保膽取石術(shù)后成石多因素研究

1/1保膽取石術(shù)后成石多因素研究保膽取石術(shù)后成石多因素研究可行性研究報告一、立項的背景和意義由于飲食結(jié)構(gòu)、生活習性的改變和B超等醫(yī)療檢查設備的普及，我國膽囊結(jié)石的發(fā)病率逐年上升，達到8％~10%。

膽囊結(jié)石的治療至今已有120余年，盡管方法繁多，但其主要治療方法仍為手術(shù)切除。

近年來存在著保留膽囊與切除膽囊之爭。

保膽與切膽爭論的焦點之一是保膽術(shù)后膽囊結(jié)石的復發(fā)問題。

自1882年德國醫(yī)生Langenbuch發(fā)明了膽囊切除術(shù)以來，此術(shù)式已普遍認為是治療膽囊結(jié)石的金標準。

但也有些學者提出，膽囊作為人體的一個器官，發(fā)揮著無可替代的生理作用，不應該輕易切除，且膽囊切除仍有一定的并發(fā)癥，如創(chuàng)傷小、恢復快的腹腔鏡膽囊切除術(shù)(1aparoscopiccholecystectomy，LC)，術(shù)中并發(fā)癥發(fā)生率為1.5％~8.6％，其中膽管損傷率為0.2%~0.7%，一旦發(fā)生往往是災難性的；據(jù)2011年10月在上海舉行的第三屆全國內(nèi)鏡微創(chuàng)保膽學術(shù)大會報道，LC術(shù)后腹瀉發(fā)生率12.19%，返流性胃炎發(fā)生率5.72%，返流性食道炎發(fā)生率3.84%，膽囊切除術(shù)綜合癥發(fā)生率11.5%，肝外膽管結(jié)石發(fā)生率5.67%。

因而，在一定的條件下可保膽取石，以達到去除病灶、保護膽囊的目的。

在當時無內(nèi)鏡技術(shù)的落后條件下，Langenbuch認為膽囊造瘺取石術(shù)治療膽囊結(jié)石術(shù)后易復發(fā)(90％)；當時提出了膽囊切除不是因為膽囊內(nèi)含有結(jié)石，而是因為膽囊能生長結(jié)石的溫床論，故只能行膽囊切除。

隨著內(nèi)鏡微創(chuàng)保膽取石術(shù)的開展，目前有些學者認為其術(shù)后結(jié)石復發(fā)率并不高。

老式保膽術(shù)后復發(fā)率實際大部分為術(shù)中結(jié)石殘留所致，應為殘留率。

張寶善[1]報道的1520例內(nèi)鏡微創(chuàng)保膽取石術(shù)術(shù)后5年結(jié)石復發(fā)率為2％~6％，10年后復發(fā)率為2％~7％。

在第三屆全國內(nèi)鏡微創(chuàng)保膽學術(shù)大會上張寶善統(tǒng)計內(nèi)鏡微創(chuàng)保膽取石術(shù)3699例，保膽取石的結(jié)石復發(fā)率為9.76%。

第l3屆全國膽道外科學術(shù)大會的閉幕式上，黃志強院士指出：

內(nèi)鏡保膽取石理念是2l世紀的大事，是中國外科的一件大事!應用內(nèi)鏡（膽道鏡）保膽取石可以全面觀察膽囊腔，做到完全、徹底地取出結(jié)石。

但術(shù)后結(jié)石復發(fā)率報告差異很大，從2％～43.21％不等，顯然單用結(jié)石殘留無法解釋。

結(jié)石復發(fā)率是否還與其它成石因素如瘦素（leptin）、血脂和血清膽囊收縮素（CCK）等有關？多數(shù)學者認為，膽囊結(jié)石的發(fā)生與眾多因素有關。

