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備案號:DB11DB11/T829—2011白菜品種純度及真實性分子檢測方法MethodsofidentifyingvarietalpurityandgenuinenessofChinesecabbagebyusingmolecularmarkers北京市質量技術監(jiān)督局發(fā)布 本標準規(guī)定了結球白菜和不結球白菜種子品種純度及真實性鑒定的SSR、用和適宜的反應條件下,根據(jù)模板序列設計的兩條引物分別與模板DNA兩條鏈上相應的一段生退火而相互結合,接著在DNA聚合酶的作用下以四種脫氧核糖核苷酸(d伸。然后不斷重復變性、退火和延伸這一循環(huán)過程,使欲擴增的基因片段呈幾何簡單重復序列(SSR)和內部簡單重復序列(ISSR)廣5儀器設備及耗材5.1.2水浴鍋(0℃~100℃)。5.1.8冰箱(最低溫度-20℃)。離心管(0.2mL、0.5mL、1.5mL、2.0mL)、槍頭(10μL、200μL、1mL)、96孔PCR板、一次性手),7.1.1應優(yōu)先選用核心引物庫中的引物。當不能滿足7.3.1白菜品種純度檢測常用的SSR引物名稱及序列參見附錄B。 —子和標準樣品中各隨機數(shù)取一定數(shù)量種子(保證10株— 9檢測結果鑒定SSR電泳譜帶帶型的一致性,計數(shù)供檢樣品種子粒數(shù)(株數(shù))和非本):——引物位點差異≥2,判定兩個品種為不同品),),D.1.2將1.5mL離心管置于80℃~90℃水浴鍋中水浴10min,水浴過程中混勻2~3次。將提取的白菜樣品DNA適當稀釋,用紫外分光光度計在凹槽一端,將梳子齒向外,輕輕的插入梳子,使夾緊。在正極槽(下槽)和負極槽(上槽)中分別加在20μlPCR擴增產(chǎn)物中加入5μL6倍非變性加樣緩沖液,混勻。用吸球吹吸加
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