實驗動物 微生物檢測

ICS65.020.30CCSB44DB11代替DB11/T1809-2020Laboratoryanimal—MicrobioloXXXX-XX-XX發(fā)布北京市市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB11/T1809—202x 12規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 44等級分類 55檢測要求 56檢測程序 7檢測方法 8檢測規(guī)則 219結(jié)果判定 2210結(jié)論與報告 23附錄A（規(guī)范性）貓泛白細(xì)胞減少癥病毒PCR檢測方法 24附錄B（規(guī)范性）貓杯狀病毒RT-PCR檢測方法 25附錄C（規(guī)范性）貓皰疹病毒I型PCR檢測方法 27附錄D（規(guī)范性）貓免疫缺陷病毒熒光PCR檢測方法 28附錄E（規(guī)范性）貓傳染性腹膜炎病毒RT-PCR檢測方法 30附錄F（規(guī)范性）貓腸道冠狀病毒RT-PCR檢測方法 32附錄G（規(guī)范性）貓白血病病毒熒光PCR檢測方法 34附錄H（規(guī)范性）巴爾通體熒光PCR檢測方法 36附錄I（規(guī)范性）空腸彎曲桿菌PCR檢測方法 37附錄J（規(guī)范性）鴿痘病毒熒光PCR檢測方法 38附錄K（規(guī)范性）實驗魚4種分枝桿菌的區(qū)分鑒定方法 39附錄L（規(guī)范性）實驗魚PCR檢測方法 40附錄M（規(guī)范性）呼腸孤病毒普通巢式RT-PCR檢測方法 41附錄N（規(guī)范性）樹鼩腺病毒PCR檢測方法 43附錄O（規(guī)范性）樹鼩變形桿菌檢測方法 44附錄P（規(guī)范性）樹鼩伯氏疏螺旋體檢測方法 46 47IDB11/T1809—202x本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替DB11/T1809—2020《實驗動物微生物檢測》，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動外，主要技術(shù)變化如下：a)實驗豬和實驗小型豬各等級病原微生物檢測項目增加了“普通級豬：偽狂犬病毒、非洲豬瘟、豬細(xì)小等的檢測要求，SPF豬：非洲豬瘟、豬流感、豬輪狀等的檢測要求。（見5.2.1）b)實驗狨猴各等級病原微生物檢測項目增加了“猴逆轉(zhuǎn)D型病毒”。（見5.2.3）c)增加了“實驗樹鼩”微生物檢測內(nèi)容。（見5.2.9）d)增加了“實驗樹鼩檢測程序”。（見6.3）e)實驗豬和實驗小型豬各等級病原微生物檢測方法增加了豬流感、非洲豬瘟、豬輪狀病毒。（見7.1）f)更改了豬圓環(huán)病毒2型、豬胸膜肺炎放線桿菌、豬痢疾、豬水泡病毒的檢測方法（見7.1GB/T35910,NY/T537,NY/T545,GB/T19200）g)實驗狨猴病原微生物檢測方法增加了“猴逆轉(zhuǎn)錄D型病毒”（見7.3GB/T14926.61）h)增加了“實驗樹鼩病原微生物檢測方法”。（見7.9）i)增加了實驗豬的抽樣數(shù)量要求。（見8.2.3）本文件由北京市科學(xué)技術(shù)委員會、中關(guān)村科技園區(qū)管理委員會提出并歸口。本文件由北京市科學(xué)技術(shù)委員會、中關(guān)村科技園區(qū)管理委員會組織實施。本文件起草單位：中國食品藥品檢定研究院、中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所、國家衛(wèi)生健康委科學(xué)技術(shù)研究所、中國科學(xué)院水生生物研究所、中國動物疫病預(yù)防控制中心、中國人民解放軍軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院實驗動物中心、北京實驗動物研究中心、首都醫(yī)科大學(xué)、浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院、中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實驗動物研究所、北京康藍(lán)生物技術(shù)有限公司、北京市實驗動物管理辦公室、北京實驗動物行業(yè)協(xié)會、北京市標(biāo)準(zhǔn)化研究院、北京大學(xué)、中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所。本文件主要起草人：岳秉飛、王淑菁、馮育芳、李曉波、邢進(jìn)、王吉、付瑞、賀爭鳴、姚文生、康凱、任小俠、印春生、范學(xué)政、吳思捷、張瑩輝、趙俊杰、劉瑩、程君生、薛麟、李根平、王熙、李吏、王錫樂、劉文菊、謝佳琪、樊子風(fēng)、李愛華、崔宗斌、孫德明、王天奇、田克恭、范薇、鞏薇、遇秀玲、盧勝明、劉云波、魏強、向志光、佟巍、張麗芳、阮研碩、李長龍、薩曉嬰、戴方偉、陳振文、杜小燕、韋玉生、李夏瑩、田永路、代解杰、孫曉梅。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：——首次發(fā)布分別為DB11/T828.1—2011、DB11/T1053.1—2013、DB11/T1459.1—2017、DB11/T1459.2—2017、DB11/T1459.3—2017、DB11/T1459.4—2018、DB11/T1459.5—2018；——2020年發(fā)布為DB11/T1809—2020；——本次為第二次修訂。1DB11/T1809—202x實驗動物微生物檢測本文件規(guī)定了實驗動物的微生物等級分類、檢測要求、檢測程序、檢測方法、檢測規(guī)則、結(jié)果判定、結(jié)論與報告。本文件適用于實驗小型豬、實驗豬、實驗牛、實驗羊、實驗狨猴、實驗長爪沙鼠、實驗雪貂、實驗貓、實驗雞、實驗鴨、實驗鵝、實驗鴿、實驗魚（斑馬魚和劍尾魚）、實驗樹鼩的微生物檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB4789.7食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗副溶血性弧菌檢驗GB4789.15食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗霉菌和酵母計數(shù)GB/T14926.1實驗動物沙門菌檢測方法GB/T14926.3實驗動物耶爾森菌檢測方法GB/T14926.4實驗動物皮膚病原真菌檢測方法GB/T14926.5實驗動物多殺巴斯德桿菌檢測方法GB/T14926.6實驗動物支氣管鮑特桿菌檢測方法GB/T14926.8實驗動物支原體檢測方法GB/T14926.10實驗動物泰澤病原體檢測方法GB/T14926.11實驗動物大腸埃希菌0115a,c:K(B)檢測方法GB/T14926.12實驗動物嗜肺巴斯德桿菌檢測