)注射前注射后（3）受精卵顯微注射注射中轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第31頁(yè)（4）受精卵移植受體假孕鼠制備：母鼠與結(jié)扎公鼠合籠（與供體鼠同時(shí)）假孕鼠挑選注射后搜集卵移植轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第32頁(yè)受精卵移植轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第33頁(yè)（5）得到founder轉(zhuǎn)基因小鼠

（6）對(duì)founder轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行判定、篩選、雜交取得純合轉(zhuǎn)基因小鼠轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第34頁(yè)（二）逆轉(zhuǎn)錄病毒法轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第35頁(yè)關(guān)于逆轉(zhuǎn)錄病毒1、Retrovirus是只有一條單鏈RNA病毒類總稱。2、逆轉(zhuǎn)錄病毒在逆轉(zhuǎn)錄酶（RT）作用下能夠?qū)⒈旧韱捂淩NA作為模板進(jìn)行復(fù)制和遺傳信息傳遞。3、逆轉(zhuǎn)錄病毒經(jīng)過病毒中膜糖蛋白和宿主細(xì)胞表面受體相互作用而進(jìn)入宿主細(xì)胞。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第36頁(yè)原理1、逆轉(zhuǎn)錄病毒含有高效感染和在宿主細(xì)胞DNA上高度整合特征。2、逆轉(zhuǎn)錄病毒能作為目標(biāo)基因載體，經(jīng)過感染早期胚胎細(xì)胞實(shí)現(xiàn)基因轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生嵌合體動(dòng)物，再經(jīng)過雜交、篩選即可取得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第37頁(yè)關(guān)鍵步驟（1）逆轉(zhuǎn)錄病毒載體構(gòu)建

①提取病毒DNA②將DNA克隆載體中③酶切病毒結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)④將外源目標(biāo)基因克隆到載體⑤轉(zhuǎn)染細(xì)胞，測(cè)定外源基因表示。

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第38頁(yè)（2）包裝細(xì)胞

決定著重組病毒效價(jià)及其宿主范圍。慣用φ-2細(xì)胞株（3）重組逆轉(zhuǎn)錄病毒感染早期胚胎載體轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞后與8細(xì)胞胚胎共培養(yǎng)進(jìn)行轉(zhuǎn)染（4）胚胎移植（5）建系轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第39頁(yè)（三）胚胎干細(xì)胞介導(dǎo)法（ES細(xì)胞法）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第40頁(yè)關(guān)于ES細(xì)胞1、胚胎干細(xì)胞（embryonicstemcell，ES）人或動(dòng)物胚胎中均存在一些含有高度更新能力和多向分化能力但還未分化干細(xì)胞，稱胚胎干細(xì)胞。2、它與早期胚胎聚集，或被注射到胚胎后，能參加宿主胚胎發(fā)育，形成包含生殖細(xì)胞在內(nèi)全部組織。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第41頁(yè)原理

將外源目標(biāo)基因?qū)隕S細(xì)胞，再移入胚泡期宿主胚胎，最終將宿主胚胎移植到假孕母鼠子宮內(nèi)，便可取得由胚胎干細(xì)胞介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第42頁(yè)關(guān)鍵步驟①ES細(xì)胞分離培養(yǎng)②ES細(xì)胞基因操作

電穿孔、顯微注射、磷酸鈣-DNA共沉淀、逆轉(zhuǎn)錄病毒感染等方法

③獲取囊胚期胚胎④顯微操作ES細(xì)胞注射到囊胚期胚胎內(nèi)

⑤胚胎移植轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第43頁(yè)三種轉(zhuǎn)基因方法優(yōu)缺點(diǎn)比較轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第44頁(yè)優(yōu)點(diǎn)：

1、整合率相對(duì)較高2、可導(dǎo)入基因片斷較長(zhǎng)3、外源基因整合于全部組織細(xì)胞中概率高缺點(diǎn)：

1、整合率隨機(jī)2、有些動(dòng)物原核看不清，需經(jīng)特殊處理才能有效導(dǎo)入3、需較精密儀器，費(fèi)用昂貴顯微注射法轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第45頁(yè)優(yōu)點(diǎn)：1、胚胎存活率高2、病毒DNA隨機(jī)單拷貝整合3、宿主范圍廣

缺點(diǎn)：

1、整合率不高，整合位點(diǎn)是隨機(jī)2、后代多為嵌合體動(dòng)物3、外源基因易發(fā)生重排或丟失4、病毒載體容量不大5、病毒DNA序列可能會(huì)干擾外源基因表示

