血常規(guī)復(fù)檢、鏡檢標(biāo)準(zhǔn)操作程序

血常規(guī)復(fù)檢、鏡檢標(biāo)準(zhǔn)操作程序目的用于指導(dǎo)血常規(guī)復(fù)檢、鏡檢。該SOP的變動(dòng)程序標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動(dòng)可由任一是用本程序的工作人員提出并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。血常規(guī)復(fù)檢、鏡檢標(biāo)準(zhǔn)WBC小于3.0×109或大于15×109；100fl-150fl出現(xiàn)高尖峰；PLT小于60×109；Hb小于50g/L；特殊病人和特殊病情；必須復(fù)查，必須推血片鏡檢；并登記。操作程序1.由本科工作人員重新采血。1.立即測定室內(nèi)質(zhì)控，觀測結(jié)果是非在控，在控，則再次測定，確認(rèn)。并手工計(jì)數(shù)，參照相關(guān)手工計(jì)數(shù)操作程序。結(jié)果不在控，查找原因，排除后，則再測室內(nèi)質(zhì)控測定。在控確認(rèn)，則再次測定。確認(rèn)。并手工計(jì)數(shù)，參照相關(guān)手工計(jì)數(shù)操作程序。涂片染色鏡檢。白細(xì)胞手工計(jì)數(shù)標(biāo)本種類：新抽取的抗凝血或手指末梢血。標(biāo)本要求：抗凝劑采用EDTAK2抗凝。用手指末梢血作白細(xì)胞檢驗(yàn)時(shí)，如手指有凍瘡，則主張采用耳垂血。標(biāo)本儲(chǔ)存：取材后應(yīng)立即推制成血涂片，并盡快送檢。標(biāo)本運(yùn)輸：保持干燥，室溫運(yùn)輸。血液經(jīng)稀酸稀釋后,成熟紅細(xì)胞全部被溶解,注入計(jì)數(shù)池后,在顯微鏡下計(jì)數(shù)白細(xì)胞.《試劑》冰醋酸2ml蒸餾水98ml操作步驟1.用吸管準(zhǔn)確吸取末梢血20ul（WBC小于3.0×109吸取40ul）；拭去管尖外部的余血,將吸管插入小試管中稀釋液的底部,輕輕將血放出,并吸取上層清液,洗試管數(shù)次,最后混合.2.充池,靜置2-3分鐘,待白細(xì)胞下沉.3.用低倍鏡計(jì)數(shù)4角4個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞數(shù).計(jì)算白細(xì)胞數(shù)/L=4個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)×50×106參考范圍成人:(4-10)×109/L兒童:(5-12)×109/L新生兒:(15-20)×109/L注意事項(xiàng)1.標(biāo)本采集時(shí)不能擠壓過甚,針刺深度必須適當(dāng).2．大小方格內(nèi)壓線細(xì)胞應(yīng)按數(shù)上不數(shù)下,數(shù)左不數(shù)右的原則進(jìn)行計(jì)數(shù).3．稀釋液要過濾,小試管,計(jì)數(shù)板必須清潔,以免雜質(zhì),微粒等誤認(rèn)為細(xì)胞.4.計(jì)數(shù)時(shí),兩次重復(fù)計(jì)數(shù)誤差不得超過10%.涂片染色檢查。染深藍(lán)色，含空泡或呈泡沫狀。Ⅱ型（幼稚型）：胞體較大，核圓形或卵圓形。染色質(zhì)細(xì)致呈網(wǎng)狀排列，可見1-2個(gè)發(fā)生母細(xì)胞化的結(jié)果。