方法GB/T14926.13實驗動物肺炎克雷伯桿菌檢測方法GB/T14926.14實驗動物金黃色葡萄球菌檢測方法GB/T14926.15實驗動物肺炎鏈球菌檢測方法GB/T14926.16實驗動物乙型溶血性鏈球菌檢測方法GB/T14926.17實驗動物綠膿桿菌檢測方法GB/T14926.18實驗動物淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒檢測方法GB/T14926.19實驗動物漢坦病毒檢測方法GB/T14926.22實驗動物小鼠肝炎病毒檢測方法GB/T14926.23實驗動物仙臺病毒檢測方法GB/T14926.24實驗動物小鼠肺炎病毒檢測方法GB/T14926.25實驗動物呼腸孤病毒III型檢測方法2DB11/T1809—202xGB/T14926.28實驗動物小鼠細(xì)小病毒檢測方法GB/T14926.46實驗動物鉤端螺旋體檢測方法GB/T14926.47實驗動物志賀菌檢測方法GB/T14926.48實驗動物結(jié)核分枝桿菌檢測方法GB/T14926.49實驗動物空腸彎曲桿菌檢測方法GB/T14926.56實驗動物狂犬病病毒檢測方法GB/T14926.57實驗動物犬細(xì)小病毒檢測方法GB/T14926.59實驗動物犬瘟熱病毒檢測方法GB/T14926.60實驗動物獼猴皰疹病毒I型（B病毒）檢測方法GB/T14926.61實驗動物猴逆轉(zhuǎn)D型病毒檢測方法GB/T14926.62實驗動物猴免疫缺陷病毒檢測方法GB/T14926.63實驗動物猴T淋巴細(xì)胞趨向性病毒I型檢測方法GB/T14926.64實驗動物猴痘病毒檢測方法GB/T16551豬瘟診斷技術(shù)GB/T17999.1SPF雞微生物學(xué)監(jiān)測第1部分：SPF雞微生物學(xué)監(jiān)測總則GB/T17999.5SPF雞微生物學(xué)監(jiān)測第5部分：SPF雞瓊脂擴散試驗GB/T17999.6SPF雞微生物學(xué)監(jiān)測第6部分：SPF雞酶聯(lián)免疫吸附試驗GB/T18089藍(lán)舌病病毒分離、鑒定及血清中和抗體檢測技術(shù)GB/T18090豬繁殖與呼吸綜合征診斷方法GB/T18648非洲豬瘟診斷技術(shù)GB/T18637牛病毒性腹瀉/粘膜病診斷技術(shù)規(guī)范GB/T18638流行性乙型腦炎診斷技術(shù)GB/T18641偽狂犬病診斷方法GB/T18646動物布魯氏菌病診斷技術(shù)GB/T18652致病性嗜水氣單胞菌檢驗方法GB/T18653胎兒彎曲桿菌的分離鑒定方法GB/T18935口蹄疫診斷技術(shù)GB/T19915.7豬鏈球菌2型熒光PCR檢測方法GB/T27535豬流感HI抗體檢測方法GB/T21674豬圓環(huán)病毒聚合酶鏈反應(yīng)試驗方法GB/T35910豬圓環(huán)病毒2型阻斷ELISA抗體檢測方法GB/T27517鑒別豬繁殖與呼吸綜合征病毒高致病性與經(jīng)典毒株復(fù)合RT-PCR方法GB/T27528口蹄疫病毒實時熒光RT-PCR檢測方法GB/T27530牛出血性敗血病診斷技術(shù)GB/T27539動物流感檢測A型流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法GB/T27637副結(jié)核分枝桿菌實時熒光PCR檢測方法GB/T27639結(jié)核病病原菌實時熒光PCR檢測方法3DB11/T1809—202xGB/T27981牛傳染性鼻氣管炎病毒實時熒光PCR檢測方法GB/T27982小反芻獸疫診斷技術(shù)GB/T34750副豬嗜血桿菌檢測方法GB/T34756豬輪狀病毒病病毒RT-PCR檢測方法GB/T36789動物狂犬病病毒核酸檢測方法NY/T536雞傷寒和雞白痢診斷技術(shù)NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運輸技術(shù)規(guī)范NY/T543牛流行熱微量中和試驗方法NY/T544豬流行性腹瀉診斷技術(shù)NY/T546豬傳染性萎縮性鼻炎診斷技術(shù)NY/T548豬傳染性胃腸炎診斷技術(shù)NY/T550動物和動物產(chǎn)品沙門氏菌檢測方法NY/T560小鵝瘟診斷技術(shù)NY/T561動物炭疽診斷技術(shù)NY/T562動物衣原體病診斷技術(shù)NY/T563禽霍亂（禽巴氏桿菌?。┰\斷技術(shù)NY/T566豬丹毒診斷技術(shù)NY/T576綿羊痘和山羊痘診斷技術(shù)NY/T1186豬支原體肺炎診斷技術(shù)NY/T1244接觸傳染性膿皰皮炎診斷技術(shù)NY/T1247禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病診斷技術(shù)NY/T1468絲狀支原體山羊亞種檢測方法NY/T3072禽結(jié)核病診斷技術(shù)NY/T537豬放線桿菌胸膜肺炎診斷技術(shù)NY/T3466-2019實驗用豬微生物學(xué)等級及監(jiān)測NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運輸技術(shù)規(guī)范SC/T7201.2魚類細(xì)菌病檢疫技術(shù)規(guī)程第2部分：柱狀嗜纖維菌爛鰓病診斷方法SC/T7201.3魚類細(xì)菌病檢疫技術(shù)規(guī)程第3部分：嗜水氣單胞菌及豚鼠氣單胞菌腸炎病診斷方法SC/T7201.4魚類細(xì)菌病檢疫技術(shù)規(guī)程第4部分：熒光假單胞菌赤皮病診斷方法SN/T1087Q熱檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T1171山羊關(guān)節(jié)炎-腦炎和綿羊梅迪-維斯納病檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T1172雞白血病檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T1173雞病毒性關(guān)節(jié)炎檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T1207豬痢疾檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T1315牛地方流行性白血病檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T1447豬傳染性胸膜肺炎檢疫技術(shù)規(guī)范4DB11/T1809—202xSN/T1554雞法氏囊病檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T1869食品中多種致病菌快速檢測方法PCR法SN/T1919豬細(xì)小病毒病檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