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第2章第2節(jié)

動(dòng)物細(xì)胞工程

-動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

動(dòng)物細(xì)胞工程的發(fā)展歷程1907年,哈里森用一滴淋巴液成功培養(yǎng)了蝌蚪的神經(jīng)元,首創(chuàng)了動(dòng)物組織體外培養(yǎng)法。1951年,張明覺等發(fā)現(xiàn)了哺乳動(dòng)物精子獲能現(xiàn)象。1959年,試管家兔誕生。之后,多種試管動(dòng)物相繼出生。1958年,格登用非洲爪蟾進(jìn)行體細(xì)胞核實(shí)驗(yàn),同期,我國科學(xué)家童第周開展了魚類細(xì)胞核移植工作。1975年,米爾斯坦和科勒等創(chuàng)立了單克隆抗體技術(shù)。1978年,小鼠的桑椹胚被成功分割。次年,科學(xué)家分割綿羊胚胎獲得了同卵羔羊1981年,埃文斯等成功分離和培養(yǎng)了小鼠的胚胎干細(xì)胞2006年,山中伸彌等獲得了誘導(dǎo)多能干細(xì)胞。我國科學(xué)家用這種細(xì)胞培育了小鼠。2014年,世界上第一個(gè)用單細(xì)胞基因組測(cè)序進(jìn)行遺傳病篩查的試管嬰兒在我國誕生。2017年,我國科學(xué)家首次培育了體細(xì)胞克隆猴。P33動(dòng)物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞核移植是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)從社會(huì)中來在治療大面積燒傷時(shí),通常采用的方法是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植。但對(duì)這樣的病人來說,自體健康皮膚非常有限,使用他人皮膚來源又不足,而且會(huì)產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)。那么,怎樣才能獲得大量的自體健康皮膚?能不能用自體皮膚的單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)出可供移植的皮膚?通過細(xì)胞培養(yǎng)構(gòu)建人造皮膚P43概念:從動(dòng)物體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個(gè)細(xì)胞,然后在適宜的培養(yǎng)條件下,讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的技術(shù)。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理:細(xì)胞增殖培育的終點(diǎn):細(xì)胞目錄Contents1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件2動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程3干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)其他條件<<糖類氨基酸無機(jī)鹽維生素?zé)o菌、無毒的環(huán)境適宜的溫度、pH和滲透壓適宜的氣體環(huán)境1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件營(yíng)養(yǎng)葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清等合成培養(yǎng)基(將細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)按種類和所需量嚴(yán)格配制而成的培養(yǎng)基)一般使用液體培養(yǎng)基(培養(yǎng)液)含有多種未知的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子及其他活性物質(zhì)天然成分P441動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件無菌、無毒的環(huán)境無菌①對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行滅菌處理②在無菌環(huán)境下進(jìn)行操作定期更換培養(yǎng)液,以便清除代謝物無毒超凈工作臺(tái)1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件適宜的溫度、pH和滲透壓哺乳動(dòng)物多以(36.5±0.5)℃溫度:pH:多數(shù)細(xì)胞生存的適宜pH在7.2-7.4滲透壓:需要考慮的一個(gè)重要環(huán)境參數(shù)氣體環(huán)境O2:細(xì)胞代謝所必需的CO2:維持培養(yǎng)液的pH(95%空氣和5%CO2

)CO2培養(yǎng)箱微生物培養(yǎng)中的作用不同(為自養(yǎng)型微生物提供碳源)2動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程動(dòng)物組織塊用機(jī)械法或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞制成細(xì)胞懸液(用培養(yǎng)液)原代培養(yǎng)問題細(xì)胞分裂受阻(為什么?)懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞密度過大、有害代謝物積累和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏等接觸抑制解決傳代培養(yǎng)分瓶2動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程細(xì)胞貼壁:在培養(yǎng)瓶懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上。培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿壁要求:表面光滑、無毒、易于貼附。培養(yǎng)皿培養(yǎng)瓶2動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程