Ⅲ型（不規(guī)則型）：胞體較大，外形常不規(guī)則，可有多數(shù)偽足。核形狀及結(jié)構(gòu)與I型相同或不同，染色質(zhì)較粗糙致密。胞質(zhì)量豐富，染色淡藍(lán)或灰藍(lán)色，有透明感，邊緣處著色較深藍(lán)色?？捎猩贁?shù)空泡。（2）受放射線損傷后淋巴細(xì)胞形態(tài)變化：通過放射生物學(xué)的研究以及對(duì)射線損傷病人觀察，證實(shí)淋巴細(xì)胞是白細(xì)胞中對(duì)電離輻射最敏感的細(xì)胞。人體遭受較小劑量的電離輻射之后，雖未出現(xiàn)明顯臨床癥狀，但血中淋巴細(xì)胞的數(shù)量卻已顯著減少。若經(jīng)較大劑量照射后，淋巴細(xì)胞迅速減少，劑量越大，減少得越嚴(yán)重以致衰竭，與此同時(shí)受損傷的淋巴細(xì)胞還出現(xiàn)形態(tài)學(xué)改變，如核固縮、核破壞、雙核的淋巴細(xì)胞以及含有衛(wèi)星核的淋巴細(xì)胞。后者是指胞質(zhì)中主核之旁出現(xiàn)小核也稱微核，是射線損傷后較為特殊的所見。（3）淋巴細(xì)胞性白血病時(shí)形態(tài)學(xué)變化：在急、慢性淋巴細(xì)胞白血病時(shí)，不但出現(xiàn)各階段的原幼細(xì)胞，且處于各分階段的白血病的細(xì)胞都有特殊的形態(tài)變化。紅細(xì)胞形態(tài)在良好的染色血涂片上，正常紅細(xì)胞的大小形態(tài)較為一致，直徑為6.7～7.7μm，染色淡紅色，中央著色較邊緣淡。各種病因作用于紅細(xì)胞生理進(jìn)程的不同階段引起相應(yīng)的病理變化，導(dǎo)致某些類型貧血的紅細(xì)胞產(chǎn)生特殊的形態(tài)變化，可從染色血涂片上紅細(xì)胞的大小、形態(tài)、染色等方面反映出來。此種形態(tài)學(xué)改變與血紅蛋白測定、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果相結(jié)合可粗略地推斷貧血原因，對(duì)貧血的診斷和鑒別診斷有很重要的臨床意義。紅細(xì)胞的形態(tài)變化主要表現(xiàn)在以下四個(gè)方面：紅細(xì)胞大小改變1.小紅細(xì)胞（microcyte）直徑小于6μm者稱為小紅細(xì)胞，正常人遇見。如果血涂片中出現(xiàn)較多染色過淺的小紅細(xì)胞，提示血紅蛋白合成障礙，可能由于缺鐵引起；或者是珠蛋白代謝異常引起的血紅蛋白病。而遺傳性球形細(xì)胞增多癥的小紅細(xì)胞，其血紅蛋白充盈良好，生理性中心淺染區(qū)消失。2.大紅細(xì)胞（macrocyte）直徑大于10μm。見于溶血性貧血及巨幼細(xì)胞貧血。3.巨紅細(xì)胞（megalocyte）直徑大于15μm。最常見于缺乏葉酸及維生素B12所致的巨幼細(xì)胞性貧血。其胞體所以增大是因?yàn)槿狈ι鲜鲆蜃訒r(shí)，幼稚紅細(xì)胞內(nèi)DNA合成不足，不能按時(shí)分裂所致。如果血涂片中同時(shí)存在分葉過多的中性粒細(xì)胞則巨幼細(xì)胞性貧血可能性更大。4.紅細(xì)胞大小不均（anisocytosis）是指紅細(xì)胞之間直徑相差一倍以上而言。常見于嚴(yán)重的增生性貧血血涂片中。而巨幼細(xì)胞性貧血時(shí)尤為明顯，可能與骨髓粗制濫造紅細(xì)胞有關(guān)。紅細(xì)胞形態(tài)改變1.球形紅細(xì)胞（spherocyte）細(xì)胞直徑小于正常。