T-SDAA 0079-2024 混合型飼料添加劑 葡萄糖氧化酶

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由山東省畜牧協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：山東省飼料獸藥質(zhì)量檢驗(yàn)中心、山東隆科特酶制劑有限公司、青島蔚藍(lán)生物股份有限公司、濟(jì)南百斯杰生物工程有限公司、臨沂大學(xué)、魯東大學(xué)、山東新希望六和集團(tuán)有限公司、臨沂布恩生物科技有限公司、山東和美集團(tuán)有限公司、濟(jì)南百鳴生物制藥有限公司、山東久隆恒信藥業(yè)有限公司、安池（山東）動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究院有限公司、山東省蛋雞技術(shù)創(chuàng)新中心。本文件主要起草人：湯文利、張建龍、錢(qián)娟娟、趙旭、馮濤、李有志、張法玲、邵靜、劉延杰、孫春華、于娟、陳學(xué)華、韓克學(xué)、殷習(xí)棟、劉曉輝。本文件是首次發(fā)布?；旌闲惋暳咸砑觿┢咸烟茄趸副疚募?guī)定了混合型飼料添加劑葡萄糖氧化酶的術(shù)語(yǔ)和定義、產(chǎn)品分類(lèi)、技術(shù)要求、取樣、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)簽、包裝、運(yùn)輸、貯存和保質(zhì)期。本文件適用于飼料添加劑葡萄糖氧化酶與載體、穩(wěn)定劑或稀釋劑混合制成的固態(tài)或液態(tài)混合型飼料添加劑葡萄糖氧化酶產(chǎn)品。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T5917.1飼料粉碎粒度測(cè)定兩層篩篩分法GB/T6435飼料中水分的測(cè)定GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T6684-2002化學(xué)試劑30%過(guò)氧化氫GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定GB10648飼料標(biāo)簽GB13078飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T13079飼料中總砷的測(cè)定GB/T13080飼料中鉛的測(cè)定原子吸收光譜法GB/T13081飼料中汞的測(cè)定GB/T13082飼料中鎘的測(cè)定GB/T13091飼料中沙門(mén)氏菌的測(cè)定GB/T14699飼料采樣GB/T18869飼料中大腸菌群的測(cè)定GB/T30956飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的測(cè)定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法NY/T2071飼料中黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法JJF1070定量包裝商品凈含量計(jì)量檢驗(yàn)規(guī)則飼料原料目錄（中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第1773號(hào)）飼料添加劑品種目錄（中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第2045號(hào)）3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1葡萄糖氧化酶glucoseoxidase2一種催化葡萄糖與氧反應(yīng)生成葡萄糖酸和過(guò)氧化氫的氧化還原酶。3.2葡萄糖氧化酶產(chǎn)品的酶活力glucoseoxidasepreparationsactivity1g固體葡萄糖氧化酶產(chǎn)品（或1mL液體葡萄糖氧化酶產(chǎn)品）含有的酶活力單位，以U/g或U/mL表示。3.3葡萄糖氧化酶活力單位glucoseoxidaseactivityunit在37℃、pH5.5的條件下，每分鐘從濃度為1mol/Lβ-D-葡萄糖溶液中釋放1μmol過(guò)氧化氫所需要的酶量，為1個(gè)葡萄糖氧化酶活力單位，以U表示。4產(chǎn)品分類(lèi)4.1混合型飼料添加劑葡萄糖氧化酶4.2液態(tài)混合型飼料添加劑葡萄糖氧化酶5技術(shù)要求5.1載體、穩(wěn)定劑或稀釋劑應(yīng)為《飼料原料目錄》或《飼料添加劑品種目錄》規(guī)定品種，固體劑型可使用無(wú)水葡萄糖、玉米淀粉、玉米芯粉、沸石粉、硫酸鈉等，液體劑型可使用去除微生物的飲用水、丙二醇、丙三醇、氯化鈉等，應(yīng)符合GB13078要求，飲用水應(yīng)符合GB5749要求。5.2感官指標(biāo)5.2.1固體劑型色澤均一，無(wú)潮解、無(wú)霉變、無(wú)結(jié)塊，有固有的發(fā)酵氣味，無(wú)異味。