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DB13河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I本標準主要起草人：袁萬哲、孫繼國、宋勤葉、馬增軍、金東航、李麗敏、張磊、李1豬流行性腹瀉病毒RT-PCR檢測方法DEPC：焦碳酸二乙酯（diethypyrocarbondNTP：脫氧核苷酸三磷酸（deoxy-ribonucleosidetrPCR：聚合酶鏈式反應(yīng)（polymerasechainreacRNA：核糖核酸（ribonucleicRT-PCR：反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(yīng)（reverse-transcriptionpolymerasechainre24.102×TaqMasterMix（Dye）。以滅活的豬流行性腹瀉病毒Vero細胞培養(yǎng)將棉拭子深入肛門轉(zhuǎn)一圈沾取糞便；將采集后的棉拭子放入盛有1.0mLPBS（見附錄A中A.5）的用繩子將胃或腸兩端扎緊，用剪刀采集胃腸等，裝入一次性滅菌容器，3樣品采集后放入密閉的塑料帶內(nèi)（一個采集點的樣品放一個塑料帶內(nèi)），于保r/min離心15min，取上清液轉(zhuǎn)入無菌的1.5mL離心管中將所采集的胃或腸及內(nèi)容物至于潔凈，滅菌并烘干的搪瓷盤中，抽取內(nèi)容物或者取刮取胃腸按照質(zhì)量體積比（1:1）加入樣品保存液進行充分研磨，4℃條件下3000r/min離心15min。取上清轉(zhuǎn)42℃水浴1h，即得到cDNA溶液，直接用于下面的P4陽性對照的擴增產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測，在預(yù)期大小的條帶產(chǎn)物電泳圖見附錄C中C.1則判定為豬流行性腹瀉病毒核酸檢測陽性；如果樣品的RT-PCR產(chǎn)物電泳5核酸染料，均勻鋪板，厚度為3mm～5mm。Na2HPO46引物濃度(μmol/L）
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