(1.67)-7.5.4電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)

7.5.4電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)概況電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)（ECLIA）

是一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。通過(guò)三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記抗原或抗體的抗原-抗體反應(yīng)順磁性微粒分離技術(shù)廣泛應(yīng)用于臨床各種項(xiàng)目的定量檢測(cè)自動(dòng)化分析要點(diǎn)（以雙抗體夾心法為例）電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)1.抗原抗體結(jié)合2.電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)3.光信號(hào)檢測(cè)4.檢測(cè)完畢臨床檢測(cè)試劑盒組成電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)MR1R2甲胎蛋白（AFP）試劑盒M：鏈霉親合素包被的微粒（透明瓶蓋）R1：生物素化的抗AFP單克隆抗體（灰蓋）R2：三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的抗AFP單克隆抗體（黑蓋）RU電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)檢測(cè)原理1.抗原抗體結(jié)合溫育RU將生物素標(biāo)記的特異性抗體、待測(cè)標(biāo)本和三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記抗體，加入反應(yīng)杯中共同孵育，形成生物素-抗體-待測(cè)抗原-釕標(biāo)記抗體復(fù)合物。RUMR1R2電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)檢測(cè)原理1.抗原抗體結(jié)合溫育RU然后加入鏈霉親合素包被的順磁性微粒共同孵育，使順磁性微粒表面形成鏈霉親合素-生物素-抗體-待測(cè)抗原-釕標(biāo)記抗體復(fù)合物。RUMR1R2電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)檢測(cè)原理2.電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)工作電極磁鐵RURU通過(guò)蠕動(dòng)泵將上述生成的復(fù)合物送入到流動(dòng)測(cè)量室。溶液中還可能包含未結(jié)合的標(biāo)記抗體、抗原、順磁性微粒等。電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)檢測(cè)原理2.電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)工作電極磁鐵當(dāng)磁性微粒流經(jīng)電極表面時(shí)，磁性微粒被安裝在工作電極下磁鐵吸附于電極表面。RURU電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)檢測(cè)原理2.電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)工作電極磁鐵同時(shí)，含有三丙胺（TPA）緩沖液流入，未結(jié)合的標(biāo)記抗體等被沖走。RUTPATPATPATPATPATPARU電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)檢測(cè)原理2.電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)工作電極磁鐵與此同時(shí)電極加壓，啟動(dòng)電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，使三聯(lián)吡啶釕和三丙胺（TPA）在電極表面進(jìn)行電子轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生電化學(xué)發(fā)光RUTPARU2+e-RU3+e-電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)檢測(cè)原理2.電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)工作電極磁鐵RUTPARU2+RU3+H++e-RU3+與此同時(shí)電極加壓，啟動(dòng)電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，使三聯(lián)吡啶釕和三丙胺（TPA）在電極表面進(jìn)行電子轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生電化學(xué)發(fā)光電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)檢測(cè)原理3.光信號(hào)檢測(cè)工作電極磁鐵反應(yīng)釋放出的光信號(hào)通過(guò)光電倍增管測(cè)量其光強(qiáng)度，并計(jì)算出被分析物的相應(yīng)濃度。RUTPARU2+光電倍增管電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)檢測(cè)原理4.檢測(cè)完畢工作電極磁鐵終止電壓，撤去磁場(chǎng)，蠕動(dòng)泵將清洗液泵進(jìn)流動(dòng)室清洗電極表面，準(zhǔn)備下一次檢測(cè)。RUTPA光電倍增管清洗液電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)總結(jié)工作原理：電化學(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記抗體（抗原）,與相應(yīng)配體發(fā)生特異的結(jié)合反應(yīng)后進(jìn)入流動(dòng)測(cè)量室，電發(fā)光過(guò)程被啟動(dòng)。特點(diǎn)：電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定有諸多特點(diǎn)，三聯(lián)吡啶釕在電場(chǎng)中因不斷得到三丙胺提供的電子，可周而復(fù)始地發(fā)光，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，信號(hào)強(qiáng)度高，容易測(cè)定容易控