瓶壁上的細(xì)胞層數(shù)是:一層(或單層)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí),細(xì)胞通常會(huì)停止分裂增殖。接觸抑制分瓶培養(yǎng)解除方法癌變細(xì)胞沒有接觸抑制現(xiàn)象,可以在培養(yǎng)瓶中形成多層細(xì)胞2動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程將分瓶之前的細(xì)胞培養(yǎng),即動(dòng)物組織經(jīng)處理后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。將分瓶后的細(xì)胞培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng):原代培養(yǎng):在進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí),懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞直接用離心法收集;貼壁細(xì)胞需要重新用胰蛋白酶等處理,使之分散成單個(gè)細(xì)胞,然后再用離心法收集。之后,將收集的細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,分瓶培養(yǎng)。2動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程【思考1】幼齡動(dòng)物的細(xì)胞和老齡動(dòng)物的細(xì)胞,哪個(gè)更易于培養(yǎng)?為什么?幼齡。因?yàn)槠浞只潭鹊?,分裂能力?qiáng)。2動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程【思考2】用胰蛋白酶、膠原蛋白酶處理組織塊,使組織塊分散成單個(gè)細(xì)胞的目的是什么?①使細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸,一方面保證細(xì)胞所需的O2和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的供應(yīng),另一方面保證細(xì)胞內(nèi)代謝廢物的及時(shí)排出;②使得在細(xì)胞水平操作的其它技術(shù)得以實(shí)現(xiàn)。2動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程【思考3】用胰蛋白酶分散細(xì)胞,由此可說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是什么成分?【思考4】胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎?那將動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞時(shí)要注意什么問題呢?主要是蛋白質(zhì)(膠原蛋白等)。能,應(yīng)注意時(shí)間的控制。因?yàn)橐鹊鞍酌覆粌H能分解細(xì)胞間的蛋白質(zhì),長(zhǎng)時(shí)間還會(huì)分解膜蛋白,對(duì)細(xì)胞造成損傷。【思考5】能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎?為什么?不能,因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的PH為7.2—7.4,此環(huán)境下胃蛋白酶(2.0)沒有活性,而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。2動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程【思考6】整個(gè)過程中用胰蛋白酶處理幾次?作用分別是?第一次處理的目的是使組織細(xì)胞分散開;第二次處理的目的是使細(xì)胞從瓶壁上脫離下來,便于分瓶后繼續(xù)培養(yǎng)。原代培養(yǎng)視頻演示傳代培養(yǎng)視頻演示1.幼齡動(dòng)物的細(xì)胞與老齡動(dòng)物的細(xì)胞比較,分化程度低的細(xì)胞與分化程度高的細(xì)胞比較,哪些細(xì)胞更易于培養(yǎng)?為什么?細(xì)胞的增殖能力與供體的年齡有關(guān),幼齡動(dòng)物的細(xì)胞增殖能力強(qiáng),有絲分裂旺盛,老齡動(dòng)物的細(xì)胞則相反。所以,一般來說,幼齡動(dòng)物的細(xì)胞比老齡動(dòng)物的細(xì)胞易于培養(yǎng)。同樣,分化程度越低的細(xì)胞,増殖能力越強(qiáng),所以更容易培養(yǎng)。思考?討論思考?討論2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)有什么相同和不同之處?培養(yǎng)結(jié)果動(dòng)物血清植物激素常用液體培養(yǎng)基常用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞的全能性原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目新的細(xì)胞群,不形成個(gè)體完整植株培養(yǎng)基特有成分細(xì)胞增殖P453干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用【任務(wù)1】閱讀教材46頁“干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用”的內(nèi)容,思考、回答下列問題:什么是干細(xì)胞?它有哪些類型?這些類型各有怎樣的特點(diǎn)和哪些方面的應(yīng)用?P46干細(xì)胞概念大多數(shù)生物學(xué)家和醫(yī)學(xué)家認(rèn)為干細(xì)胞是來自于胚胎、胎兒或成人體內(nèi)具有在一定條件下無限制自我更新與增殖分化能力的一類細(xì)胞。存在于早期胚胎、骨髓和臍帶血。干細(xì)胞的種類胚胎干細(xì)胞成體干細(xì)胞存在于早期胚胎中,具有分化為成年動(dòng)物體內(nèi)的任何一種類型的細(xì)胞,并進(jìn)一步形成機(jī)體的所有組織和器官甚至個(gè)體的潛能。是成體組織或器官內(nèi)的干細(xì)胞,具有組織特異性,只能分化成特定的細(xì)胞或組織,不具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力。