經(jīng)過幾十年的探索，人們對膽囊結(jié)石形成機制的認識不斷深入。

膽固醇代謝異常、膽囊功能異常、成核異常及致石基因等因素在膽石形成中都起到了重要的作用。

leptin、血脂水平和CCK等的研究，分別從成石成分，膽囊動力及內(nèi)分泌層面來闡述了結(jié)石形成的原因。

有文獻報道，leptin可增加膽道膽固醇分泌，改變膽汁成分及膽汁膽固醇飽和狀態(tài)，影響膽囊動力與膽囊膽固醇結(jié)石形成有關。

血清甘油三酯（TG）及血清總膽固醇（TCH）水平的增高可能與膽囊結(jié)石形成有關，高脂血癥可能是該病的易患因素。

血清高密度脂蛋白（HDL）低水平可能是膽道膽固醇分泌增高進而促進膽囊膽固醇結(jié)石形成的重要信號。

血清CCK水平低下或CCK受體缺乏、CCK抵抗導致膽囊動力降低，使膽汁淤積，與膽囊結(jié)石形成密切相關。

保膽取石病人取除結(jié)石以后，膽囊仍保留，術(shù)后有一定的結(jié)石復發(fā)率，是否由于上述等的成石因素未發(fā)生改變？但大部分病人術(shù)后結(jié)石不再復發(fā)，又是為什么？對于保膽取石術(shù)后，在成石成因、膽囊動力及內(nèi)分泌方面發(fā)生什么變化；這些變化又與膽囊切除患者存在怎樣的差異，目前研究甚少。

因而，保膽取石術(shù)后的主要成石因素如leptin、血脂和血清CCK等的變化，是值得深入研究的問題。

本研究采用酶聯(lián)免疫法等測定保膽取石組、膽囊切除組手術(shù)前后血清leptin、CCK、血脂水平，并以正常人群作對照，旨在探索保膽取石與膽囊切除患者手術(shù)前后三者的變化，并闡述其與保膽取石后結(jié)石復發(fā)的關系，對臨床保膽取石患者如何減少及預防膽石的復發(fā)提出相應的建議；同時探討對于滿足保膽條件的患者，是否保膽比切膽更加有利。

二、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢1、對膽囊結(jié)石患者保膽取石的研究和發(fā)展趨勢膽囊造瘺取石術(shù)是一古老的保膽取石手術(shù)方法，結(jié)石復發(fā)率極高。

Kellett等報道[2]36年間23種雜志發(fā)表的2053例膽囊造瘺取石術(shù)后1～19年的隨訪結(jié)果，結(jié)石復發(fā)率0%~83%，總復發(fā)率34.6%。

Donald等報道經(jīng)皮膽囊取石術(shù)后6～48個月的結(jié)果，其結(jié)石復發(fā)率為7%~44%，總復發(fā)率31%。

因結(jié)石復發(fā)率過高，該術(shù)式在臨床上已極少應用。

1988年Kellett等首先報道經(jīng)皮膽鏡碎石清除術(shù)(PCCL)，并作為新技術(shù)推廣；但由于該技術(shù)操作復雜，90年代初國內(nèi)進行了技術(shù)上的改良，直接將膽囊底部固定于右上腹小切口處，應用硬質(zhì)腔鏡直視下清除結(jié)石，操作方便，能檢查膽囊任何部位，操作通道寬，可進入多種取石碎石工具，結(jié)石完全清除率高；該項技術(shù)當時在國內(nèi)得到了部分推廣。

該院271例PCCL近期隨訪結(jié)果顯示，術(shù)后9～24個月(平均19個月)結(jié)石總復發(fā)率為9.96%；120例3～36個月(平均23個月)的隨訪結(jié)果示結(jié)石復發(fā)率為13.3%[3]。

鄒一平等439例中遠期隨訪結(jié)果發(fā)現(xiàn)[4]，結(jié)石總復發(fā)率為41.16%，術(shù)后1～1O年每年結(jié)石累積復發(fā)率分別為9.57%，18.91%，27.33%，34.14%，37.59%，39.86%，41.9O%，42.73%，42．85%和43．21%，結(jié)石復發(fā)率從術(shù)后第1年至第5年逐年明顯增加，隨后每年復發(fā)率緩慢增加。