T2439魚鰓霉病檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T2552.8乳及乳制品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗方法第8部分：普通變形桿菌和奇異變形桿菌檢驗SN/T2702豬水泡病檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T2744鴨病毒性腸炎檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T2847水貂阿留申病檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T3392國境口岸萊姆病螺旋體檢驗規(guī)程SN/T3464鴨病毒性肝炎I型檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T3484綿羊肺腺瘤病檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T3724進(jìn)出口食品中幽門螺桿菌的檢驗方法SN/T4556鴨疫里默氏菌病檢疫技術(shù)規(guī)范3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1實驗動物laboratoryanimal經(jīng)人工飼育，對其攜帶的微生物和寄生蟲實行控制，遺傳背景明確或者來源清楚，用于科學(xué)研究、教學(xué)、生產(chǎn)和檢定以及其他科學(xué)實驗的動物。3.2普通級實驗動物conventional(CV)laboratoryanimal不攜帶所規(guī)定的人獸共患病病原、動物烈性傳染病病原以及對科學(xué)實驗有重大干擾的病原的實驗動物。3.2.1無特定抗原抗體普通級實驗動物specificantigen&antibody-freeconventional(CV)laboratoryanimal普通級實驗動物中未免疫特定的疫苗，且經(jīng)檢測不攜帶實驗要求排除的特定病原微生物抗原抗體的實驗動物。3.3無特定病原體級實驗動物specificpathogenfree(SPF)laboratoryanimal除普通級實驗動物應(yīng)排除的病原外，不攜帶主要潛在感染或條件致病和對科學(xué)實驗干擾大的病原的實驗動物。3.45DB11/T1809—202x無菌級實驗動物germfree(GF)laboratoryanimal無可檢出的一切生命體的實驗動物。4等級分類根據(jù)對微生物和寄生蟲控制的程度，實驗動物分為普通級實驗動物、無特定病原體級實驗動物和無菌級實驗動物三個等級。5檢測要求5.1外觀檢查對待檢實驗動物的精神狀態(tài)、行為、被毛、天然孔分泌物進(jìn)行外觀檢查。5.2微生物檢測項目5.2.1實驗豬和實驗小型豬各等級病原微生物檢測項目按照表1的規(guī)定執(zhí)行。表1實驗豬和實驗小型豬各等級病原微生物檢測項目病毒流行性乙型腦炎（Japaneseencephalitis▲▲●-▲▲豬瘟病毒（Classicalswi▲▲●●●●● ●●▲●○○紅斑丹毒絲菌（Erysipelothrixr○-（Porcinereproductiveandrespirato-▲皮膚病原真菌（Pathogenicder-●級流行性乙型腦炎病毒（Japaneseencephaliti●●●○●●●●豬水泡病毒（Swinevesicular●●●●6DB11/T1809—202x●-●●○○豬丹毒桿菌（Erysipelothrixrhusiopathiae）●●●●●●●●豬細(xì)小病毒（Porcineparvo●●（Porcinereproductiveandrespirato●●豬胸膜肺炎放線桿菌（Actinobacilluspleuropne●●豬肺炎支原體（Mycoplasmahyopn●●豬痢疾短螺旋體（Brachyspirahyodysent●●豬傳染性胃腸炎病毒（Transmissiblegastroenteritis●●豬流行性腹瀉病毒（Porcineepidemicdiarrhea●-Bordetellabronchiseptica/ToxigenicPasteurellamultocida●●副豬嗜血桿菌（Haemophilus● ●●皮膚病原真菌（Pathogenicder-●豬水泡病病毒（Swinevesiculardisease-○-○●●注：“▲”表示必檢項，普通級實驗動物可以免疫，無特定病原體級實驗動物和無特定抗原抗體5.2.2實驗牛和實驗羊各等級病原微生物檢測項目按照表2的規(guī)定執(zhí)行。表2實驗牛和實驗羊各等級病原微生物檢測項目▲▲▲▲●-○○○○伯氏疏螺旋體（Borreliabur○-○○小反芻獸疫病毒（Pestedespetitsrum-▲7DB11/T1809—202x綿羊/山羊痘病毒（Sheep/Goat-▲●●●●牛分枝桿菌（Mycobacterium●-○○○○伯氏疏螺旋體（Borreliabur○-○○牛病毒性腹瀉-粘膜病毒（Bovineviraldi●-牛傳染性鼻氣管炎病毒（Infectiousbovinerhinotrach● 副結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteriumparatub●●胎兒彎曲桿菌（Campylobacter●●●-●-●●○○牛流行熱病毒（Bovineephemeral○-小反芻獸疫病毒（Pestedespetitsrum-●綿羊/山羊痘病毒（Sheep/Goat-● ●-●-●梅迪-維納斯病毒（Maedi-visnavir-○山羊關(guān)節(jié)炎-腦炎病毒（Caprinearthritisenc-○綿羊肺腺瘤病毒（Ovinepulmonaryadenomatosisv ○●●5.2.3實驗狨猴各等級病原微生物檢測項目按照表3的規(guī)定執(zhí)行。表3實驗狨猴各等級病原微生物檢測項目●淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒（LymphocyticChoriomeningi○●皮膚病原真菌（Pathogenicder●●結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteriumtu●8DB11/T1809—202x●淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒（LymphocyticChoriomeningi○●皮膚病原真菌（Pathogenicder●●結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteriumtu●○猴免疫缺陷病毒（Simianimmunodeficienc●●●小腸結(jié)腸炎耶爾森菌（Yersiniaent●○奇異變形桿菌（Proteusmir○●●5.2.4實驗長爪沙鼠各等級病原微生物檢測項目按照表4的規(guī)定執(zhí)行。