(高清版)GB∕T 37628-2019 化妝品中黃芪甲苷、芍藥苷、連翹苷和連翹酯苷A的測(cè)定 高效液相色譜法

GB/T37628—2019連翹酯苷A的測(cè)定高效液相色譜法國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局GB/T37628—2019本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)香料香精化妝品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC257)歸口。1連翹酯苷A的測(cè)定高效液相色譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了化妝品中黃芪甲苷、芍藥苷、連翹苷和連翹酯苷A含量的高效液相色譜的定性定量量限為8mg/kg;連翹苷和連翹酯苷A的檢出限為20mg/kg,定量限為60mg/kg。下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3黃芪甲苷和結(jié)構(gòu)式參見(jiàn)附錄A中表A.1。3.2.8黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確稱取100mg黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(3.2.7)(精確到0.1mg)置于光保存，有效期2個(gè)月。分別精確移取黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液2mL、3mL、4mL、5mL、10mL、50mL于100mL棕色容量瓶后，用甲醇定容至刻度，配制質(zhì)量濃度分別為20mg/L、30mg/L、40mg/L、2熱水(50℃±5℃),振搖使之最大化分散，分別以60mL、40mL、40mL、40mL用水飽和的正丁醇振搖4次，合并正丁醇液，用氨試液(3.2.6)洗滌3次(加入氨試液是為除去含酚羥基的成分和其他酸性干擾物質(zhì)),每次40mL,棄高效液相色譜條件如下：c)柱溫：30℃;黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(3.2.8)按照濃度由低到高順序進(jìn)行測(cè)定。以進(jìn)樣質(zhì)量的常用對(duì)數(shù)值為橫按照3.4.2的測(cè)定條件對(duì)待測(cè)物進(jìn)行測(cè)定，用外標(biāo)法定量。待測(cè)液中黃芪甲苷的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的液相色譜圖參見(jiàn)附錄B中圖B.1。33.5結(jié)果計(jì)算分析結(jié)果按式(1)計(jì)算：式中：GB/T37628—2019w——化妝品中黃芪甲苷的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);c——測(cè)定成分黃芪甲苷質(zhì)量濃度，單位為毫克每升(mg/L);V——樣品定容體積，單位為毫升(mL);m——樣品取樣量，單位為克(g)。3.6回收率和精密度添加水平50mg/kg～500mg/kg范圍時(shí)，黃芪甲苷的回收率在80.8%～98.2%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏3.7允許差在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。4芍藥苷芍藥苷經(jīng)甲醇超聲提取，高效液相色譜儀分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。4.2試劑和材料除另有規(guī)定外，所用試劑均為色譜純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。4.2.30.1%磷酸水溶液：取1mL磷酸(分析純)于1L容量瓶中，用去離子水定容至刻度，過(guò)0.45μm濾膜。4.2.4芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度不小于96%。芍藥苷的中英文名稱、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)式參見(jiàn)表A.1。4.2.5芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確稱取100mg芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(4.2.4)(精確到0.1mg)置于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成濃度為1000mg/L的芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，于4℃避光保存，有效期2個(gè)月。分別精確移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液0.1mL、0.3mL、1.2mL、3mL、6mL、12mL于100mL棕色容量瓶后，用甲醇定容至刻度，配制成濃度分別為1mg/L、3mg/L、12mg/L、30mg/L、60mg/L和120mg/L的芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，于4℃避光保存，可使用一周。4.3儀器和設(shè)備4.3.1高效液相色譜儀：配紫外檢測(cè)器(或等效檢測(cè)器)。4.3.2分析天平：感量0.001g和0.0001g。4.3.3超聲波清洗器。4.3.4具塞離心管：50mL。44.4分析步驟4.4.1樣品處理準(zhǔn)確稱取1.00g(準(zhǔn)確至0.001g)化妝品樣品(保濕水、保濕乳液和保濕霜)于50mL具塞離心管中(4.3.4),加入15mL甲醇(4.2.1)振蕩、搖勻，在超聲波清洗器(4.3.3)中超聲提取30min,放置室溫用甲4.4.2測(cè)定條件高效液相色譜條件如下：b)流動(dòng)相：0.1%磷酸水溶液(4.2.3)-乙腈(4.2.2)(85+15,體積比),等度洗脫。4.4.