近年來，積極提倡應用纖維膽道鏡聯(lián)合腹腔鏡技術(shù)進行保膽取石術(shù)的內(nèi)鏡微創(chuàng)保膽取石術(shù)，但結(jié)石復發(fā)率差異較大。

張寶善等報道1520例內(nèi)鏡微創(chuàng)保膽取石術(shù)術(shù)后5年結(jié)石復發(fā)率為2~6%，10年后復發(fā)率為2~7%。

榮萬水報道158例微創(chuàng)膽囊切開取石術(shù)后1、3、5年結(jié)石復發(fā)率分別為1．9%、12.26%和17.91%；而徐立友等報道475例內(nèi)鏡取石保膽術(shù)后1～5年隨訪，只有5例結(jié)石復發(fā)。

因此．人們對于保膽取石術(shù)結(jié)石復發(fā)問題有了新的認識。

有作者認為[5]保膽術(shù)后結(jié)石復發(fā)率高的主要原因是結(jié)石殘留，而應用硬質(zhì)腔鏡或纖維膽道鏡可以全面觀察膽囊腔，做到完全、徹底地取凈結(jié)石。

結(jié)石殘留是保膽取石術(shù)后結(jié)石復發(fā)的原因之一。

而上述所有文獻所報道的術(shù)后結(jié)石復發(fā)率的差異太大，原因何在？單純用結(jié)石殘留無法解釋。

康健等[6]認為膽囊功能、膽囊壁厚度是影響結(jié)石復發(fā)的重要因素，是否還與膽囊底切口的處理方法不同、適應證選擇不一等因素有關，有待探討。

2、膽囊結(jié)石與血leptin、CCK、血脂的關系膽囊結(jié)石主要以膽固醇結(jié)石為主，其形成與眾多因素有關，膽囊結(jié)石患者，尤其女性患者，血清總膽固醇及血清甘油三酯顯著高于正常人群，而血清高密度脂蛋白（HDL）則低于正常人群[7]。

血清膽固醇升高導致肝臟攝取膽固醇增加而增加膽道膽固醇的分泌，使膽囊內(nèi)膽汁處于高膽固醇狀態(tài)，為膽囊結(jié)石形成提供重要條件。

有研究表明，膽固醇結(jié)石患者中存在肝細胞微粒體TG轉(zhuǎn)運蛋白活性增加及肝臟TG含量明顯增高的情況[8]，提示高脂血癥與膽固醇結(jié)石形成有關，為膽石癥易患因素。

高密度脂蛋白是膽固醇逆向轉(zhuǎn)運的重要載體。

肝臟通過受體介導作用攝取HDL中包含的膽固醇/膽固醇酯。

清道夫受體B族I型（SR-BI）是一種肝臟選擇性攝取HDL的受體。

小鼠肝臟細胞SR-BI的過度表達導致血漿HDL減少的同時，膽汁膽固醇增加。

動物實驗研究發(fā)現(xiàn)，膽道膽固醇高分泌與低血漿HDL水平及肝臟HDL受體SR-BI的顯著誘導有關。

對膽固醇結(jié)石患者的研究也證實了此機制[9]。

CCK是一種具有多種生理功能的腦腸肽，是促進膽囊收縮的主要生理激素之一，其主要通過直接與膽囊平滑肌上的受體結(jié)合而誘導膽囊排空，促進膽囊收縮。

CCK、CCK受體通過影響膽囊動力促進結(jié)石形成[10]。

（1）膽囊結(jié)石患者的CCK水平明顯低于正常人群，且不受性別影響。

CCK水平的低下導致膽囊動力下降，高濃度的膽固醇膽汁在膽囊內(nèi)淤積，刺激粘蛋白分泌，導致膽固醇結(jié)晶形成，凝聚成核。

沉積物可進一步抑制膽囊收縮，膽汁淤積進一步加重，如此惡性循環(huán)，導致結(jié)石進一步形成，增大，增多。

（2）但也有研究發(fā)現(xiàn)，膽囊結(jié)石患者血清CCK水平明顯高于正常人群,這是由于炎癥或結(jié)石引起膽囊CCK受體數(shù)目減少及對CCK敏感性下降，CCK抵抗，而導致血清CCK反饋性增多。