表4實驗長爪沙鼠各等級病原微生物檢測項目●淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒（LymphocyticChoriomeningi●●皮膚病原真菌（Pathogenicder○●淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒（LymphocyticChoriomeningi●●皮膚病原真菌（Pathogenicder○●●小鼠肺炎病毒（PneumoniaVi●●●綠膿桿菌（Pseudomonasaer●●●●支氣管鮑特桿菌（Bordetellabronchis●嗜肺巴斯德桿菌（Pasteurellap●●9DB11/T1809—202x金黃色葡萄球菌（Staphylococcu●肺炎鏈球菌（Streptococcuspnem●○○產(chǎn)酸克雷伯桿菌（Klebsiellao○○肺炎克雷伯桿菌（Klebsiellapneum○●5.2.5實驗雪貂各等級病原微生物檢測項目按照表5的規(guī)定執(zhí)行。表5實驗雪貂各等級病原微生物檢測項目●皮膚病原真菌（Pathogenicder●●●犬瘟熱病毒（Caninedistem▲▲▲●皮膚病原真菌（Pathogenic●●●●●支氣管鮑特桿菌（Bordetellabronchi●肺炎克雷伯桿菌（Klebsiellapneum○○○肺炎鏈球菌（Streptococcuspneu○○金黃色葡萄球菌（Staphylococcu○綠膿桿菌（Pseudomonasaer○●犬瘟熱病毒（Caninedistem●●●○●DB11/T1809—202x5.2.6實驗貓各等級病原微生物檢測項目按照表6的規(guī)定執(zhí)行。表6實驗貓各等級病原微生物檢測項目貓泛白細(xì)胞減少癥病毒（Felinepanleukopeni▲▲▲▲●皮膚病原真菌（Pathogenicder○貓泛白細(xì)胞減少癥病毒（Felinepanleukopeni●●●●●皮膚病原真菌（Pathogenicder○貓免疫缺陷病毒（Felineimmunodeficiency●貓傳染性腹膜炎病毒（Felineinfectiousperitonitis●貓腸道冠狀病毒（Felineentericcoro○貓白血病病毒（Felineleukemia○支氣管敗血波氏桿菌（Bordetellabronchis●●小腸結(jié)腸炎耶爾森菌（Yersiniaent○○○○○○●5.2.7實驗雞、實驗鴨、實驗鵝、實驗鴿各等級病原微生物檢測項目按照表7的規(guī)定執(zhí)行。表7實驗雞、實驗鴨、實驗鵝、實驗鴿各等級病原微生物檢測項目禽流感病毒（AvianInfluen▲▲▲○DB11/T1809—202x新城疫病毒（NewcastleDiseas▲●●●▲---傳染性支氣管炎病毒（InfectionBronchitis▲---傳染性喉氣管炎病毒（InfectionLaryngotracheitis▲---傳染性法氏囊病病毒（InfectionBursa▲ ▲---▲---▲---雞白痢沙門氏菌（Salmonellapu● 副雞嗜血桿菌（Haemophilusparag▲ 雞毒支原體（Mycoplasmagallis▲----▲●--●●○ ●●● ●●●--▲-級禽流感病毒（AvianInfluen●●●○新城疫病毒（NewcastleDiseas●●●●● 傳染性支氣管炎病毒（InfectionBronchitis●---傳染性喉氣管炎病毒（InfectionLaryngotracheitis●---傳染性法氏囊病病毒（InfectionBursa●---●---●○○-●---雞白痢沙門氏菌（Salmonellapu●---副雞嗜血桿菌（Haemophilusparag●---雞毒支原體（Mycoplasmagallise● 淋巴白血病病毒（LymphoidLeukos● ●●●-●---禽腦脊髓炎病毒（AvianEncephalomyelit●---● ○● 滑液囊支原體（Mycoplasmasy●---○●●○-●●- ●●● ●●●DB11/T1809—202x-●--鴨疫里默氏桿菌（Riemerella-●●---●----●●●●●注：“▲”表示必檢項，普通級實驗動物可以免疫，無特定病原體級實驗動物和無特定抗原抗體5.2.8實驗魚各等級病原微生物檢測項目按照表8的規(guī)定執(zhí)行。表8實驗魚病原微生物檢測項目海分枝桿菌（Mycobacterium●龜分枝桿菌（Mycobacteriu●膿腫分枝桿菌（Mycobacterium●●●●○海分枝桿菌（Mycobacterium●龜分枝桿菌（Mycobacteriu●膿腫分枝桿菌（Mycobacterium●●●●○柱狀黃桿菌（Flavobacteriumc●●●偶發(fā)分枝桿菌（Mycobacterium●●●嗜鰓黃桿菌（Flavobacteriumb○嗜冷黃桿菌（Flavobacteriu○○○鏈球菌（Streptococcus○●DB11/T1809—202x5.2.9實驗樹鼩各等級病原微生物檢測項目按照表9的規(guī)定執(zhí)行。表9實驗樹鼩病原微生物檢測項目●●皮膚病原真菌（Pathogenic●●●皮膚病原真菌（Pathogenic●●●○○○●肺炎鏈球菌（Streptococcuspn●○金黃色葡萄球菌（Staphylococcu○伯氏疏螺旋體（Borreliaburgdo○●6檢測程序6.1實驗小型豬、實驗豬、實驗牛、實驗羊、實驗狨猴、實驗長爪沙鼠、實驗雪貂、實驗貓、實驗雞、實驗鴨、實驗鵝、實驗鴿、實驗樹鼩檢測程序。6.1.1實驗小型豬、實驗豬、實驗牛、實驗羊、實驗狨猴、實驗長爪沙鼠、實驗雪貂、實驗貓、實驗雞、實驗鴨、實驗鵝、實驗鴿、實驗樹鼩檢測程序符合圖1的要求。6.1.2麻醉應(yīng)根據(jù)不同動物種類、采集部位決定是否需要麻醉。需要麻醉時，應(yīng)考慮不同種類實驗動物的耐受劑量，可采用吸入性麻醉或注射麻醉，麻醉過程中應(yīng)隨時注意實驗動物的反應(yīng)。實施麻醉人員應(yīng)經(jīng)過相應(yīng)培訓(xùn)并具備相應(yīng)的能力。6.1.3釆血以及毛發(fā)、皮屑、鼻咽拭子、肛拭子（或新鮮糞便）的采樣方法參照NY/T541進(jìn)行。6.1.4需要時可根據(jù)臨床癥狀和前期檢測結(jié)果，進(jìn)一步采集動物組織或特定樣本進(jìn)行檢測。DB11/T1809—202x編號外觀檢查麻醉采樣采血耳后、背部毛發(fā)、羽毛或皮屑采血耳后、背部毛發(fā)、羽毛或皮屑鼻咽拭子、肛拭子（或新鮮糞便） 檢測結(jié)果判定判定結(jié)論圖1實驗動物微生物檢測程序6.2實驗魚檢測程序6.2.1實驗魚檢測程序符合圖2的要求。6.2.2實驗魚的麻醉應(yīng)方便于檢查、采用和滿足動物福利倫理的要求。