5.2.2液體劑型色澤均一，允許有少量的凝聚物、絮狀物或沉淀，有固有的發(fā)酵氣味，無(wú)異味。5.3理化指標(biāo)理化指標(biāo)應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1理化要求]水分—3粒度（通過(guò)0.425mm孔徑試驗(yàn)篩）/%—5.4衛(wèi)生指標(biāo)衛(wèi)生指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。表2衛(wèi)生要求6取樣按GB/T14699規(guī)定執(zhí)行。7試驗(yàn)方法7.1感官檢驗(yàn)7.1.1固體劑型取適量試樣置于潔凈的白色盤(pán)中，在自然光下觀察。7.1.2液體劑型搖勻，取適量試樣置于干凈器皿中，靜置10min,在自然光下觀察。7.2酶活力按附錄A規(guī)定執(zhí)行。7.3水分4按GB/T6435規(guī)定執(zhí)行。7.4粒度按GB/T5917.1規(guī)定執(zhí)行。7.5pH量取25mL～50mL液體劑型試樣置于100mL燒杯中，按照pH試紙或pH計(jì)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行測(cè)定。7.6總砷按GB/T13079規(guī)定執(zhí)行。7.7鉛按GB/T13080規(guī)定執(zhí)行。7.8汞按GB/T13081規(guī)定執(zhí)行。7.9鎘按GB/T13082規(guī)定執(zhí)行。7.10黃曲霉毒素B1按NY/T2071規(guī)定執(zhí)行。7.11玉米赤霉烯酮按NY/T2071規(guī)定執(zhí)行。7.12脫氧雪腐鐮刀菌烯醇按GB/T30956規(guī)定執(zhí)行。7.13沙門(mén)氏菌按GB/T13091規(guī)定執(zhí)行。7.14大腸菌群按GB/T18869規(guī)定執(zhí)行。7.15凈含量按JJF1070規(guī)定執(zhí)行。8檢驗(yàn)規(guī)則8.1組批以相同原料、相同的生產(chǎn)工藝、連續(xù)生產(chǎn)或同一班次生產(chǎn)的同一規(guī)格的產(chǎn)品為一批混合型飼料添加劑葡萄糖氧化酶。58.2出廠檢驗(yàn)固體劑型產(chǎn)品出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目為感官、葡萄糖氧化酶酶活力、水分、粒度；液體劑型產(chǎn)品出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目為感官、葡萄糖氧化酶酶活力、pH。8.3型式檢驗(yàn)型式檢驗(yàn)的項(xiàng)目為本文件第5章規(guī)定的所有項(xiàng)目，在正常生產(chǎn)情況下，每年至少進(jìn)行一次型式檢驗(yàn)。在有下列情況之一時(shí)，亦應(yīng)進(jìn)行型式檢驗(yàn)：a)產(chǎn)品定型投產(chǎn)時(shí)；b)更改關(guān)鍵配方、工藝或生產(chǎn)設(shè)備時(shí)；c)原輔材料有較大變化，可能影響產(chǎn)品質(zhì)量時(shí)；d)停產(chǎn)3個(gè)月以上，重新恢復(fù)生產(chǎn)時(shí)；e)出廠檢驗(yàn)結(jié)果與上次型式檢驗(yàn)結(jié)果有較大差異時(shí)；f)飼料行政管理部門(mén)提出檢驗(yàn)要求時(shí)。8.4判定規(guī)則8.4.1檢驗(yàn)項(xiàng)目全部符合本文件規(guī)定時(shí)，判定該批次產(chǎn)品合格。8.4.2檢驗(yàn)結(jié)果中有任何指標(biāo)不符合本文件規(guī)定時(shí)，可從同批次產(chǎn)品中重新加倍取樣進(jìn)行復(fù)檢。若復(fù)檢結(jié)果有一項(xiàng)指標(biāo)不符合本文件規(guī)定，則判定該批次產(chǎn)品不合格。微生物指標(biāo)不得復(fù)檢。8.4.3各項(xiàng)目指標(biāo)的極限數(shù)值判定按GB/T8170中全數(shù)值比較法執(zhí)行。9標(biāo)簽、包裝、運(yùn)輸、貯存和保質(zhì)期9.1標(biāo)簽按GB10648規(guī)定執(zhí)行。9.2包裝包裝材料應(yīng)無(wú)毒、無(wú)害、防潮。包裝容器應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)規(guī)定。9.3運(yùn)輸運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)有遮蓋物，避免日曬雨淋，不得與有毒、有害、有腐蝕性物質(zhì)混放、混運(yùn)，運(yùn)輸工具應(yīng)清潔、無(wú)毒、無(wú)污染。9.4貯存產(chǎn)品應(yīng)貯存于清潔、陰涼、干燥、通風(fēng)的環(huán)境中，避免受熱、受潮，不得與有毒、有害、有腐蝕性物質(zhì)混放。