上述兩種情況，CCK無論升高還是降低，其與正常人群都存在顯著性差異，且差異具有統(tǒng)計學意義。

都說明CCK的變化影響膽囊動力，促進結(jié)石形成。

leptin是由肥胖基因（Ob基因）編碼，主要由白色脂肪細胞分泌的一種調(diào)節(jié)機體能量平衡的激素，是由167個氨基酸組成的分泌型蛋白。

其研究起源于1994年，Zhang等[11]應用定位克隆技術(shù)首次成功克隆出小鼠的肥胖基因及人類同源序列。

人類的leptin基因位于染色體7q31.3，全長約20kb，是一條由2個內(nèi)含子、3個外顯子編碼的DNA序列，編碼區(qū)DNA大于15000個堿基對。

leptin影響膽囊結(jié)石的形成是多方面的。

（1）leptin參與脂質(zhì)代謝的調(diào)控，影響膽汁的成分。

leptin通過清除脂肪組織中過量膽固醇，增加血膽固醇排泄，導致膽汁膽固醇過飽和，促進結(jié)石形成。

近年來國外動物實驗研究發(fā)現(xiàn)注射leptin可以使小鼠膽道膽固醇分泌增多。

VanpPatten發(fā)現(xiàn)對鼠急性leptin投予后，leptin可通過調(diào)節(jié)多種酶的活性，降低血漿VLDL膽固醇濃度，減少膽固醇生物合成，增加膽鹽分解代謝，增加膽汁膽固醇分泌。

另外高濃度的leptin還可使膽汁中親水性膽汁酸鹽比例增加，疏水性膽汁酸鹽減少，多種因素協(xié)同作用，膽固醇過飽和性膽汁導致膽固醇結(jié)石形成。

（2）leptin對膽囊動力學的影響。

leptin可通過縮短膽囊肌細胞長度和降低對膽囊收縮素（CCK）反應性等作用來影響膽囊動力。

膽汁中的leptin與膽囊壁瘦素受體結(jié)合，能發(fā)揮濃度依賴性促進膽囊壁毛細血管中血小板凝集作用，使毛細血管中血栓形成，從而引起膽囊壁血管發(fā)生病變，形成膽囊壁炎癥，同時導致膽囊運動功能受損。

在膽囊壁細胞炎性損害過程中膽囊中的leptin又參與囊壁修復過程，作用于成纖維細胞，促使細胞增殖，纖維化，局部細小瘢痕形成，降低膽囊運動功能。

而本身炎癥反應和免疫反應與膽固醇結(jié)石形成密切相關[12]。

總之，高leptin血癥是膽囊膽固醇結(jié)石發(fā)生的一個重要內(nèi)分泌因素[13]。

縱上所述，leptin、血脂水平和CCK等與膽囊結(jié)石的形成相關[14]。

但膽囊結(jié)石患者，在取出結(jié)石保留膽囊的情況下，由于去除了結(jié)石病灶、減輕了膽囊的炎癥，改善了膽囊功能，上述指標是否發(fā)生了變化、發(fā)生了怎樣的變化，尚未見文獻報道。

3、膽囊結(jié)石成因研究3500年前的古埃及木乃伊和1600年前的楊州女尸體內(nèi)，已發(fā)現(xiàn)膽囊結(jié)石。

至今膽囊結(jié)石依然是世界范圍內(nèi)的一種常見病、多發(fā)病。

雖然經(jīng)過大量臨床和基礎研究，但膽囊結(jié)石的確切成因目前尚不清楚。

研究表明，膽石形成是多方面綜合作用的結(jié)果，與膽囊功能異常、代謝因素、成核過程異常、致石基因、遺傳性及其它致石因素（細菌、腸道、禁食、其它相關疾?。┑扔嘘P。

