乳腺癌類器官藥物敏感性檢測指導(dǎo)患者精準(zhǔn)治療技術(shù)規(guī)范編制說明

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《乳腺癌類器官藥物敏感性檢測指導(dǎo)患者精準(zhǔn)治療技術(shù)規(guī)范》（征求意見稿）編制說明標(biāo)準(zhǔn)起草工作組2024年9月一、工作簡況（一）任務(wù)來源根據(jù)2024年全國標(biāo)準(zhǔn)化工作要點(diǎn)，加強(qiáng)質(zhì)量支撐和標(biāo)準(zhǔn)引領(lǐng)，深入推進(jìn)國家標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)展綱要各項(xiàng)重點(diǎn)任務(wù)實(shí)施，以標(biāo)準(zhǔn)有力引領(lǐng)現(xiàn)代化產(chǎn)業(yè)體系建設(shè)，推動標(biāo)準(zhǔn)化更好服務(wù)經(jīng)濟(jì)社會高質(zhì)量發(fā)展。依據(jù)《中華人民共和國標(biāo)準(zhǔn)化法》和《團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)管理規(guī)定》（國標(biāo)委聯(lián)[2019]1號）的相關(guān)要求，中國食品藥品企業(yè)質(zhì)量安全促進(jìn)會批準(zhǔn)立項(xiàng)并聯(lián)合相關(guān)單位共同制定《乳腺癌類器官藥物敏感性檢測指導(dǎo)患者精準(zhǔn)治療技術(shù)規(guī)范》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)。（二）制定背景在精準(zhǔn)醫(yī)療時(shí)代，隨著腫瘤靶向治療及免疫治療的快速發(fā)展，患者對個(gè)體化精準(zhǔn)藥物治療的需求越來越高。傳統(tǒng)的腫瘤治療方法往往缺乏針對性，導(dǎo)致治療效果有限且副作用明顯。因此，開發(fā)新的技術(shù)手段以提高腫瘤治療的精準(zhǔn)性成為醫(yī)學(xué)界的重要課題。乳腺癌作為一種常見的惡性腫瘤，其異質(zhì)性一直是抗腫瘤藥物研發(fā)以及實(shí)現(xiàn)腫瘤患者個(gè)性化精準(zhǔn)治療需要克服的難點(diǎn)。不同患者之間的乳腺癌在基因表達(dá)、分子特征、藥物反應(yīng)等方面存在顯著差異，這使得同一種治療方案在不同患者身上的效果大相徑庭。因此，尋找一種能夠準(zhǔn)確反映患者腫瘤特征并指導(dǎo)個(gè)性化治療的技術(shù)手段顯得尤為重要。類器官技術(shù)作為一種新興的功能性檢測技術(shù)，近年來在腫瘤精準(zhǔn)治療中展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用潛力。類器官是將患者來源的新鮮腫瘤組織經(jīng)體外三維(3D)細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)建立的、與患者腫瘤特征高度相似的一種立體模型。由于其能夠很好地保留腫瘤組織的細(xì)胞結(jié)構(gòu)、分子特征以及藥物敏感性等關(guān)鍵信息，因此被廣泛應(yīng)用于疾病病理學(xué)、精準(zhǔn)醫(yī)療以及新藥研發(fā)等方面。為了推動乳腺癌類器官藥物敏感性檢測在臨床中的規(guī)范應(yīng)用，國內(nèi)外相關(guān)領(lǐng)域?qū)＜一诖罅垦芯繄?bào)道數(shù)據(jù)制定了相應(yīng)的技術(shù)規(guī)范或?qū)＜夜沧R。這些規(guī)范或共識對乳腺癌類器官的定義、受檢藥物的選擇及應(yīng)用場景、實(shí)施規(guī)范、檢測流程、綜合分析、臨床意義等方面進(jìn)行了詳細(xì)闡述，為臨床實(shí)踐和科研探索提供了指導(dǎo)和參考。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步和臨床數(shù)據(jù)的積累，乳腺癌類器官藥物敏感性檢測指導(dǎo)患者精準(zhǔn)治療技術(shù)將不斷得到完善和推廣。