DB2305-T 036-2024 大豆灰斑病田間接種及抗性評價(jià)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20DB23052024-08-30發(fā)布2024-09-30實(shí)施雙鴨山市市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB2305/T036—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由雙鴨山市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。本文件起草單位：黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院佳木斯分院、寶清縣小城子鎮(zhèn)鄉(xiāng)村振興發(fā)展服務(wù)中心、蕪湖職業(yè)技術(shù)學(xué)院、黑龍江農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院、寶清縣朝陽鎮(zhèn)鄉(xiāng)村振興發(fā)展服務(wù)中心、寶清縣夾信子鎮(zhèn)鄉(xiāng)村振興發(fā)展服務(wù)中心。本文件主要起草人：楊曉賀、顧鑫、丁俊杰、于昌紅、劉偉、姚亮亮、畢永彬、高雪冬、邱磊、張茂明、王自杰、張家智、王囡囡、孟慶英、朱寶國、申宏波、陶淑敏。1DB2305/T036—2024大豆灰斑病田間接種及抗性評價(jià)技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了在人工接種條件下，大豆灰斑病抗性田間鑒定和評價(jià)的技術(shù)要求。本文件適用于大豆品種對灰斑病抗性的田間鑒定和評價(jià)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB4404.2糧食作物種子第2部分：豆類3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1大豆灰斑病由大豆尾孢菌引起的葉部癥狀為主的大豆病害，又稱蛙眼病。田間癥狀見附錄A。3.2抗病性植物與病原在長期進(jìn)化和相互作用的復(fù)雜過程中，逐漸形成和表現(xiàn)出各種抵御有害病原物的特征和能3.3鑒定圃種植大豆品種進(jìn)行田間接種的試驗(yàn)區(qū)。3.4接種體用于接種以引起病害的病原物或病原物的一部分。2DB2305/T036—20243.5人工接種在人工條件下，將接種體置于植物體適當(dāng)部位并使之發(fā)病的過程。3.6接種懸浮液用于接種的含有定量接種體的液體。3.7抗性評價(jià)根據(jù)采用的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)判定寄主植物對特定病害反應(yīng)程度和抵抗水平的定性描述。4品種種植將供試品種在鑒定圃內(nèi)按編號順序排列，每隔19份鑒定材料播種1行感病對照品種，每個(gè)品種播一小區(qū)，小區(qū)面積2.8m2，人工單粒點(diǎn)播，株距5cm，行距0.65m。種子符合GB4404.2標(biāo)準(zhǔn)。5病原物接種體制備5.1病原菌的來源選擇經(jīng)權(quán)威部門純化和鑒定的大豆尾孢菌病株。5.2培養(yǎng)基的配制5.2.1馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）將去皮馬鈴薯200g切成小塊，加水1000mL煮沸25min，用四層紗布過濾，過濾后加入瓊脂20g，再煮沸后加入葡萄糖20g，加水定容至1000mL，121℃下濕熱滅菌25min。5.2.2高粱粒培養(yǎng)基挑選大小均勻、飽滿的高粱粒，清洗后文火煮40min～60min，用手碾搓，高粱粒軟而不爛（一捏及癟將高粱粒撈出，控水0.5～1d，裝入500mL三角瓶中，裝入量約300mL，121℃濕熱滅菌30min。滅菌完成后，將裝有高粱粒培養(yǎng)基的三角瓶放置于室溫下冷卻備用。放置期間，一天一次搖三角瓶，防止大量高粱粒結(jié)塊。3DB2305/T036—20245.3病原菌的活化將保存?zhèn)溆玫拇蠖刮叉呔鷱?℃冰箱內(nèi)取出，在超級工作臺內(nèi)，挑起菌絲接種于滅菌的PDA平板，25℃培養(yǎng)7d～10d，待菌絲長滿培養(yǎng)皿后，即完成病原菌的活化。5.4病原菌繁殖在超凈工作臺中，將活化后的病原菌菌塊置于裝有高粱粒培養(yǎng)基的三角瓶內(nèi)，25℃培養(yǎng)30d。待菌絲長滿高粱粒后，停止培養(yǎng)。將高粱粒從三角瓶中倒出，洗1～2次，洗去菌絲，將高粱粒放置晾干，于陰干處保存?zhèn)溆谩?接種6.1孢子誘發(fā)用無菌水將保存的高粱粒進(jìn)行浸泡2d，撈出，蓋上無菌紗布，無菌水潤濕，保濕培養(yǎng)5d左右。誘發(fā)產(chǎn)生新鮮孢子，制成孢子懸浮液，用兩層紗布過濾浸泡好的孢子懸浮液，于孢子懸浮液中加入適量3%蔗糖，孢子懸浮液濃度為顯微鏡10×10視野下5～8個(gè)孢子。6.2田間人工接種直接噴霧法將制好的孢子懸浮液，于陰天或傍晚無風(fēng)時(shí)，噴灑于大豆葉片上，以菌液在葉片上形成均勻的細(xì)液滴為宜。共進(jìn)行3次接種，間隔時(shí)間約為3～5d。6.3誘發(fā)條件遇干旱天氣時(shí)，鑒定圃內(nèi)鋪設(shè)微噴管進(jìn)行水分補(bǔ)充，以利于大豆灰斑病發(fā)生。7調(diào)查與評價(jià)7.1病級標(biāo)準(zhǔn)0級：葉部無病斑；1級：病斑面積占葉面積1%以下；2級：病斑面積占葉面積1%～5%；3級：病斑面積占葉片面積6%～20%；4級：病斑面積占葉面積21%～50%；5級：病斑面積占葉面積51%以上。7.2調(diào)查方法接種后30d～40d，調(diào)查發(fā)病情況。每個(gè)品種調(diào)查20株。記錄發(fā)病級別，計(jì)算病情指數(shù)。計(jì)算公式如下：4DB2305/T036—2024EQ\*jc3\*hps20\o\al(\s\up8(病級),試總株)EQ\*jc3\*hps20\o\al(\s\up8(該),數(shù))7.3抗性評價(jià)計(jì)算病情指數(shù)后，按病情指數(shù)范圍確定抗性。具體抗性情況見表1。表1大豆灰斑病品種抗性評價(jià)表07.4有效性評價(jià)設(shè)置的感病對照品種表現(xiàn)為感病時(shí)，確定為鑒定有效。7.5調(diào)查記載表格大豆灰斑病鑒定結(jié)果記載表格，見表2。表2大豆灰斑病鑒定結(jié)果記載表123455DB2305/T036—