①干細(xì)胞的類型和特點(diǎn)胚胎干細(xì)胞簡(jiǎn)稱ES細(xì)胞心肌細(xì)胞神經(jīng)細(xì)胞造血干細(xì)胞分化分化分化體外培養(yǎng)①干細(xì)胞的類型和特點(diǎn)成體干細(xì)胞造血干細(xì)胞血細(xì)胞神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)干細(xì)胞精原干細(xì)胞神經(jīng)細(xì)胞精原細(xì)胞骨髓、外周血和臍帶血中睪丸中分化分化分化①干細(xì)胞的類型和特點(diǎn)②干細(xì)胞的應(yīng)用干細(xì)胞有著自我更新能力及分化的潛能,與組織、器官的發(fā)育、再生和修復(fù)等密切相關(guān),因而在醫(yī)學(xué)上有著廣泛的應(yīng)用正常干細(xì)胞患者體內(nèi)受損的器官或組織治愈疾病修復(fù)或替換移植②干細(xì)胞的應(yīng)用正常造血干細(xì)胞患者體內(nèi)受損的血細(xì)胞白血病修復(fù)或替換移植造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)功能障礙疾病正常神經(jīng)干細(xì)胞患者體內(nèi)受損的神經(jīng)組織修復(fù)或替換移植治療治療神經(jīng)組織損傷和神經(jīng)退行性疾?。ㄅ两鹕?阿爾茨海默)3干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用【任務(wù)2】胚胎干細(xì)胞必須從胚胎中獲取,這涉及倫理問題,因而限制了它在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用,有什么更好的辦法呢?3干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用【資料】2006年,科學(xué)家通過體外誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞,獲得了類似胚胎干細(xì)胞的一種細(xì)胞,將它稱為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(簡(jiǎn)稱iPS細(xì)胞),并用iPS細(xì)胞治療了小鼠的鐮狀細(xì)胞貧血。①iPS細(xì)胞的誘導(dǎo)及其流程病人各種類型的細(xì)胞導(dǎo)入特定基因?qū)胩囟ǖ鞍仔》肿踊衔锍衫w維細(xì)胞T細(xì)胞B細(xì)胞iPS細(xì)胞分化取出移植②iPS細(xì)胞應(yīng)用的優(yōu)點(diǎn)(1)誘導(dǎo)過程無需破壞胚胎(2)iPS細(xì)胞可以來源于病人自身的體細(xì)胞,將它移植回病人體內(nèi)后,理論上可以避免免疫排斥。所以,科學(xué)家普遍認(rèn)為iPS細(xì)胞的應(yīng)用前景優(yōu)于胚胎干細(xì)胞。取成纖維細(xì)胞等轉(zhuǎn)入相關(guān)因子細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化iPS細(xì)胞分化移植一、概念檢測(cè)1.判斷下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的表述是否正確。(1)培養(yǎng)環(huán)境中需要O2,不需要CO2。()(2)細(xì)胞要經(jīng)過脫分化形成愈傷組織。()(3)培養(yǎng)液中通常含有糖類、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清。()(4)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞需定期用胰蛋白酶處理,分瓶后才能繼續(xù)增殖。()練習(xí)與應(yīng)用××√×P472.干細(xì)胞有著廣泛的應(yīng)用前景。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A.干細(xì)胞是從胚胎中分離提取的細(xì)胞B.造血干細(xì)胞可以分化為各種血細(xì)胞C.不同類型的干細(xì)胞,它們的分化潛能是有差別的D.由iPS細(xì)胞產(chǎn)生的特定細(xì)胞,可以在新藥的測(cè)試中發(fā)揮重要作用練習(xí)與應(yīng)用A二、拓展應(yīng)用現(xiàn)在關(guān)于iPS細(xì)胞的研究正在不斷深入。請(qǐng)你從以下兩個(gè)方面來查閱資料進(jìn)行思考。(1)由于誘導(dǎo)iPS細(xì)胞、促使其分化都需要時(shí)間,因此用某人特異的iPS細(xì)胞進(jìn)行醫(yī)療只限于時(shí)間比較充裕的情形。從實(shí)際事故、疾病發(fā)生的不可預(yù)測(cè)性方面考慮,如果要將這些細(xì)胞用于緊急情況,應(yīng)該提前采取什么措施?像建立骨髓庫一樣,有研究團(tuán)隊(duì)正在嘗試建立HA(HumanLeukocyteAntigen,人類白細(xì)胞抗原)多態(tài)性豐富的iPS細(xì)胞庫,可以為需要的人找到HLA匹配度較高的iPS細(xì)胞,這樣不僅可以節(jié)省時(shí)間、成本,還能減輕異體干細(xì)胞移植后發(fā)生的免疫排斥反應(yīng)。二、拓展應(yīng)用(2)如果誘導(dǎo)iPS細(xì)胞定向分化為生殖細(xì)胞的技術(shù)發(fā)展成熟,該技術(shù)可能會(huì)有哪些應(yīng)用?又可能帶來哪些問題?該技術(shù)可能被用于治療不孕癥;獲得足夠量的生殖細(xì)胞來進(jìn)行瀕危物種的克隆研究;獲得生殖細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作,再經(jīng)過受精、胚胎發(fā)育等過程來獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。該技術(shù)可能帶來一系列的倫理問題。例如,如果用同一個(gè)人的iPS細(xì)胞分別誘導(dǎo)形成精子和卵子,兩者受精可能培育出“單親”嬰兒;有的人還可能有目的地選擇iPS細(xì)胞,從而“設(shè)計(jì)”嬰兒。動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)概念:是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。011.動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)