金恩蕓等也認為血清CCK、三酰甘油、膽固醇、高密度脂蛋白、Apo-B和瘦素水平變化可能與膽囊結(jié)石的形成有關。

對于保膽取石術(shù)后結(jié)石的復發(fā)成因，目前認為，可能與手術(shù)中的結(jié)石殘留[1,5,15]、膽囊功能、膽囊壁厚度等有關[6]，與手術(shù)前膽結(jié)石成因有很大的相似性。

而保膽取石術(shù)后對膽囊功能和成石機制上缺少前瞻性的對比研究，這是保膽取石術(shù)后結(jié)石復發(fā)的關鍵點，也是臨床上如何有效地預防和治療保膽取石術(shù)后結(jié)石復發(fā)的基礎。

參考文獻[1]張寶善,劉京山.內(nèi)鏡微創(chuàng)保膽取石1520例臨床分析.中華普外科手術(shù)學雜志（電子版）,2009,3(1):39-41[2]KellettMJ,WickhamJEA,RusselRCG.Percutaneouscholecystolithotomy.BrMedJ,1988,296:453-455[3]楊五計,胡安國,李志偉,等.經(jīng)皮膽鏡碎石清除術(shù)的術(shù)式及適應癥.中華普通外科雜志,2001,16:328-330[4]ZouYP,DuJD,LiWM,eta1.Gallstonerecurrenceaftersuccessfulpercutaneouscholecystolithotomy:a10-yearfollow-upof439cases.HBPDInt,2007,6:l99-203[5]褚延魁,魯建國,高德明.微創(chuàng)保膽手術(shù)應思考的幾個問題.中國普通外科雜志,2010,19:184-186[6]康健健,張波,王世等.微創(chuàng)內(nèi)鏡保膽取石術(shù)后結(jié)石復發(fā)率及影響因素分析.中國醫(yī)藥,2011,6（3）:322-324[7]Grigor’evaIN,MaliutinaSK,VoevodaMI.Roleofhyperlipidemiaincholelithiasis.EkspKlinGastroenterol.2010,(4):64-8[8]CastroJ,AmigoL,MiquelJF,etal.Increasedactivityofhepaticmicrosomaltriglyceridetransferproteinandbileacidsynthesisingallstonedisease.Hepatology,2007,45:1261-1266[9]JiangZY,PariniP,EggertsenG,etal.IncreasedexpressionofLXRalpha,ABCG5,ABCG8andSRBIintheliverfromnormolipidemicnonobeseChinesegallstonepatient,JLipidRes,2008,49:464-472[10]WangHH,PortincasaP,LiuM,TsoP,etal.EffectofgallbladderhypomotilityoncholesterolcrystallizationandgrowthinCCK-deficientmice.BiochimBiophysActa.2010Feb,1801(2):138-46[11]ZhangY,proencaR,MaffeiM,etal.Positionalcloningofthemouseobesegeneanditshumanhomologue[J].Nature,1994,5（372）:425-432[12]MaurerKJ,CareyMC,FoxJG.Rolesofinfection,inflammation,andtheimmunesystemincholesterolgallstoneformation.Gastroenterology.2009Feb;136(2):425-40[13]WangSN,YehYT,YuML,etal.Hyperleptinaemiaandhypoadiponectinaemiaareassociatedwithgallstonedisease.EurJClinInvest.2006Mar,36(3):176-80[14]LeiZM,YeMX,FuWG,etal.Levelsofserumleptin,cholecystokinin,plasmalipidandlipoproteindifferbetweenpatientswithgallstoneor/andthosewithhepatolithiasis.HepatobiliaryPancreatDisInt.2008Feb,7(1):65-9[15]燕濤,吳浩榮,谷春偉.保膽取石術(shù)后結(jié)石復發(fā)危險因素病例對照研究.安徽醫(yī)藥,2011,15(5):583-584三、項目研究開發(fā)內(nèi)容和技術(shù)關鍵及主要創(chuàng)新點(一)研究開發(fā)內(nèi)容1、本項目根據(jù)納入標準和排除標準選擇膽囊結(jié)石患者120例，以入院順序的奇、偶數(shù)分為保膽取石組（保膽組）與膽囊切除組（切膽組），每組各60例，30例健康人群作對照。