未來，通過產(chǎn)、學(xué)、研、醫(yī)跨界合作，將進(jìn)一步推動類器官技術(shù)在腫瘤精準(zhǔn)治療領(lǐng)域的發(fā)展和應(yīng)用，為更多患者帶來福音。制定《乳腺癌類器官藥物敏感性檢測指導(dǎo)患者精準(zhǔn)治療技術(shù)規(guī)范》的目的主要體現(xiàn)在推動精準(zhǔn)醫(yī)療發(fā)展、提高治療效果、促進(jìn)科研與臨床轉(zhuǎn)化、應(yīng)對乳腺癌治療的復(fù)雜性、提高檢測的可重復(fù)性和可比性、促進(jìn)技術(shù)的普及和應(yīng)用以及保障患者權(quán)益和安全等方面。這將有助于推動乳腺癌精準(zhǔn)治療的發(fā)展，提高患者的治療效果和生活質(zhì)量。（三）起草過程3.1標(biāo)準(zhǔn)研制階段2024年3～6月，起草組通過企業(yè)調(diào)研，了解企業(yè)實(shí)際生產(chǎn)情況，并組織收集、整理相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)化資料、專業(yè)文獻(xiàn)等，經(jīng)成分分析、研討、論證后編寫完成《乳腺癌類器官藥物敏感性檢測指導(dǎo)患者精準(zhǔn)治療技術(shù)規(guī)范》立項(xiàng)申請書及標(biāo)準(zhǔn)框架相關(guān)內(nèi)容，并向中國食品藥品企業(yè)質(zhì)量安全促進(jìn)會提出標(biāo)準(zhǔn)立項(xiàng)申請。3.2標(biāo)準(zhǔn)立項(xiàng)階段2024年7月，中國食品藥品企業(yè)質(zhì)量安全促進(jìn)會正式發(fā)布了《乳腺癌類器官藥物敏感性檢測指導(dǎo)患者精準(zhǔn)治療技術(shù)規(guī)范》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)立項(xiàng)通知，并在全國團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)信息平臺進(jìn)行公示。3.3標(biāo)準(zhǔn)起草階段2024年7月～2024年9月，依據(jù)《中華人民共和國標(biāo)準(zhǔn)化法》、《國務(wù)院關(guān)于深化標(biāo)準(zhǔn)化工作改革方案》等文件的要求，按照團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的制修訂程序組織有關(guān)技術(shù)人員成立標(biāo)準(zhǔn)起草工作組，通過相關(guān)信息化手段進(jìn)行多次內(nèi)容討論和交流，并向相關(guān)單位和專家咨詢，在廣泛聽取各方意見和充分論證的基礎(chǔ)上，對標(biāo)準(zhǔn)初稿進(jìn)行了完善和修改后經(jīng)起草組確認(rèn)，同意作為征求意見稿，公開征求意見。二、編制原則在標(biāo)準(zhǔn)制定過程中，標(biāo)準(zhǔn)起草工作組按照GB/T1.1—2020給出的規(guī)則編寫，主要遵循以下原則：（1）協(xié)調(diào)性:保證標(biāo)準(zhǔn)與國內(nèi)現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)一致。（2）規(guī)范性：嚴(yán)格按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》給出的規(guī)則起草，保證標(biāo)準(zhǔn)的編寫質(zhì)量。（3）適用性：結(jié)合生產(chǎn)企業(yè)管理實(shí)踐和產(chǎn)品的主要環(huán)境影響，提出對企業(yè)產(chǎn)品的具體質(zhì)量要求和生產(chǎn)經(jīng)營規(guī)范。三、主要技術(shù)內(nèi)容及其確定依據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了乳腺癌類器官藥物敏感性檢測的樣本采集與處理、類器官建立與培養(yǎng)、藥物敏感性檢測、結(jié)果解讀與精準(zhǔn)治療建議。本標(biāo)準(zhǔn)適用于乳腺癌類器官藥物敏感性檢測和指導(dǎo)治療乳腺癌患者。