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(4.2.5),按4.4.2的測(cè)定條件濃度由低到高進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積-濃度作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。按照4.4.2的測(cè)定條件對(duì)待測(cè)物進(jìn)行測(cè)定，用外標(biāo)法定量。待測(cè)液中芍藥苷的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)，超過(guò)線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)樣測(cè)定。根據(jù)保留時(shí)間定性，根據(jù)峰面積進(jìn)行定量。芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的液相色譜圖參見(jiàn)圖B.2。4.4.5空白試驗(yàn)除不稱取樣品外，均按上述測(cè)定條件和步驟進(jìn)行。4.5結(jié)果計(jì)算分析結(jié)果按式(2)計(jì)算：式中：w——化妝品中芍藥苷的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);c——測(cè)定成分芍藥苷質(zhì)量濃度，單位為毫克每升(mg/L);V——樣品定容體積，單位為毫升(mL);m——樣品取樣量，單位為克(g)。添加水平8mg/kg～50mg/kg范圍時(shí)，芍藥苷的回收率在87.3%～102.9%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小5在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。5連翹苷和連翹酯苷A5.2.4連翹苷和連翹酯苷A標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度不小于96%。連翹苷和連翹酯苷A的中英文名稱、CAS5.2.5連翹苷和連翹酯苷A標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確稱取100mg連翹苷標(biāo)準(zhǔn)品(精確到0.1mg),用50%甲醇(5.2.2)溶解并定容于100mL容量瓶中，制得濃度為1000mg/L的連翹苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(于4℃避光保存，有效期2個(gè)月)。準(zhǔn)確稱取準(zhǔn)確稱取100mg連翹酯苷A標(biāo)準(zhǔn)品(精確到0.1mg),用50%甲醇(5.2.2)溶解并定容于100mL容量瓶中，制得濃度為1000mg/L的連翹酯苷A標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(于4℃避光保存，有效期2個(gè)月)。分別精確移取連翹苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液和連翹酯苷A標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液度，制得濃度為2mg/L、5mg/L、10mg/L、12mg/L、15精確稱取1.0g(準(zhǔn)確至0.001g)試樣于50mL容量瓶中，用50%甲醇(5.2.2)定容至刻度，超聲波清洗儀(5.3.3)超聲提取10min,取上清液10mL于10000r/min離心5min,取5mL上層清液氮吹至6GB/T37628—2019b)流動(dòng)相：甲醇(5.2.1)-1%乙酸溶液(5.2.3)(70+30,體積比),等度洗脫；連翹苷和連翹酯苷A標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(5.2.5),按5.4.2的測(cè)定條件濃度由低到高進(jìn)樣測(cè)定，以峰面按照5.4.2的測(cè)定條件對(duì)待測(cè)物進(jìn)行測(cè)定，用外標(biāo)法定量。待測(cè)液中連翹苷和連翹酯苷A的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)，超過(guò)線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)樣測(cè)定。根據(jù)保留時(shí)間定性，根據(jù)峰面積進(jìn)行定量。連翹苷和連翹酯苷A標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的液相色譜圖參見(jiàn)圖B.3。除不稱取樣品外，均按上述測(cè)定條件和步驟進(jìn)行。5.5結(jié)果計(jì)算分析結(jié)果按式(3)計(jì)算：式中：w——化妝品中連翹苷和連翹酯苷A的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);c——測(cè)定成分連翹苷和連翹酯苷A質(zhì)量濃度，單位為毫克每升(mg/L);V——樣品定容體積，單位為毫升(mL);5.6回收率和精密度添加水平100mg/kg～500mg/kg范圍時(shí)，連翹苷的回收率在81.6%～103%之間，連翹酯苷A的回收率在87.7%～109.2%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。7序號(hào)中文名稱英文名稱CAS號(hào)分子式結(jié)構(gòu)式1黃芪甲苷astragaloside84687-43-4HOHOHHO02芍藥苷paeoniflorin23180-57-6C??H?O480.46HOHOHH03連翹苷f(shuō)orsythin487-41-2C??H??O?HH4forsythosideA79916-77-1C?9H?O?5624.59HCHCHOHO08(法效高色譜)料精化妝本標(biāo)測(cè)的出質(zhì)量中規(guī)構(gòu)英名構(gòu)B.1。品單妝本標(biāo)測(cè)的出質(zhì)量中規(guī)構(gòu)英名構(gòu)B.2。檢驗(yàn)妝果檢驗(yàn)工妝A本標(biāo)測(cè)的出質(zhì)量中規(guī)構(gòu)英名構(gòu)B.3。LSULSU700.00400.00200.00料精化妝準(zhǔn)稱號(hào)式譜13.34min。規(guī)B.1化妝品中液相