2、于入院次日清晨7時、術(shù)后第3天、1月、3月和6月空腹平臥靜脈抽血采集標本，用AbbottAEROSET全自動生化分析儀檢測血脂水平，用酶聯(lián)免疫法檢測血清leptin，CCK。

3、通過監(jiān)測保膽取石患者術(shù)后早期及近期血清leptin、CCK、血脂水平，并與術(shù)前比較，從上述3方面成石因素來預期保膽后結(jié)石復發(fā)的可能性，試圖在成石水平上尋找結(jié)石復發(fā)的理論依據(jù)；分析比較保膽取石組與膽囊切除組術(shù)后上述三項指標的變化情況，在對成石影響、保留膽囊功能及脂質(zhì)代謝層面，比較兩種術(shù)式優(yōu)劣性。

(二)技術(shù)關鍵1．病例的選擇：

在嚴格符合納入標準和排除標準的前提下，采取隨機、對照的科研方法，并充分告知。

要求患者有高度的依從性，在指定時間和指定要求下空腹采血。

2．準確檢測指標：

強調(diào)標本采集前各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量管理，標本采集后于-70℃冰箱內(nèi)保存，用AbbottAEROSET全自動生化分析儀檢測血脂指標。

血清leptin、CCK的檢測應用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定法）技術(shù)，以保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。

3、手術(shù)的正確實施：

保膽組采用內(nèi)鏡微創(chuàng)保膽取石術(shù)，術(shù)中用取石網(wǎng)徹底取凈結(jié)石，確保膽囊開口通暢，必要時行術(shù)中B超或術(shù)中膽道造影，膽囊切口用可吸收縫線縫合。

膽囊切除術(shù)采用腹腔鏡下膽囊切除術(shù)。

(三)主要創(chuàng)新點1、本項目率先對保膽取石與膽囊切除患者術(shù)后的相關成石因素和膽囊功能進行了比較研究。

2、探討術(shù)后血leptin、CCK、血脂等實驗室指標與保膽取石術(shù)后結(jié)石復發(fā)的相關性。

四、項目預期目標（主要技術(shù)經(jīng)濟指標、應用或產(chǎn)業(yè)化前景）通過保膽取石患者手術(shù)前后血清leptin、CCK、血脂指標變化的檢測，預期保膽后結(jié)石復發(fā)的危險因素，為保膽手術(shù)在臨床的開展提供理論依據(jù)；并根據(jù)術(shù)后三者的變化，指導臨床預防、減少術(shù)后結(jié)石復發(fā)。

通過分析比較保膽取石組與膽囊切除組術(shù)后上述三項指標的變化，在對成石因素的影響、保留膽囊功能及脂質(zhì)代謝層面，比較兩種術(shù)式優(yōu)劣性。

通過監(jiān)測膽囊切除術(shù)前后血清leptin、CCK、血脂指標變化，明確膽囊切除術(shù)對上述指標的影響。

本項目完成后，預期在國家核心期刊以上雜志發(fā)表論文2篇。

五、項目實施方案、技術(shù)路線、組織方式與課題分解（一）實施方案1、病例選擇選擇膽囊結(jié)石患者120例。

納入標準：

：

①膽囊壁厚3mm；②膽囊形態(tài)、功能良好；③膽囊管無結(jié)石梗阻；④膽囊結(jié)石少；⑤近期無急性發(fā)作；⑥保膽組病人有明確的保膽要求，并且完全理解結(jié)石復發(fā)的可能性。