1.1原理:細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性1.2融合細(xì)胞的特點(diǎn):具有兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息,通過動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng),雜交細(xì)胞表現(xiàn)出親本的特點(diǎn)。1.3誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的常用方法:化學(xué)法:聚乙二醇(PEG)融合法物理法:電融合法生物法:滅活的病毒誘導(dǎo)法P481.動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)

滅活的病毒誘導(dǎo)法原理:病毒顆粒滅活的病毒表面的糖蛋白和一些酶與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用細(xì)胞膜融合細(xì)胞核融合形成雜交細(xì)胞在病毒的作用下細(xì)胞膜打開相關(guān)信息能不能用不滅活的病毒呢?融合形成的雜交細(xì)胞最終有幾個(gè)細(xì)胞核?1.動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)

19世紀(jì)30年代,科學(xué)家曾在患肺結(jié)核、天花和麻疹等疾病的病人的病理組織中觀察到多核細(xì)胞。如何解釋這一現(xiàn)象?病人體內(nèi)的病毒等誘導(dǎo)多個(gè)體細(xì)胞融合形成了多核細(xì)胞。1.動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)

1.4動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的優(yōu)點(diǎn):突破了有性雜交的局限,使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。1.5動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的應(yīng)用:研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段,特別是利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)發(fā)展起來的雜交瘤細(xì)胞技術(shù),為制造單克隆抗體開辟了新途徑。P4802單克隆抗體及其應(yīng)用2單克隆抗體的前世今生產(chǎn)量低、純度低,而且特異性差B淋巴細(xì)胞不能無限增殖?血清分離每一個(gè)B細(xì)胞只分泌一種特異性抗體P49抗體種類超過百萬種2單克隆抗體及其應(yīng)用