厚度增加常大于2μm。無中心淺染色區(qū)，似球形。常見于遺傳性球形細(xì)胞增多癥和伴有球形細(xì)胞增多的其它溶血性貧血。如自身免疫性溶血性貧血、新生兒溶血病以及紅細(xì)胞酶缺陷所致溶血性貧血等。2.橢圓形紅細(xì)胞（elliptocyte）細(xì)胞呈卵圓形、桿形、長度可大于寬度3-4倍，最大直徑可達(dá)12.5μm，橫徑可為2.5μm。此種紅細(xì)胞置于高滲、等滲、低滲溶液或正常人血清內(nèi)，其橢圓形保持不變，但幼紅細(xì)胞及網(wǎng)織紅細(xì)胞均不呈橢圓形。在遺傳性橢圓形細(xì)胞增多癥病有血涂片中此種紅細(xì)胞可達(dá)25%，甚至高達(dá)75%（正常人約占1%）。3.靶形紅細(xì)胞（targetcell）紅細(xì)胞中心部位染色較深，其外圍為蒼白區(qū)域，而細(xì)胞邊緣又深染，形如射擊之靶。有的中心深染區(qū)不像孤島而像從紅細(xì)胞邊緣延伸的半島狀態(tài)或柄狀，而成不典型的靶形紅細(xì)胞。靶形紅細(xì)胞直徑可比正常紅細(xì)胞大，但厚度變薄，因此體積可正常。常見于各種低色素性貧血。在珠蛋白生成障礙性貧血時(shí)尤易見到。可能因HbA含量貧乏而又分布不勻所致應(yīng)注意與在血涂片制作中未及時(shí)固定而引起的改變相區(qū)別。4.鐮形紅細(xì)胞（sicklecell）形如鐮刀狀。這是由于紅細(xì)胞內(nèi)存在著異常血紅蛋白S所致，在缺氧情況下尤易形成此尖紅細(xì)胞。因此檢查鐮形紅細(xì)胞需將血液制成濕片，然后加入還原劑如偏亞硫酸病。5.口形紅細(xì)胞（stomatocyte）紅細(xì)胞中央有裂縫，中心蒼白區(qū)呈扁平狀，頗似張開的口形或魚口。在正常人偶見。如積壓涂片中出現(xiàn)較多口形紅細(xì)胞，見于口形紅細(xì)胞增多癥。少量出現(xiàn)可見于彌漫性血管內(nèi)凝血（DIC）、酒清中毒。6.棘細(xì)胞（acanthocyte）該紅細(xì)胞表面有針尖狀突起，其間距不規(guī)則。突起的長度和寬度右不一。在β-脂蛋白缺乏癥病人的血涂片中出現(xiàn)較多。也可見于脾切除后、酒精中毒性肝臟疾病、尿毒癥。須注意與皺縮紅細(xì)胞區(qū)別。皺縮紅細(xì)胞周邊呈鋸齒形排列緊密、大小相等，外端較尖。7.裂片細(xì)胞（schistocyte）為紅細(xì)胞碎片或不完整的紅細(xì)胞。大小不一。外形不規(guī)則，有各種形態(tài)如刺形、盔形、三角形、扭轉(zhuǎn)形等。正常人血涂片中裂片細(xì)胞小于2%，彌漫性血管內(nèi)凝血、微血管病性溶血性貧血、重型珠蛋白生成障礙性貧血時(shí)出現(xiàn)較多。8.紅細(xì)胞形態(tài)不整（poikilocytosis）指紅細(xì)胞形態(tài)發(fā)生各種明顯改變的情況而言，可呈淚滴狀、梨形、棍棒形、新月形等，最常見于巨幼細(xì)胞性貧血。可能因貧血嚴(yán)重但又缺乏原料，在骨髓內(nèi)粗制濫造；也可能因紅細(xì)胞脆性增大，在推片時(shí)碎裂所致。紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量改變1.正常色素性（normochromic）正常紅細(xì)胞在瑞特染色的血片中為淡紅色圓盤狀，中央有生理性空白區(qū)，通常稱正常色素性。除見于正常人外，還見于急性失血、再生障礙性貧血和白血病。2.