排除標準：

①膽囊壁厚＞3mm；②膽囊功能不良或膽囊萎縮；③膽囊管梗阻；④膽囊充滿型結(jié)石；⑤急性膽囊炎或伴發(fā)急性胰腺炎；⑥對保膽要求不高者；⑦瓷化膽囊或可疑膽囊惡性腫瘤。

健康對照組：

體檢中心體檢的人群，并知情同意。

2、分組與治療根據(jù)上述標準選擇膽囊結(jié)石患者120例，以入院順序的奇、偶數(shù)分為保膽組與切膽組，每組各60例，30例健康人群作對照。

保膽組采用內(nèi)鏡微創(chuàng)保膽取石術(shù)：

要點是在膽囊底部切開膽囊，吸凈膽汁后放人纖維膽道鏡仔細觀察。

確認結(jié)石后，用取石網(wǎng)將結(jié)石取出，務必完全、徹底取凈結(jié)石。

仔細觀察膽囊開口處有膽汁流人，必要時行術(shù)中B超檢查膽囊結(jié)石是否取凈。

用可吸收縫線將膽囊切口全層連續(xù)縫合一層，漿肌層包埋一層。

膽囊切除術(shù)采用腹腔鏡下膽囊切除術(shù)：

三孔法或四孔法腹腔鏡下膽囊切除術(shù)。

3、觀察指標符合條件的患者于入院次日清晨7時、術(shù)后第3天、1月、3月和6月空腹平臥靜脈采血，正常對照組血標本取自體檢中心。

均禁食12小時，取靜脈血4ml，注射入真空采血管，待凝固血清析出后3500rpm離心5min取血清。

一部分儲存于4℃冰箱中備測血脂（TCH,TG,LDL,HDL）濃度；另一部分儲存于80℃低溫冰箱內(nèi)備測leptin，CCK濃度。

使用AbbottAEROSET全自動生化分析儀進行血脂檢測，總膽固醇測定（CHOD-PAP法）為中華醫(yī)學會檢驗學會推薦的總膽固醇測定常規(guī)方法；甘油三酯（TG）采用酶法（GPO-PAP法；血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）采用化學修飾酶法法測定；血清低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）采用選擇性可溶化法測定；上述試劑除甘油三酯（TG）是東甌公司產(chǎn)品外其它均為日本協(xié)和企業(yè)產(chǎn)品。

采用酶聯(lián)免疫法檢測血清leptin、CCK，操作方法：

①加樣：

加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時然后洗滌。

(同時做空白孔，標準濃度孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。

②加酶標抗體：

于各反應孔中，加入酶標抗體0.1ml。

37℃孵育0.5～1小時，洗滌。

③加底物液顯色：

于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。

④終止反應：

于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

⑤結(jié)果判定：

在酶標檢測儀上，于450nm處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，根據(jù)標準曲線定量。

4、隨訪出院后電話隨訪，半年一次，直至項目結(jié)束；不能電話隨訪者采用書信隨訪。

隨訪內(nèi)容：

臨床癥狀（腹痛、消化不良、腹脹、腹瀉等）；B超檢查（膽囊超聲表現(xiàn)，有無結(jié)石復發(fā)）；有無其它病變?nèi)缃Y(jié)腸癌、膽囊癌變等。

5、統(tǒng)計分析使用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理。

檢驗指標的結(jié)果用均數(shù)及標準差表示。

T檢驗分析兩組間的差異，P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。

（二）技術(shù)路線納入標準排除標準（三）組織方式與課題分解項目以課題組的形式組織實施，課題的管理將在有關部門的領導下實行課題負責人負責制，課題負責人負責課題的組織與實施、技術(shù)路線指導及課題的全面工作，把握課題研究方向、進度和質(zhì)量，指導和協(xié)調(diào)課題組成員完成所承擔的科研課題。