把一種B淋巴細(xì)胞與能在體外大量增殖的骨髓瘤細(xì)胞融合,所得到的融合細(xì)胞就可能大量增殖,產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體。米爾斯坦【英國】科勒【德國】1.你從視頻中了解到單克隆抗體具有哪些特點(diǎn)?2.請(qǐng)你嘗試解釋一下“單克隆抗體”一詞的含義。特異性強(qiáng)、純度高由單一細(xì)胞產(chǎn)生的只能識(shí)別一種抗原表位的特異性抗體。2單克隆抗體及其應(yīng)用2.1單克隆抗體的過程:注射特定的抗原多種B細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞將骨髓瘤細(xì)胞和B細(xì)胞融合多種雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞(既可以大量增殖又能產(chǎn)生抗體)篩選抗體檢測(cè)呈陽性的雜交瘤細(xì)胞(分泌的抗體能和特定的抗原結(jié)合)注射到小鼠腹腔內(nèi)體外培養(yǎng)單克隆抗體誘導(dǎo)融合篩選P492單克隆抗體及其應(yīng)用【兩次篩選的比較】項(xiàng)目第一次篩選第二次篩選(需要多次篩選)篩選原因篩選方法篩選結(jié)果誘導(dǎo)融合后得到多種雜交細(xì)胞,還有未融合的細(xì)胞等。用特定的選擇培養(yǎng)基篩選:未融合的親本和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡,只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長(zhǎng)。得到雜交瘤細(xì)胞因?yàn)樾∈笤谏钪羞€受到其他抗原的刺激,所以經(jīng)選擇培養(yǎng)獲得的雜交瘤細(xì)胞中有能產(chǎn)生其他抗體的細(xì)胞用96孔板培養(yǎng),在每個(gè)孔中盡量接種一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè),經(jīng)多次篩選得到足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞得到能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞創(chuàng)新設(shè)計(jì)P372單克隆抗體及其應(yīng)用【培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的方法比較】項(xiàng)目腹腔培養(yǎng)體外培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)易于控制培養(yǎng)條件(如無需提供無菌環(huán)境等),操作簡(jiǎn)單,成本較低規(guī)模小,產(chǎn)量少可大規(guī)模培養(yǎng),大量生產(chǎn)需要人為控制培養(yǎng)條件,成本相對(duì)較高創(chuàng)新設(shè)計(jì)P361.ADC的抗體和藥物各具有什么作用?P50思考討論閱讀課本50頁“單克隆抗體的應(yīng)用”資料1和資料2,回答以下問題:抗體主要發(fā)揮靶向運(yùn)輸作用,即通過特異性結(jié)合靶細(xì)胞表面的抗原,將連接的藥物輸送到靶細(xì)胞;藥物發(fā)揮治療效應(yīng),如殺傷靶細(xì)胞。2.除了細(xì)胞毒素,還有哪些物質(zhì)理論上可以作為ADC偶聯(lián)的藥物?可偶聯(lián)抗腫瘤藥物,如美登素。思考討論3.單克隆抗體診斷試劑盒和ADC在臨床應(yīng)用上各具有什么優(yōu)勢(shì)?單克隆抗體診斷試劑盒中的單克隆抗體只與特定的抗原反應(yīng),因此檢測(cè)的特異性和靈敏度大大提高;ADC能夠協(xié)同發(fā)揮抗體特異性識(shí)別的靶向作用和細(xì)胞毒素對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用,因此它在臨床上具有靶點(diǎn)清楚、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)。2.2單克隆抗體的應(yīng)用:(1)作為診斷試劑:(2)用于運(yùn)載藥物(3)用于治療疾病利用同位素或熒光標(biāo)記的單克隆抗體在特定組織中成像的技術(shù),可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病。P49一、概念檢測(cè)1.下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交比較的敘述,錯(cuò)誤的是()A.它們的原理都涉及細(xì)胞膜的流動(dòng)性B.都可以用電融合法或PEG融合法誘導(dǎo)融合C.融合前都需用纖維素酶或果膠酶處理細(xì)胞D.前者主要為了獲得細(xì)胞產(chǎn)品,后者主要為了獲得雜種植株練習(xí)與應(yīng)用C2.科學(xué)家以SARS病毒的核衣殼蛋白為抗原,制備出了單克隆抗體。下列相關(guān)敘述正確的是()A.利用該單克隆抗體可以診斷是否感染SARS病毒B.體外培養(yǎng)單個(gè)B淋巴細(xì)胞可以獲得針對(duì)SARS病毒的單克隆抗體C.將等量B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞混合,經(jīng)誘導(dǎo)后融合的細(xì)胞即為雜交瘤細(xì)胞D.將純化的核衣殼蛋白反復(fù)注射到小鼠體內(nèi),從小鼠血清中分離出的抗體為單克隆抗體練習(xí)與應(yīng)用A練習(xí)與應(yīng)用二、拓展應(yīng)用假如你掌握了動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù),你想用這種技術(shù)來解決哪些問題?解決這些問題的大致思路是怎樣的?這樣做會(huì)有什么風(fēng)險(xiǎn)?請(qǐng)查閱相關(guān)資料,完善自己的思路,并形成文字報(bào)告,與同學(xué)交流。可以利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)培育多倍體胚胎,研究其發(fā)育機(jī)制,甚至可能培育出新的物種。但是,日前相關(guān)技術(shù)還不成熟,存在融合率低、胚胎死亡率高等問題,并且還可能帶來些倫理方面的問題。從社會(huì)中來兩只克隆猴在中國誕生從社會(huì)中來2017年我國科學(xué)家培育世界上首例體細(xì)胞克隆猴。1997年美國科學(xué)家從胚胎細(xì)胞“克隆了”兩只猴子。動(dòng)物細(xì)胞核移植1.克隆猴用到了什么技術(shù)?動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性2.