6.2.3需要時可根據(jù)臨床癥狀和前期檢測結(jié)果，進(jìn)一步采集動物組織或特定樣本進(jìn)行檢測。DB11/T1809—202x編號 外觀檢查麻醉體表微生物學(xué)檢查和取材體內(nèi)微生物學(xué)檢查和取材解剖鏡和顯微鏡檢查微生物分離培養(yǎng)鑒定（必要時取水樣）結(jié)果判定判定結(jié)論圖2實驗魚微生物檢測程序7檢測方法7.1實驗豬和實驗小型豬病原微生物學(xué)檢測方法實驗豬和實驗小型豬病原微生物學(xué)檢測方法按照表10的規(guī)定執(zhí)行。表10實驗豬和實驗小型豬病原微生物學(xué)檢測方法DB11/T1809—202x7.2實驗牛和實驗羊病原微生物學(xué)檢測方法實驗牛和實驗羊病原微生物學(xué)檢測方法按照表11的規(guī)定執(zhí)行。表11實驗牛和實驗羊病原微生物學(xué)檢測方法DB11/T1809—202x7.3實驗狨猴病原微生物學(xué)檢測方法實驗狨猴病原微生物學(xué)檢測方法按照表12的規(guī)定執(zhí)行。表12實驗狨猴病原微生物學(xué)檢測方法指酶結(jié)合物使用酶標(biāo)記的兔抗狨猴IgG抗體。7.4實驗長爪沙鼠病原微生物學(xué)檢測方法實驗長爪沙鼠病原微生物學(xué)檢測方法按照表13的規(guī)定執(zhí)行。表13實驗長爪沙鼠病原微生物學(xué)檢測方法DB11/T1809—202x7.5實驗雪貂病原微生物學(xué)檢測方法按照表14的規(guī)定執(zhí)行。表14實驗雪貂病原微生物學(xué)檢測方法DB11/T1809—202x7.6實驗貓病原微生物學(xué)檢測方法實驗貓病原微生物學(xué)檢測方法按照表15的規(guī)定執(zhí)行。表15實驗貓病原微生物學(xué)檢測方法7.7實驗雞、實驗鴨、實驗鵝、實驗鴿病原微生物檢測方法實驗雞、實驗鴨、實驗鵝、實驗鴿病原微生物學(xué)檢測方法按照表16的規(guī)定執(zhí)行。表16實驗雞、實驗鴨、實驗鵝、實驗鴿病原微生物檢測方法DB11/T1809—202x7.8實驗魚病原微生物學(xué)檢測方法7.8.1實驗魚細(xì)菌和真菌檢測方法實驗魚細(xì)菌和真菌的檢測方法按照表17的規(guī)定執(zhí)行。表17實驗魚細(xì)菌和真菌檢測方法DB11/T1809—202x7.8.2實驗魚4種分枝桿菌的區(qū)分鑒定方法按照附錄K的規(guī)定執(zhí)行。7.8.3實驗魚聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction，PCR）檢測方法按照附錄L的規(guī)定執(zhí)行。7.9實驗樹鼩病原微生物檢測方法實驗樹鼩病原微生物學(xué)檢測方法按照表18的規(guī)定執(zhí)行。表18實驗樹鼩病原微生物學(xué)檢測方法8檢測規(guī)則8.1檢測頻率每3個月至少應(yīng)檢測1次。8.2抽樣8.2.1抽樣方式按微生物和寄生蟲采樣要求聯(lián)合取樣，隨機抽樣。抽樣月齡按表19的規(guī)定執(zhí)行。表19實驗動物抽樣月齡DB11/T1809—202x8.2.2抽樣方法抽樣方法按照NY/T541的規(guī)定進(jìn)行。8.2.3抽樣數(shù)量實驗魚抽樣數(shù)量：同一水環(huán)境實驗魚數(shù)量少于100尾，則抽樣5尾；大于等于100尾，則按5%比例抽取，最大抽樣量為30尾。實驗豬抽樣數(shù)量：群體大小小于100頭，采樣不少于10頭；群體大小100-500頭，采樣數(shù)量不少于15頭；群體大小大于500頭，采樣數(shù)量不少于20頭。其他動物抽樣數(shù)量按表20的規(guī)定執(zhí)行。表20實驗動物抽樣數(shù)量>5008.3送檢要求樣品和送檢單一同送達(dá)具備檢測能力的實驗室，送檢單應(yīng)寫明檢品名稱、品系、等級、數(shù)量及檢測項目等內(nèi)容。9結(jié)果判定9.1抗體檢查經(jīng)檢測，免疫項目的群體免疫合格率不低于70%，判為合格。DB11/T1809—202x經(jīng)檢測，非免疫項目，血清抗體陰性判為合格。9.2抗原和核酸檢查經(jīng)檢測，未見陽性結(jié)果判為合格。10結(jié)論與報告10.1結(jié)論按照檢測規(guī)則，檢測指標(biāo)均合格，依據(jù)表1～表9，判為符合相應(yīng)等級的實驗動物。按照檢測規(guī)則，若檢測指標(biāo)有1項（含）以上不合格，依據(jù)表1～表9，判為不符合相應(yīng)等級的實驗動物。10.2報告根據(jù)檢測結(jié)果出具檢測報告。DB11/T1809—202x（規(guī)范性）貓泛白細(xì)胞減少癥病毒PCR檢測方法A.1待測樣本DNA的提取與保存將樣本按照DNA提取試劑盒的操作說明提取DNA，凍存于-70℃冰箱備用。A.2對照設(shè)立從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取已知陰性的同類樣品作為陰性對照?？瞻讓φ眨涸跀U增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。A.3PCR反應(yīng)引物根據(jù)vp2基因序列（GenBank：AF015223）設(shè)計：上游引物序列（5′-3′）：AGTTCAACAAGATAAAAGAC下游引物序列（5′-3′）：TCCTGTATCTTGATGTGCTAA.4PCR反應(yīng)體系及條件A.4.1PCR反應(yīng)體系20μL體系包括10×PCRbuffer（含Mg2+）2μL，dNTP（2.5mM）1.6μL，上下游引物（10μM）各1μL，Taq酶（5U/μL）0.5μL，模板DNA2μL，最后用滅菌雙蒸水補至20μL。A.4.2PCR反應(yīng)條件94℃5min；94℃30s，55℃30s，72℃1min，35個循環(huán)；72℃延伸10min。A.5PCR產(chǎn)物大小301bp。A.6結(jié)果判定陽性對照出現(xiàn)301bp的目的片段，陰性對照無條帶，實驗成立；待檢樣品出現(xiàn)301bp目的片段時，判定貓泛白細(xì)胞減少癥病毒陽性；未出現(xiàn)301bp目的片段時，判定貓泛白細(xì)胞減少癥病毒陰性。DB11/T1809—202x（規(guī)范性）貓杯狀病毒RT-PCR檢測方法B,1待測樣本RNA的提取與保存將樣本按照RNA提取試劑盒的操作說明提取RNA，凍存于-70℃冰箱備用。B.2對照設(shè)立從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取已知陰性的同類樣品作為陰性對照?？瞻讓φ眨涸跀U增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。