低色素性（hypochromic）紅細(xì)胞的生理性中心淺染色區(qū)擴(kuò)大，甚至成為環(huán)圈形紅細(xì)胞，提示其血紅蛋白含量明顯減少，常見于缺鐵性貧血、珠蛋白生楊障礙性貧血、鐵幼粒細(xì)胞性貧血，某些血紅蛋白病時(shí)也常見到。3.高色素性（hyperchromic）指紅細(xì)胞內(nèi)生下性中心淺染區(qū)消失，整個(gè)紅細(xì)胞均染成紅色，而且胞體也大。其平均紅細(xì)胞血紅蛋白的含量是增高的，但平均血紅蛋白濃度多屬于正常。最常見于巨幼細(xì)胞性貧血。4.嗜多色性（polychromatic）屬于尚未完全成熟的紅細(xì)胞，故細(xì)胞較大，由于胞質(zhì)中含多少不等的嗜堿性物質(zhì)RNA而被染成灰色藍(lán)色。嗜多色性紅細(xì)胞增多提示骨髓造紅細(xì)胞功能活躍。在增生性貧血時(shí)增多，溶血性貧血時(shí)最為多見。紅細(xì)胞中出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu)1.堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞（basophilicstipplingcell）簡稱點(diǎn)彩紅細(xì)胞，指在瑞特氏染色條件下，胞質(zhì)內(nèi)存在嗜堿性深藍(lán)色顆粒的紅細(xì)胞，屬于未完全成熟紅細(xì)胞，其顆粒大小不一、多少不等、正常人血涂片中很少見到，僅為萬分之一。有鉛、鉍、汞中毒時(shí)增多，常作為名鉛中毒的診斷的篩選指標(biāo)。有人認(rèn)為是由于紅細(xì)胞的膜受重金屬損傷后，其胞質(zhì)中的核糖體發(fā)生聚集性引起，也可能是由于血紅蛋白合成過程中原卟啉與鐵結(jié)合受損所致，伴有再生紊亂現(xiàn)象。2.染色質(zhì)小體（howelljollysbody）位于成熟或幼紅細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，呈圓形，有1-2μm大小，染紫紅色，可1至數(shù)個(gè)，已證實(shí)為核殘余物，常見于巨幼細(xì)胞性貧血、溶血性貧血及脾切除術(shù)后。3.卡波環(huán)（cabotring）在嗜多色性或堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞的胞質(zhì)中出現(xiàn)的紫紅色細(xì)線圈狀結(jié)構(gòu)，有時(shí)繞成8字形?，F(xiàn)認(rèn)為可能是胞質(zhì)中脂蛋白變性所致常與染色質(zhì)小體同時(shí)存在。見于巨細(xì)胞性貧血和鉛中毒患者。4.有核紅細(xì)胞（nucleatederyhrocyte）即幼稚紅細(xì)胞，存在于骨髓中。正常成人外周血液中不能見到。1周之內(nèi)嬰兒的血涂片可見到少量。在成人外周血涂片中出現(xiàn)有核紅細(xì)胞屬病理現(xiàn)象，最常見于各種溶血性貧血。由于大量紅細(xì)胞破壞后，骨髓增生，除網(wǎng)織紅細(xì)胞大量入血外，還有一些有核紅細(xì)胞提前釋放入血，這說明骨髓的調(diào)節(jié)功能良好。另一種可能是造血系統(tǒng)惡性疾患或其它部位的癌腫轉(zhuǎn)達(dá)移到骨髓，最常見于急、慢性白血病及紅白血病。后者可見更早階段的幼紅細(xì)胞，并伴有形態(tài)上巨幼樣變及其它畸變。綜合以上紅細(xì)胞形態(tài)變化，結(jié)合紅細(xì)胞及血紅蛋白減低程度，可以初步作出貧血的形態(tài)學(xué)診斷（見下表）。