課題實施過程中及時總結(jié)，發(fā)現(xiàn)的問題，及時對課題實施做出相應調(diào)整，根據(jù)納入指標和排除指標選擇膽囊結(jié)石患者120例保膽組60例切膽組60例對照組30例于入院次日晨、術(shù)后第3天、1月、3月和6月檢測leptin、CCK、血脂等指標，對照組于入院次日晨檢測上述指標一次。

分析：

（1）保膽取石患者手術(shù)前后血清leptin、CCK、血脂指標變化，預期保膽后結(jié)石復發(fā)的可能性，指導臨床如何預防、減少術(shù)后結(jié)石復發(fā)。

（2）監(jiān)測膽囊切除術(shù)前后血清leptin、CCK、血脂指標變化，明確膽囊切除術(shù)對上述指標的影響。

（3）分析比較保膽取石組與膽囊切除組術(shù)后上述三項指標的變化，在對成石因素的影響、保留膽囊功能及脂質(zhì)代謝層面，比較兩種術(shù)式優(yōu)劣性。

確保課題順利實施。

本研究課題分為五個部分：

1、病例收集：

收集2012年07月-2015年01月間根據(jù)納入指標和排除指標選擇膽囊結(jié)石患者120例。

健康對照組30例從體檢中心的體檢人群中產(chǎn)生。

本課題組第二、第三責任人負責本部分工作。

2、手術(shù)操作：

將符合選擇標準的膽囊結(jié)石患者120例，以入院順序的奇、偶數(shù)分為保膽組與切膽組，每組各60例。

保膽組采用內(nèi)鏡微創(chuàng)保膽取石術(shù)，切膽組采用腹腔鏡下膽囊切除術(shù)。

本課題組第一、第二、第五責任人負責臨本部分工作。

3、標本收集及檢測：

于入院次日晨、術(shù)后第3天、1月、3月和6月空腹平臥靜脈采血，正常對照組血標本取自體檢中心，使用AbbottAEROSET全自動生化分析儀進行血脂檢測，使用酶聯(lián)免疫法檢測血清leptin、CCK。

本課題組第四、第六責任人負責臨本部分工作。

4、隨訪：

第七責任人負責隨訪工作。

5、資料總結(jié)及統(tǒng)計分析：

對資料進行總結(jié)，使用SPSS10.0統(tǒng)計軟件對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理。

本課題組第一、第三責任人負責資料總結(jié)及統(tǒng)計工作。

六、計劃進度安排全部研究計劃在3年內(nèi)完成(2012年06月-2015年06月)。

（1）2012.06-2013.06①篩選病例。

②對符合選擇標準的病例進行手術(shù)治療。

③對上述病例進行術(shù)前、術(shù)后血脂、leptin、CCK檢測。

④術(shù)后隨訪。

（2）2013.07-2014.06：

①繼續(xù)補充病例數(shù)，完成研究對象的手術(shù)治療。

②繼續(xù)完成相關病例的指標檢測。

③整理相關數(shù)據(jù)。

④術(shù)后隨訪。

（3）2014.07-2015.06：

①繼續(xù)補充必要的病例數(shù)，完成相關手術(shù)及指標的檢測。

②分析資料，統(tǒng)計數(shù)據(jù)，撰寫論文。

③項目驗收。

七、現(xiàn)有工作基礎和條件（一）工作基礎1、本項目組從2007年5月至今，對符合保膽取石適應癥的膽囊結(jié)石患者已成功開展保膽取石96例，取得滿意療效，并在中華消化內(nèi)鏡雜志上發(fā)表題為《個體化觀念在保膽取石手術(shù)中的應用》的論文。

于2010開展了市科技項目《腹腔鏡聯(lián)合膽道鏡在腹腔內(nèi)、外個體化保膽取石術(shù)中臨床應用》，已結(jié)題。

2、肝膽外科是省市共建扶植重點學科，參與本項目的醫(yī)生已熟練掌握了膽囊切除及微創(chuàng)保膽技術(shù)。

申請單位檢驗中心擁有各類先進檢測設備，生化室擁有多種生化分析儀，