逆轉(zhuǎn)錄病毒法

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第46頁(yè)優(yōu)點(diǎn)：

1、整合率可控2、可用各種方法將外源基因?qū)隕S細(xì)胞，其細(xì)胞判定和篩選比較方便3、ES細(xì)胞注入囊胚及囊胚移植到子宮，操作比較簡(jiǎn)便

缺點(diǎn)：

1、ES細(xì)胞系培養(yǎng)、保留和維持不易2、后代多為嵌合體3、所需時(shí)間較長(zhǎng)

ES細(xì)胞法

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第47頁(yè)五、轉(zhuǎn)基因關(guān)鍵技術(shù)外源目標(biāo)基因制備外源目標(biāo)基因有效導(dǎo)入受精卵（胚胎）培養(yǎng)與移植外源目標(biāo)基因表示檢測(cè)等轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第48頁(yè)六、應(yīng)用價(jià)值研究基因結(jié)構(gòu)和功效及其表示與調(diào)控建立人類疾病動(dòng)物模型研究人類疾病基因治療

研制生物反應(yīng)器擴(kuò)大移植供體起源改良動(dòng)物品種

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第49頁(yè)1、研究基因結(jié)構(gòu)和功效及其表示與調(diào)控Geneknockout(基因敲除)：

是指對(duì)一個(gè)結(jié)構(gòu)已知但功效未知基因，從分子水平上設(shè)計(jì)試驗(yàn)，將該基因去除，或用其它次序相近基因取代，然后從整體觀察試驗(yàn)動(dòng)物，推測(cè)對(duì)應(yīng)基因功效。

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第50頁(yè)2、動(dòng)物疾病模型200各種動(dòng)物模型建立（病毒、遺傳、腫癌及眼疾病等）800余種人為改造小鼠產(chǎn)生其中開發(fā)最成功是轉(zhuǎn)基因小鼠轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第51頁(yè)HBV轉(zhuǎn)基因動(dòng)物樹鼩

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第52頁(yè)3.基因治療（genetherapy）

指將外源功效性目標(biāo)基因?qū)氩∪梭w內(nèi)，經(jīng)過調(diào)控目標(biāo)基因表示，抑制、替換或賠償缺點(diǎn)基因，從而恢復(fù)受累細(xì)胞、組織或器官生理功效，到達(dá)疾病治療目標(biāo)一個(gè)方法。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物為人類疾病基因治療提供了良好試驗(yàn)依據(jù)和模型轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第53頁(yè)4、研制生物反應(yīng)器

生物反應(yīng)器：

將藥用蛋白或含有特殊意義蛋白質(zhì)基因?qū)雱?dòng)物受精卵或早期胚胎，培育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，使之在動(dòng)物體內(nèi)（如乳腺、血液等）高效表示，生產(chǎn)出天然活性蛋白，這種轉(zhuǎn)基因動(dòng)物就稱之為動(dòng)物生物反應(yīng)器

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第54頁(yè)優(yōu)勢(shì)目標(biāo)產(chǎn)品產(chǎn)量高，輕易收獲目標(biāo)產(chǎn)品質(zhì)量好生產(chǎn)成本相對(duì)較低目標(biāo)產(chǎn)品提取相對(duì)較輕易轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第55頁(yè)主要?jiǎng)游锱?、羊、豬、雞主要靶器容乳腺、血液系統(tǒng)、膀胱及雞輸卵管系統(tǒng)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第56頁(yè)用動(dòng)物乳腺表示外源基因主要種類產(chǎn)品類別舉例血液產(chǎn)品第8因子、第9因子、C蛋白、凝血酶III、

抗胰蛋白酶、血纖蛋白原抗體單克隆抗體藥品干擾素、人生長(zhǎng)激素、tPA、EPO疫苗Malaria組織維生物Collagen營(yíng)養(yǎng)藥乳白蛋白、乳鐵蛋白、溶菌酶、人源化牛奶工業(yè)蛋白質(zhì)蜘蛛網(wǎng)蛋白、貝類分泌黏蛋白轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第57頁(yè)我國(guó)乳腺生物反應(yīng)器研究情況

目標(biāo)基因名稱產(chǎn)品主要功效負(fù)擔(dān)單位

人血清白蛋白血液溶脹劑中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)人干擾素抗病毒因子中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)雞法氏囊病毒VP雞疫苗中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)第九因子血友病治療上海兒童醫(yī)院