本標(biāo)準(zhǔn)給出了乳腺癌類器官的術(shù)語和定義。將乳腺癌類器官定義為：利用乳腺癌患者的腫瘤組織或細(xì)胞，在體外三維培養(yǎng)條件下形成的具有類似原生組織結(jié)構(gòu)的三維細(xì)胞團(tuán)，能夠模擬原生腫瘤組織的生理和病理特性。樣本采集與處理樣本采集a）采集對象應(yīng)為確診為乳腺癌的患者，在符合醫(yī)學(xué)倫理和患者知情同意的前提下進(jìn)行樣本采集。b）通過手術(shù)或穿刺活檢獲取新鮮的乳腺癌組織樣本。采集過程中應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范，避免樣本污染。c）根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求采集足夠量的樣本，確保后續(xù)類器官培養(yǎng)和藥物敏感性檢測的順利進(jìn)行。樣本處理將采集到的乳腺癌組織樣本按照以下步驟進(jìn)行處理：1）初步處理：將組織樣本立即放入含有適量培養(yǎng)基或保存液的無菌容器中，以保持細(xì)胞的活性；2）清洗與消毒：用無菌生理鹽水或PBS緩沖液輕輕沖洗樣本，去除表面的血跡和污染物。避免使用刺激性強(qiáng)的化學(xué)消毒劑；3）切割與消化：將組織樣本切割成小塊，便于后續(xù)的消化和分離。使用適宜的消化酶（如胰蛋白酶、膠原酶等）在37℃下進(jìn)行消化，直至組織塊分散成單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)；4）細(xì)胞懸液制備：消化完成后，通過離心去除消化液，加入適量的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，制備成單細(xì)胞懸液，用于后續(xù)的類器官培養(yǎng)。質(zhì)量控制與記錄a）在樣本處理過程中和處理后，應(yīng)進(jìn)行細(xì)胞活性檢測（如臺盼藍(lán)染色法），確保細(xì)胞的活力和數(shù)量滿足實(shí)驗(yàn)要求。對處理后的細(xì)胞懸液進(jìn)行微生物污染檢測，確保無細(xì)菌、真菌等污染。c）詳細(xì)記錄樣本的采集時(shí)間、地點(diǎn)、患者信息等，以及樣本處理過程中的關(guān)鍵步驟和參數(shù)，確保實(shí)驗(yàn)的可追溯性和重復(fù)性。類器官建立與培養(yǎng)細(xì)胞接種與基質(zhì)準(zhǔn)備a）基質(zhì)膠準(zhǔn)備選擇適宜的基質(zhì)膠，如Matrigel或其他生物工程基質(zhì)，用于模擬體內(nèi)微環(huán)境，并為類器官的形成提供支持。b）細(xì)胞接種將處理好的乳腺癌細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)接種在基質(zhì)膠上，確保細(xì)胞分布均勻，密度適中。培養(yǎng)條件設(shè)置a）培養(yǎng)基根據(jù)乳腺癌類器官的生長需求，選擇含有必需營養(yǎng)成分、生長因子和激素的培養(yǎng)基。b）環(huán)境條件維持培養(yǎng)環(huán)境的溫度在37°C，CO2濃度為5%，并保持適宜的濕度，以模擬體內(nèi)生理?xiàng)l件。c）換液與觀察定期更換培養(yǎng)基，以去除代謝產(chǎn)物和補(bǔ)充營養(yǎng)物質(zhì)。同時(shí)，定期觀察類器官的生長情況，記錄形態(tài)變化、增殖速率等關(guān)鍵指標(biāo)。類器官形成與監(jiān)測a）在接種后，持續(xù)監(jiān)測細(xì)胞在基質(zhì)膠中的生長和分化情況，直至形成具有三維結(jié)構(gòu)的類器官。b）定期使用顯微鏡觀察類器官的形態(tài)學(xué)特征，確保其結(jié)構(gòu)與原生乳腺癌組織相似。培養(yǎng)周期與傳代根據(jù)類器官的生長速度和實(shí)驗(yàn)需求，設(shè)定合理的培養(yǎng)周期。b）當(dāng)類器官生長到一定程度時(shí)，進(jìn)行傳代操作，即將類器官分散成單個(gè)細(xì)胞或小塊，重新接種到新的基質(zhì)膠上繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中的質(zhì)量控制定期對培養(yǎng)物進(jìn)行污染檢測，確保無細(xì)菌、真菌或其他微生物的污染。