B.3逆轉(zhuǎn)錄B.3.1逆轉(zhuǎn)錄體系25μL體系包括5×RTbuffer5μL，dNTP（2.5mM）4μL，隨機引物（500μg/mL）1μL，AMV（10U/μL）0.5μL，模板RNA8μL，最后用滅菌雙蒸水補至25μL。B.3.2逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件37℃90min，72℃15min，4℃5min，各1個循環(huán)。B.4PCR反應(yīng)引物及探針根據(jù)衣殼蛋白基因序列（GenBank：AY560117）設(shè)計：上游引物序列（5′-3′）：AACCTGCGCTAACGTGCTT下游引物序列（5′-3′）：CAGTGACAATACACCCAGAAB.5PCR反應(yīng)體系及條件B.5.1PCR反應(yīng)體系25μL體系包括10×PCRbuffer（含Mg2+）2.5μL，dNTP（2.5mM）2.5μL，上下游引物（10μM）各1.5μL，Taq酶（5U/μL）1.0μL，模板cDNA2μL，最后用滅菌雙蒸水補至25μL。B.5.2PCR反應(yīng)條件94℃5min；94℃1min，55℃1min，72℃1min，35個循環(huán)；72℃延伸10min。DB11/T1809—202xB.6PCR產(chǎn)物大小926bp。B.7結(jié)果判定陽性對照出現(xiàn)926bp的目的片段，陰性對照無條帶，實驗成立；待檢樣品出現(xiàn)926bp目的片段時，判定貓杯狀病毒陽性；未出現(xiàn)926bp目的片段時，判定貓杯狀病毒陰性。DB11/T1809—202x（規(guī)范性）貓皰疹病毒I型PCR檢測方法C.1待測樣本DNA的提取與保存將樣本按照DNA提取試劑盒的操作說明提取DNA，凍存于-70℃冰箱備用。C.2對照設(shè)立從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取已知陰性的同類樣品作為陰性對照?？瞻讓φ眨涸跀U增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。C.3PCR反應(yīng)引物根據(jù)tk基因序列（GenBank：FJ478159）設(shè)計：上游引物序列（5′-3′）：ATACTGTCCGCATTTACATAGA下游引物序列（5′-3′）：CGGTTCTTGAGCGTCCCC.4PCR反應(yīng)體系及條件C.4.1PCR反應(yīng)體系20μL體系包括10×PCRbuffer（含Mg2+）2μL，dNTP（2.5mM）1.6μL，上下游引物（10μM）各1μL，Taq酶（5U/μL）0.5μL，模板DNA2μL，最后用滅菌雙蒸水補至20μL。C.4.2PCR反應(yīng)條件94℃5min；94℃30s，54℃30s，72℃1min，35個循環(huán)；72℃延伸5min。C.5PCR產(chǎn)物大小531bp。C.6結(jié)果判定陽性對照出現(xiàn)531bp的目的片段，陰性對照無條帶，實驗成立；待檢樣品出現(xiàn)531bp目的片段時，判定貓皰疹病毒I型陽性；未出現(xiàn)531bp目的片段時，判定貓皰疹病毒I型陰性。DB11/T1809—202x（規(guī)范性）貓免疫缺陷病毒熒光PCR檢測方法D.1待測樣本RNA的提取與保存將樣本按照RNA提取試劑盒的操作說明提取RNA，凍存于-70℃冰箱備用。D.2對照設(shè)立從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取已知陰性的同類樣品作為陰性對照?？瞻讓φ眨涸跀U增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。D.3逆轉(zhuǎn)錄D.3.1逆轉(zhuǎn)錄體系25μL體系包括5×RTbuffer5μL，dNTP（2.5mM）4μL，隨機引物（500μg/mL）1μL，AMV（10U/μL）0.5μL，模板RNA8μL，最后用滅菌雙蒸水補至25μL。D.3.2逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件37℃90min，72℃15min，4℃5min，各1個循環(huán)。D.4熒光PCR反應(yīng)引物及探針上游引物序列（5′-3′）：AGAACCTGGTGATATACCAGAGAC下游引物序列（5′-3′）：TTGGGTCAAGTGCTACATATTG探針（5′-3′）：（FAM）TATGCCTGTGGAGGGCCTTCCT（TAMRA）D.5熒光PCR反應(yīng)體系及條件D.5.1熒光PCR反應(yīng)體系50μL體系包括2×Mixbuffer25μL，上下游引物（10μM）各2.5μL，探針（10μM）0.5μL，模板cDNA10μL，最后用滅菌雙蒸水補至50μL。D.5.2熒光PCR反應(yīng)條件95℃預(yù)變性3min；95℃30s，64℃30s，共5個循環(huán)；85℃30s，64℃1min（采集熒光信號共40個循環(huán)。D.6結(jié)果判定DB11/T1809—202x陽性對照Ct值≤35，有明顯的熒光擴增曲線，陰性對照無Ct值，并且無熒光擴增曲線，試驗有效；待檢樣品有熒光擴增曲線，且Ct值≤35，判定貓免疫缺陷病毒陽性；待檢樣品無熒光擴增曲線，或Ct值＞35，判定貓免疫缺陷病毒陰性。DB11/T1809—202x（規(guī)范性）貓傳染性腹膜炎病毒RT-PCR檢測方法E.1待測樣本RNA的提取與保存將樣本按照RNA提取試劑盒的操作說明提取RNA，凍存于-70℃冰箱備用。E.2對照設(shè)立從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取已知陰性的同類樣品作為陰性對照?？瞻讓φ眨涸跀U增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。E.3逆轉(zhuǎn)錄E.3.1逆轉(zhuǎn)錄體系25μL體系包括5×RTbuffer5μL，dNTP（2.5mM）4μL，隨機引物（500μg/mL）1μL，AMV（10U/μL）0.5μL，模板RNA8μL，最后用滅菌雙蒸水補至25μL。E.3.2逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件37℃90min，72℃15min，4℃5min，各1個循環(huán)。E.4PCR反應(yīng)引物及探針根據(jù)3'UTR基因序列（GenBank：NC_002306）設(shè)計：上游引物序列（5′-3′）：GGCAACCCGATGTTTAAAACTGG下游引物序列（5′-3′）：CACTAGATCCAGACGTTAGCTCE.5PCR反應(yīng)體系及條件E.5.1PCR反應(yīng)體系25μL體系包括10×PCRbuffer（含Mg2+）2.5μL，dNTP（2.5mM）2.5μL，上下游引物（10μM）各1.5μL，Taq酶（5U/μL）1.0μL，模板cDNA2μL，最后用滅菌雙蒸水補至25μL。