常見各類貧血的形態(tài)學(xué)診斷簡表血涂片中紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)所見病因推斷參考化驗(yàn)項(xiàng)目紅細(xì)胞血紅蛋白網(wǎng)織紅細(xì)胞其它紅細(xì)胞大小不均，以小型為主，有明顯中心染區(qū)擴(kuò)大缺鐵性貧血↓↓↓↑紅細(xì)胞大小，形態(tài)大致正常再生障礙性貧血↓↓↓血小板↓同上，多色性紅細(xì)胞較易見到急性失血↓↓↑中性分葉↑同上，易見嗜多色性紅細(xì)胞，亦可見到有核紅細(xì)胞急性溶血↓↓↑↑尿中有游離Hb，血小板正常或↑紅細(xì)胞大小不均，大紅細(xì)胞及巨紅細(xì)胞易見到，血紅蛋白量豐富，生理性中心淺染區(qū)常見多色及有核紅細(xì)胞缺乏維生素B12及葉酸引起的巨幼細(xì)胞性貧血↓↓↓↑血小板正?；颉儺惖臐撛趤碓慈〔牟划?dāng)。涂片過厚或過薄，影響形態(tài)觀察。操作注意事項(xiàng)1.取材后，必須立即涂片。2.推好的血膜片應(yīng)在空氣中搖動(dòng)，使其盡快干燥，以免細(xì)胞變形。天氣寒冷或潮濕時(shí)，應(yīng)于37℃溫箱中保溫促干，以免細(xì)胞變形縮小。3.根據(jù)血膜厚薄，細(xì)胞量多少及室內(nèi)溫度等把握好染色時(shí)間，使染色效果滿意。4.鏡檢時(shí)循序檢查，必要時(shí)用油鏡確認(rèn)；并注意整體情況。血小板手工計(jì)數(shù)。將血液用適當(dāng)?shù)南♂屢鹤饕欢肯♂尯螅靹蜃⑷擞?jì)數(shù)池內(nèi)計(jì)數(shù)，再算出每升血液中血小板數(shù)。試劑（1）草酸銨法稀液：分別溶解草酸銨1.0g及EDTA·Na20.012g，合并加蒸餾水至100ml,混勻（2）許汝和稀釋液：分別溶解尿素（AR級(jí)）10g、枸櫞酸鈉0.5g于蒸餾水至100ml,再加40％甲醛溶液0.1ml,混勻，過濾，保存于冰箱中備用?！恫僮鳌罚?）于清潔試管中加入稀釋液0.38ml。（2）準(zhǔn)確吸取毛細(xì)血管血20ul(WBC小于60×109吸取40ul)，擦去管尖外附著血液，置于血小板稀釋液內(nèi)，立即充分混勻。街完全溶血后再次混勻1min。（3）取上述均勻的血小板懸液1滴，注入計(jì)數(shù)池內(nèi)，靜置10~15min，使血小板下沉。（4）用高倍鏡計(jì)數(shù)中央1個(gè)大方格（即400個(gè)小格）內(nèi)血小板，乘以0.2×109即為每升血液內(nèi)血小板數(shù)。質(zhì)量保證方案血小板稀釋液要清潔，配成后應(yīng)過濾。防止微粒和細(xì)菌污染。試管吸管也應(yīng)清潔、干凈。（2）針刺應(yīng)稍深，使血流暢通。拭去第一滴血后，首先采血小板測事實(shí)上，操作應(yīng)迅速，防止血小板聚集和破壞采取標(biāo)本后盡快計(jì)數(shù)，以免影響結(jié)果。（3）血液加入稀釋液內(nèi)要充分混勻，滴入計(jì)數(shù)池后一定要靜置10～15min。室溫高時(shí)注意保持計(jì)數(shù)池周圍的濕度，以免水分蒸發(fā)而影響計(jì)數(shù)結(jié)果。（4）計(jì)數(shù)時(shí)光線要適中，不可太強(qiáng)，應(yīng)注意有折光的性的血小板和雜質(zhì)、灰塵相區(qū)別。附在血細(xì)胞旁邊的血小板也要注意，不要漏數(shù)。（5）如在