為什么用供體猴的一個(gè)細(xì)胞核進(jìn)行移植就可以培育出與它幾乎一模一樣的克隆猴?動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高,表現(xiàn)全能性十分困難3.胚胎細(xì)胞克隆猴與體細(xì)胞克隆猴有什么不同?為什么體細(xì)胞克隆猴的誕生能夠轟動(dòng)世界?P524.非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物體細(xì)胞核移植非常困難的兩個(gè)原因?【小結(jié)】哺乳動(dòng)物核移植的類型及特點(diǎn)非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物體細(xì)胞核移植非常困難的兩個(gè)原因種類難易程度原因胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植較容易較難分化程度低,全能性易表現(xiàn)分化程度高,全能性難表現(xiàn)供體的細(xì)胞核在去核卵母細(xì)胞中不能完全恢復(fù)其分化前的功能狀態(tài),這導(dǎo)致了胚胎發(fā)育率低;非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物胚胎進(jìn)行操作的技術(shù)尚不完善?!拘〗Y(jié)】用動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)得到的動(dòng)物稱為克隆動(dòng)物,是一種無性生殖。克隆動(dòng)物供體:受體:結(jié)果:動(dòng)物細(xì)胞核移植的概念理解動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核去掉核的卵母細(xì)胞形成重新組合的細(xì)胞并發(fā)育成新胚胎,繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。目錄Contents1動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)2體細(xì)胞核移植的應(yīng)用前景及存在的問題01動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)是將動(dòng)物一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞中,使這個(gè)重新組合的細(xì)胞發(fā)育成新胚胎,繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體的技術(shù)概念供體:受體:結(jié)果:動(dòng)物細(xì)胞核移植的概念理解動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核去掉核的卵母細(xì)胞形成重新組合的細(xì)胞并發(fā)育成新胚胎,繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)1P52胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植類型原理細(xì)胞核的全能性動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)1動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)1【任務(wù)1】請(qǐng)結(jié)合教材用文字構(gòu)建克隆高產(chǎn)奶牛的流程P53動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)-流程1從屠宰場(chǎng)收集牛卵巢,在體外培養(yǎng)到MⅡ期從供體高產(chǎn)奶牛身體某一部位取體細(xì)胞,進(jìn)行培養(yǎng)通過顯微操作去核將供體細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞通過電融合法使兩細(xì)胞融合,供體核進(jìn)入卵母細(xì)胞形成重構(gòu)胚將胚胎移入受體(代孕)母牛體內(nèi)生出犢牛(如電刺激、Ca2+載體、乙醇、蛋白酶合成抑制劑等)用物理或化學(xué)方法激活重構(gòu)胚動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)1【分析與探討】1.體細(xì)胞和卵母細(xì)胞從哪里來?2.卵母細(xì)胞需要在體外培養(yǎng)到什么時(shí)期?3.在將供體細(xì)胞的細(xì)胞核移入卵母細(xì)胞前,需要對(duì)卵母細(xì)胞進(jìn)行什么操作?為什么?卵母細(xì)胞從屠宰場(chǎng)收集牛卵巢體細(xì)胞來自于供體高產(chǎn)奶牛身體的某部位(如耳)上取MⅡ期去核保證克隆動(dòng)物的核基因全部來自供體細(xì)胞動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)1【分析與探討】4.實(shí)際在克隆高產(chǎn)奶牛時(shí),科學(xué)家并沒有從供體細(xì)胞中取出細(xì)胞核,而是直接將供體細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞,你知道這是為什么嗎?這種方法操作簡(jiǎn)便,對(duì)卵母細(xì)胞損傷較小,伴隨著兩細(xì)胞融合,體現(xiàn)出細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。5.融合后的細(xì)胞可以直接發(fā)育成胚胎,繼而發(fā)育成個(gè)體么嗎?不可以,還需要利用胚胎工程中的胚胎移植等技術(shù)。動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)16.克隆出的小牛是對(duì)體細(xì)胞供體奶牛進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎?動(dòng)物的發(fā)育及一些行為、習(xí)性的形成與所處環(huán)境有很大關(guān)系,克隆動(dòng)物所生活的環(huán)境與核供體動(dòng)物生活的環(huán)境不會(huì)完全相同【分析與探討】克隆動(dòng)物遺傳物質(zhì)細(xì)胞核的DNA來自于供體動(dòng)物的細(xì)胞核線粒體中的DNA供體細(xì)胞和受體卵母細(xì)胞生活環(huán)境:P5402體細(xì)胞核移植的應(yīng)用前景及存在的

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