E.5.2PCR反應(yīng)條件94℃5min；95℃30s，55℃30s，72℃30s，35個循環(huán)；72℃延伸7min。E.6PCR產(chǎn)物大小DB11/T1809—202x223bp。E.7結(jié)果判定陽性對照出現(xiàn)223bp的目的片段，陰性對照無條帶，實驗成立；待檢樣品出現(xiàn)223bp目的片段時，判定貓傳染性腹膜炎病毒陽性；未出現(xiàn)223bp目的片段時，判定貓傳染性腹膜炎病毒陰性。DB11/T1809—202x（規(guī)范性）貓腸道冠狀病毒RT-PCR檢測方法F.1待測樣本RNA的提取與保存將樣本按照RNA提取試劑盒的操作說明提取RNA，凍存于-70℃冰箱備用。F.2對照設(shè)立從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取已知陰性的同類樣品作為陰性對照?？瞻讓φ眨涸跀U增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。F.3逆轉(zhuǎn)錄F.3.1逆轉(zhuǎn)錄體系25μL體系包括5×RTbuffer5μL，dNTP（2.5mM）4μL，隨機引物（500μg/mL）1μL，AMV（10U/μL）0.5μL，模板RNA8μL，最后用滅菌雙蒸水補至25μL。F.3.2逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件37℃90min，72℃15min，4℃5min，各1個循環(huán)。F.4PCR反應(yīng)引物及探針根據(jù)S基因序列（GenBank：X80799）設(shè)計：上游引物序列（5′-3′）：TGCTATTAGTAAGTGGGGCC下游引物序列（5′-3′）：ATAACCGCTACGCTTCATACF.5PCR反應(yīng)體系及條件F.5.1PCR反應(yīng)體系50μL體系包括10×PCRbuffer（含Mg2+）5.0μL，dNTP（2.5mM）1.0μL，上下游引物（50μM）各1.0μL，Taq酶（4U/μL）0.5μL，模板cDNA1.0μL，最后用滅菌雙蒸水補至50μL。F.5.2PCR反應(yīng)條件94℃5min；94℃45s，52℃45s，72℃90s，30個循環(huán)；72℃延伸10min。F.6PCR產(chǎn)物大小DB11/T1809—202x366bp。F.7結(jié)果判定陽性對照出現(xiàn)366bp的目的片段，陰性對照無條帶，實驗成立；待檢樣品出現(xiàn)366bp目的片段時，判定貓腸道冠狀病毒陽性；未出現(xiàn)366bp目的片段時，判定貓腸道冠狀病毒陰性。DB11/T1809—202x（規(guī)范性）貓白血病病毒熒光PCR檢測方法G.1待測樣本RNA的提取與保存將樣本按照RNA提取試劑盒的操作說明提取RNA，凍存于-70℃冰箱備用。G.2對照設(shè)立從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取已知陰性的同類樣品作為陰性對照。空白對照：在擴增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。G.3逆轉(zhuǎn)錄G.3.1逆轉(zhuǎn)錄體系25μL體系包括5×RTbuffer5μL，dNTP（2.5mM）4μL，隨機引物（500μg/mL）1μL，AMV（10U/μL）0.5μL，模板RNA8μL，最后用滅菌雙蒸水補至25μL。G.3.2逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件37℃90min，72℃15min，4℃5min，各1個循環(huán)。G.4熒光PCR反應(yīng)引物及探針上游引物序列（5′-3′CTCCCTTTCTGAAGTAGTCTTACAAAACA下游引物序列（5′-3′GTGATCCGCATAGAAGCAACATTCMGB探針（5′-3′FAM）CTGTGCCGCATTAAAA（NFQ）G.5熒光PCR反應(yīng)體系及條件G.5.1熒光PCR反應(yīng)體系20μL體系包括2×Mixbuffer10μL，上下游引物（10μM）各0.4μL，探針（10μM）0.2μL，模板cDNA1μL，最后用滅菌雙蒸水補至20μL。G.5.2熒光PCR反應(yīng)條件50℃2min；95℃預(yù)變性10min；95℃15s，60℃1min（采集熒光信號共40個循環(huán)。G.6結(jié)果判定DB11/T1809—202xG.7結(jié)果判定陽性對照Ct值≤35，有明顯的熒光擴增曲線，陰性對照無Ct值，并且無熒光擴增曲線，試驗有效；待檢樣品有熒光擴增曲線，且Ct值≤35，判定貓白血病病毒陽性；待檢樣品無熒光擴增曲線，或Ct值＞35，判定貓白血病病毒陰性。DB11/T1809—202x（規(guī)范性）巴爾通體熒光PCR檢測方法H.1待測樣本DNA的提取與保存將樣本按照DNA提取試劑盒的操作說明提取DNA，凍存于-70℃冰箱備用。H.2對照設(shè)立從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取已知陰性的同類樣品作為陰性對照?？瞻讓φ眨涸跀U增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。H.3熒光PCR引物及探針上游引物序列（5′-3′GGTCATATTGATGGTTTGGCTGAGA下游引物序列（5′-3′GGTATAAAACGCTTTGGTACTTGTAGGAMGB探針（5′-3′FAM-CACCTTCGCTTTTCTG-NFQH.4熒光PCR反應(yīng)體系及條件H.4.1熒光PCR反應(yīng)體系20μL體系包括2×Mixbuffer10μL，上下游引物（10μM）各0.4μL，探針（10μM）0.2μL，模板DNA2μL，最后用滅菌雙蒸水補至20μL。H.4.2熒光PCR反應(yīng)條件50℃2min；95℃預(yù)變性10min；95℃15s，60℃1min（采集熒光信號共40個循環(huán)。H.5結(jié)果判定H.6結(jié)果判定陽性對照Ct值≤35，有明顯的熒光擴增曲線，陰性對照無Ct值，并且無熒光擴增曲線，試驗有效；待檢樣品有熒光擴增曲線，且Ct值≤35，判定巴爾通體陽性；待檢樣品無熒光擴增曲線，或Ct值＞35，判定巴爾通體陰性。DB11/T1809—202x（規(guī)范性）空腸彎曲桿菌PCR檢測方法I.1待測樣本DNA的提取與保存將樣本按照DNA提取試劑盒的操作說明提取DNA，凍存于-70℃冰箱備用。I.2對照設(shè)立從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取已知陰性的同類樣品作為陰性對照?？瞻讓φ眨涸跀U增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。