b）詳細(xì)記錄類器官的生長情況，包括形態(tài)學(xué)變化、生長速度等，以便后續(xù)分析。藥物敏感性檢測a）檢測原理藥物敏感性檢測基于類器官對藥物的反應(yīng)來評估其療效。通過檢測藥物對乳腺癌類器官生長、增殖或凋亡的影響，預(yù)測該藥物對患者的可能療效。實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備1）藥物選擇：根據(jù)臨床需求和患者情況，選擇待測藥物。2）藥物濃度設(shè)置：針對每種藥物，設(shè)定多個(gè)濃度梯度，以全面評估藥物在不同濃度下對類器官的影響。3）對照組設(shè)置：設(shè)立未經(jīng)藥物處理的對照組，以便準(zhǔn)確評估藥物效應(yīng)。鋪板1）培養(yǎng)板的選擇：應(yīng)選擇透明、無菌、對細(xì)胞無毒性的培養(yǎng)板，以確保類器官的正常生長和觀察。宜使用低吸附性的培養(yǎng)板，以減少類器官與培養(yǎng)板表面的粘附，保持類器官的3D結(jié)構(gòu)。2）類器官密度：在鋪板時(shí)，應(yīng)控制類器官的密度，避免過度擁擠或過于稀疏，以保證類器官的正常生長和藥物敏感性檢測的準(zhǔn)確性。推薦的類器官密度應(yīng)根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)條件和類器官的大小而定，一般建議在培養(yǎng)板的每個(gè)孔中放置適當(dāng)數(shù)量的類器官。3）基質(zhì)膠濃度和體積：基質(zhì)膠應(yīng)用于支持類器官的生長和維持其3D結(jié)構(gòu)?；|(zhì)膠的濃度和體積應(yīng)根據(jù)類器官的類型和大小進(jìn)行優(yōu)化，以確保類器官在培養(yǎng)過程中的穩(wěn)定性和生長狀況。加藥1）藥敏培養(yǎng)基配方：藥敏培養(yǎng)基應(yīng)包含必需的營養(yǎng)成分和生長因子，以支持類器官的正常生長和代謝。培養(yǎng)基的配方應(yīng)根據(jù)類器官的具體需求和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行優(yōu)化。2）藥物濃度梯度稀釋：藥物應(yīng)按照預(yù)定的濃度梯度進(jìn)行稀釋，以評估不同藥物濃度對類器官的影響。稀釋過程中應(yīng)確保藥物的均勻分布和準(zhǔn)確濃度，避免濃度誤差對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。3）藥物處理時(shí)間：藥物處理時(shí)間應(yīng)根據(jù)藥物的性質(zhì)和實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行確定。推薦在處理前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定最佳的藥物處理時(shí)間。檢測1）3D類器官細(xì)胞活力ATP檢測法：通過測量類器官中的ATP水平來評估細(xì)胞活力。應(yīng)按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，確保測量結(jié)果的準(zhǔn)確性。2）3D無損成像檢測法：使用高分辨率顯微鏡對類器官進(jìn)行無損成像，觀察類器官的形態(tài)變化和生長情況。成像過程中應(yīng)避免對類器官造成損傷或干擾。3）AOPI熒光染色檢測法：使用AOPI熒光染料對類器官進(jìn)行染色，通過熒光顯微鏡觀察活細(xì)胞和死細(xì)胞的分布情況。染色過程中應(yīng)確保染料的均勻滲透和適當(dāng)濃度，以獲得清晰的熒光信號。數(shù)據(jù)分析1）IC50計(jì)算：根據(jù)藥物濃度和對應(yīng)的細(xì)胞活力數(shù)據(jù)，使用合適的統(tǒng)計(jì)方法計(jì)算IC50值（半抑制濃度）。IC50值可用于評估藥物對類器官的抑制效果，并比較不同藥物或不同類器官之間的敏感性差異。2）類器官圖片分析：對類器官的圖片進(jìn)行定量分析，包括大小、數(shù)量、邊緣粗糙度、中空度等反應(yīng)器官活力的指標(biāo)，可用于評估類器官的生長狀況和藥物對類器官形態(tài)的影響。