EPO細(xì)胞因子上海兒童醫(yī)院人胰島素原糖尿病治療新疆牧科院

TPA治療血栓軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院人生長(zhǎng)激素生長(zhǎng)激素不足揚(yáng)州大學(xué)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第58頁(yè)現(xiàn)實(shí)狀況已經(jīng)有約10種基因在大動(dòng)物上得到高表示（1g/L以上），其中抗胰蛋白酶、凝血酶Ⅲ和葡萄糖苷酶進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。世界上只有少數(shù)幾頭轉(zhuǎn)基因牛問世，還沒有生產(chǎn)出含有商業(yè)價(jià)值轉(zhuǎn)基因牛。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第59頁(yè)難點(diǎn)主要問題研制時(shí)間長(zhǎng)、技術(shù)復(fù)雜、投資過大、風(fēng)險(xiǎn)性高轉(zhuǎn)基因技術(shù)不足基因調(diào)控機(jī)制轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第60頁(yè)攜帶人血清白蛋白基因轉(zhuǎn)基因?！疤咸稀?/p>

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第61頁(yè)五、異種移植豬器官大小、解剖生理特點(diǎn)與人類相同，其組織相容性抗原與人有較高同源性。“三關(guān)”超急性排斥延緩性排斥、慢性排斥經(jīng)過轉(zhuǎn)基因來處理異種器官排斥問題

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第62頁(yè)英國(guó)：將人CD55、CD59轉(zhuǎn)入豬中，在仔豬血管內(nèi)皮細(xì)胞表示CD55、CD59。

將此轉(zhuǎn)基因豬心臟移植給猴，存活了10天。同濟(jì)：將人DFA轉(zhuǎn)入豬中，此轉(zhuǎn)基因豬心臟在猴體內(nèi)存活了90小時(shí)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第63頁(yè)六、品種改良

?

生長(zhǎng)相關(guān)基因?產(chǎn)毛性能相關(guān)基因?抗病毒相關(guān)基因轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第64頁(yè)生長(zhǎng)激素基因轉(zhuǎn)基因豬：生長(zhǎng)速度提升了10~15%飼料酬勞和瘦肉率提升了10%主要問題：

該轉(zhuǎn)基因豬傳了7代，仍未生產(chǎn)出純合轉(zhuǎn)基因家系。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第65頁(yè)七、主要設(shè)備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第66頁(yè)顯微操作儀轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第67頁(yè)拉針儀煅針儀轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第68頁(yè)電融合儀轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第69頁(yè)電極杯轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第70頁(yè)細(xì)胞融合操作界面轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第71頁(yè)CO2培養(yǎng)箱轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第72頁(yè)體視顯微鏡轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第73頁(yè)評(píng)述小鼠模型成功率高現(xiàn)轉(zhuǎn)基因方法存在不足，轉(zhuǎn)基因率低現(xiàn)有理論和技術(shù)還不能使人們隨心所欲操

作動(dòng)物基因組轉(zhuǎn)基因動(dòng)物仍含有商業(yè)化、產(chǎn)業(yè)化發(fā)展?jié)摿D(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第74頁(yè)第二部分克隆動(dòng)物轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第75頁(yè)克?。–lone）WHO:遺傳上同一機(jī)體或細(xì)胞系（株）無性生殖?？寺?dòng)物（clonalanimal）

是指用人工方法得到無性繁殖在遺傳上與親本動(dòng)物完全相同動(dòng)物轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第76頁(yè)動(dòng)物克隆方法一、胚胎分割二、細(xì)胞核移植——胚胎細(xì)胞核移植——體細(xì)胞核移植轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第77頁(yè)一、胚胎分割法

將未著床早期胚胎經(jīng)顯微手術(shù)后，分割為二、四、六若干等份，給每個(gè)受體內(nèi)植入一部分胚胎而妊娠產(chǎn)仔，這么由一個(gè)胚胎能夠克隆出多個(gè)遺傳性能完全一樣后代個(gè)體。

原理實(shí)質(zhì)多胞胎復(fù)制轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第78頁(yè)

二、核移植法（nucleartransfer）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第79頁(yè)（一）胚胎細(xì)胞核移植

把發(fā)育到后期胚胎細(xì)胞核取出經(jīng)過顯微操作移植到另一去核卵中發(fā)育出新個(gè)體

1、基本思緒

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第80頁(yè)2、操作程序(1)卵母細(xì)胞去核：吸管吸除法紫外線照射法

(2)核供體準(zhǔn)備和移植:單個(gè)卵裂球(3)卵裂球與卵子融合:電融正當(dāng)(4)卵子激活：電脈沖法(5)克隆胚胎培養(yǎng)和移植轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第81頁(yè)3、存在問題

效率太低：

克隆胚胎成活率只有10％～20％，成本太高轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和克隆動(dòng)物專家講座第82頁(yè)（二）體細(xì)胞核移植

1997年，《Nature》雜志發(fā)表了Roslin研究所Wilmut等用乳腺細(xì)胞核移植培育克隆綿羊—“多莉(Dolly)”試驗(yàn)匯報(bào)，引發(fā)