I.3PCR引物及探針根據(jù)HIPO基因序列（GenBank：LS483362.1）設(shè)計：上游引物序列（5′-3′TTGGGTGGTGCTAAGGCAAT下游引物序列（5′-3′AGAAGCCATCATCGCACCTTI.4PCR反應(yīng)體系及條件I.4.1PCR反應(yīng)體系20μL體系包括2×Mixbuffer10μL，上下游引物（10μM）各0.4μL，探針（10μM）0.2μL，模板DNA2μL，最后用滅菌雙蒸水補至20μL。I.4.2PCR反應(yīng)條件94℃5min；94℃30s，62℃30s，72℃1min，35個循環(huán)；72℃延伸5min。I.5PCR產(chǎn)物大小269bp。I.6結(jié)果判定陽性對照出現(xiàn)269bp的目的片段，陰性對照無條帶，實驗成立；待檢樣品出現(xiàn)269bp目的片段時，判定空腸彎曲桿菌陽性；未出現(xiàn)269bp目的片段時，判定空腸彎曲桿菌陰性。DB11/T1809—202x（規(guī)范性）鴿痘病毒熒光PCR檢測方法J.1待測樣本DNA的提取與保存將樣本按照DNA提取試劑盒的操作說明提取DNA，凍存于-70℃冰箱備用。J.2對照設(shè)立從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取已知陰性的同類樣品作為陰性對照?？瞻讓φ眨涸跀U增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。J.3熒光PCR引物及探針上游引物序列（5′-3′CTAATAAACTAGAAGCAGAAATAAATATGAGATCAATCAAAAG下游引物序列（5′-3′TCAGATAGTCTAGATTCACATGAGATACAAACAMGB探針（5′-3′FAM）TCGGGATATGGGAACTTA（NFQ）J.4熒光PCR反應(yīng)體系及條件J.4.1熒光PCR反應(yīng)體系20μL體系包括2×Mixbuffer10μL，上下游引物（10μM）各0.4μL，探針（10μM）0.2μL，模板DNA2μL，最后用滅菌雙蒸水補至20μL。J.4.2熒光PCR反應(yīng)條件50℃2min；95℃預(yù)變性10min；95℃15s，60℃1min（采集熒光信號共40個循環(huán)。J.5結(jié)果判定J.6結(jié)果判定陽性對照Ct值≤35，有明顯的熒光擴增曲線，陰性對照無Ct值，并且無熒光擴增曲線，試驗有效；待檢樣品有熒光擴增曲線，且Ct值≤35，判定鴿痘病毒陽性；待檢樣品無熒光擴增曲線，或Ct值＞35，判定鴿痘病毒陰性。DB11/T1809—202x（規(guī)范性）實驗魚4種分枝桿菌的區(qū)分鑒定方法實驗魚中偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌、膿腫分枝桿菌和海分枝桿菌的區(qū)分鑒定方法按照表K.1的規(guī)定執(zhí)行。嗜血分枝桿菌采用種特異性引物進(jìn)行PCR快速檢測。表K.1實驗魚4種分枝桿菌的區(qū)分鑒定方法---+ ±--++-+-+++±+++±++++--DB11/T1809—202x（規(guī)范性）實驗魚PCR檢測方法按照SN/T1869進(jìn)行細(xì)菌DNA提取、PCR擴增、電泳和結(jié)果分析。實驗魚有關(guān)細(xì)菌的屬或種特異性PCR擴增引物見表L.1。對擴增產(chǎn)物進(jìn)行常規(guī)的分子克隆和測序比對。表L.1實驗魚PCR檢測方法菌種或菌株引物名稱和序列擴增產(chǎn)物大小FlavobacteriumpsychroMycobacteriumhaemophilGCAATTTT(A/G)TC(A/G/T)AC(CACGTTCGATTTCATCACGT為相應(yīng)細(xì)菌的屬特異性引物。DB11/T1809—202x（規(guī)范性）呼腸孤病毒普通巢式RT-PCR檢測方法（來源于中國實驗動物學(xué)會團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/CALAS8-2017《實驗動物樹鼩微生物學(xué)等級及監(jiān)測》）M.1待測樣本RNA的提取與保存將樣本按照RNA提取試劑盒的操作說明提取RNA，凍存于-70℃冰箱備用。M.2對照設(shè)立從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取已知陰性的同類樣品作為陰性對照。空白對照：在擴增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。M.3逆轉(zhuǎn)錄M.3.1逆轉(zhuǎn)錄體系20μL體系包括5×RTbuffer4μL，dNTP（2.5mM）2μL，隨機引物（500μg/mL）1μL，AMV（200U/μL）1μL，模板RNA8μL，最后用滅菌雙蒸水補至20μL。M.3.2逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件25℃5min，42℃60min，70℃5min，各1個循環(huán)。M.4PCR反應(yīng)引物外圍上游引物TRV-F15’-CCATGATACTGACTCAGTTTGGACCG-3’下游引物TRV-R15’-CACTAAGAAAATACCRCTAGTRCAWGCCAT-3’上游引物TRV-F25’-GATTAAGGCBCCWTTGGAGAAGTTTG-3’下游引物TRV-R25’-GACAAGGGCRTRRCTCCCATGTACAT-3’M.5PCR反應(yīng)體系及條件M.5.1PCR反應(yīng)體系25μL體系包括2×Mixbuffer12.5μL，上下游引物（10μM）各1μL，模板cDNA3μL，最后用滅菌雙蒸水補至25μL。M.5.2PCR反應(yīng)條件DB11/T1809—202x95℃預(yù)變性5min；95℃30s，50℃30s，72℃2min，共35個循環(huán)。72℃10min。M.6結(jié)果判定在陰性、陽性對照成立的條件下，待測樣品擴增得到513bp特異性條帶判為陽性，未擴增則判為陰性。對陽性檢測結(jié)果，再用同一PCR或ELISA方法重試，如仍為陽性，則判為陽性。DB11/T1809—202x（規(guī)范性）樹鼩腺病毒PCR檢測方法（來源于中國實驗動物學(xué)會團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/CALAS8-2017《實驗動物樹鼩微生物學(xué)等級及監(jiān)測》N.1待測樣本DNA的提取與保存將樣本按照DNA提取試劑盒的操作說明提取DNA，凍存于-20℃冰箱備用。N.2對照設(shè)立從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作