3）熒光強(qiáng)度分析：對AOPI熒光染色后的類器官圖片進(jìn)行熒光強(qiáng)度分析，分別計(jì)算綠色熒光（代表活細(xì)胞）和紅色熒光（代表死細(xì)胞）的強(qiáng)度。通過比較不同藥物處理組之間的熒光強(qiáng)度差異，評估藥物對類器官細(xì)胞活力的影響。結(jié)果判定與報(bào)告1）敏感性判定：依據(jù)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，制定敏感性判定標(biāo)準(zhǔn)，如將藥物敏感性分為高度敏感、中度敏感和低敏感等級。2）報(bào)告撰寫應(yīng)撰寫詳細(xì)的藥物敏感性檢測報(bào)告，包括但不限于以下內(nèi)容：——實(shí)驗(yàn)基本信息：包括實(shí)驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)、操作人員、使用的類器官來源等；——實(shí)驗(yàn)方法與材料：詳細(xì)描述實(shí)驗(yàn)方法、使用的藥物及其濃度設(shè)置；——結(jié)果部分：展示藥物敏感性檢測的各項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果；——分析討論：對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行深入分析，探討藥物敏感性的可能機(jī)制，以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果對患者的治療指導(dǎo)意義；——結(jié)論與建議：根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，給出明確的藥物敏感性結(jié)論，并提出針對患者的個(gè)性化精準(zhǔn)治療建議。——報(bào)告應(yīng)由專業(yè)人員進(jìn)行審核，確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和報(bào)告的完整性。對于關(guān)鍵數(shù)據(jù)和結(jié)論，應(yīng)進(jìn)行多次復(fù)核，避免出現(xiàn)錯(cuò)誤或遺漏。結(jié)果解讀與精準(zhǔn)治療建議結(jié)果解讀a）藥物敏感性判定：根據(jù)第6章藥物敏感性檢測的結(jié)果，將藥物對乳腺癌類器官的抑制作用進(jìn)行量化評估。通常，抑制率超過50%可認(rèn)為藥物對該類器官有明顯的抑制作用。結(jié)合藥物的IC50值（半數(shù)抑制濃度）來綜合判斷藥物對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力。IC50值越低，表示藥物對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力越強(qiáng)。b）結(jié)果可靠性分析：對比不同藥物或同一藥物不同濃度下的抑制作用，以評估結(jié)果的穩(wěn)定性和可靠性。分析實(shí)驗(yàn)過程中的可能干擾因素，如類器官的質(zhì)量、藥物的穩(wěn)定性等，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。精準(zhǔn)治療建議a）個(gè)性化治療方案制定：根據(jù)藥物敏感性檢測結(jié)果，為患者篩選出敏感藥物，避免使用不敏感或耐藥的藥物。結(jié)合患者的臨床情況、病理類型、分期等因素，制定個(gè)性化的精準(zhǔn)治療方案。b）治療方案調(diào)整建議：對于初次治療效果不佳的患者，根據(jù)藥物敏感性檢測結(jié)果調(diào)整治療方案，更換或增加敏感藥物。定期監(jiān)測患者的治療效果，根據(jù)反饋及時(shí)調(diào)整治療方案，以確保治療效果的最大化。c）注意事項(xiàng)與風(fēng)險(xiǎn)提示：提醒患者注意藥物的副作用和不良反應(yīng)，及時(shí)與醫(yī)生溝通并調(diào)整用藥方案。對于某些特殊類型的乳腺癌（如HER2陽性、三陰性乳腺癌等），應(yīng)特別關(guān)注相