9.5保質(zhì)期在規(guī)定的運(yùn)輸和貯存條件下，原包裝自生產(chǎn)之日起固體劑型保質(zhì)期為12個(gè)月，液體劑型保質(zhì)期為6個(gè)月。6葡萄糖氧化酶酶酶活力測(cè)定鄰聯(lián)茴香胺法A.1原理在規(guī)定的溫度和pH條件下，葡萄糖氧化酶催化葡萄糖和氧反應(yīng)，生成葡萄糖酸和過(guò)氧化氫。反應(yīng)生成的過(guò)氧化氫在辣根過(guò)氧化物酶的作用下與鄰聯(lián)茴香胺反應(yīng)，生成氧化型鄰聯(lián)茴香胺。氧化型鄰聯(lián)茴香胺在540nm波長(zhǎng)處的吸光度值與反應(yīng)過(guò)程生成的過(guò)氧化氫量成正比，而過(guò)氧化氫的生成量又與反應(yīng)液中葡萄糖氧化酶的活力成正比。用分光光度法測(cè)定，計(jì)算葡萄糖氧化酶活力。本方法定量限：固體劑型50U/g，液體劑型50U/mL。A.2試劑或材料除特殊說(shuō)明外，所用的試劑均為分析純，水為符合GB/T6682中規(guī)定的三級(jí)水。A.2.130%過(guò)氧化氫溶液：優(yōu)級(jí)純。含量按照GB/T6684-2002中5.1規(guī)定進(jìn)行標(biāo)定。臨用現(xiàn)配。A.2.2磷酸緩沖溶液（0.1mol/L，pH5.5分別稱(chēng)取磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）3.50g和磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O）26g于1000mL燒杯中，加入900mL水溶解，調(diào)節(jié)pH至5.50±0.02再轉(zhuǎn)移至1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。A.2.3鄰聯(lián)茴香胺儲(chǔ)備溶液（10mg/mL避光操作。準(zhǔn)確稱(chēng)取鄰聯(lián)茴香胺100mg（CAS號(hào)：119-90-4，含量≥98%精確至0.1mg，置10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。4℃避光密封保存，有效期1個(gè)月。注：國(guó)際癌癥研究中心(IARC)認(rèn)定鄰聯(lián)茴香胺為可疑致癌A.2.4鄰聯(lián)茴香胺工作溶液：移取鄰聯(lián)茴香胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（A.2.3）0.1mL，加入磷酸緩沖液（A.2.1）12mL，臨用現(xiàn)配。A.2.5葡萄糖底物溶液（1.0mol/L稱(chēng)取經(jīng)103℃±2℃干燥至恒重的D（+）-無(wú)水葡萄糖（CAS號(hào)：50-99-7，含量≥99.5%）約18g，精確至1mg，置100mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，搖勻。4℃保存，有效期5天,如變色，不能使用。A.2.6辣根過(guò)氧化物酶溶液（100U/mL稱(chēng)取適量辣根過(guò)氧化物酶（250U/mg,CAS號(hào)：9003-99-0相當(dāng)于辣根過(guò)氧化物酶2500U，置25mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。4℃保存，有效期為7天。-18℃冷凍保存，有效期42天。使用前4℃條件下解凍，不可反復(fù)凍融。A.2.7硫酸溶液（稀釋V1→V2移取10mL濃硫酸（純度≥98%緩慢注入80mL水中，充分?jǐn)嚢?，冷卻，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。A.2.8過(guò)氧化氫標(biāo)準(zhǔn)溶液（1mg/mL準(zhǔn)確稱(chēng)取30%過(guò)氧化氫（A.2.1）適量（約相當(dāng)于過(guò)氧化氫0.1g精確至0.1mg，置100mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。臨用現(xiàn)配。7A.2.9過(guò)氧化氫系列標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別精密量取0.5mL、0.6mL、0.7mL、0.8mL和0.9mL過(guò)氧化氫標(biāo)準(zhǔn)溶液（A.2.8）于10mL容量瓶中，用水稀釋并定容至刻度，搖勻，配制成過(guò)氧化氫系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度分別為：50μg/mL、60μg/mL、70μg/mL、80μg/mL和90μg/mL。A.3儀器設(shè)備A.3.1天平：感量0.0001g。A.3.2可見(jiàn)光分光光度計(jì)：波長(zhǎng)400nm~800nm。A.3.3pH計(jì)：精確至0.01pH。A.3.4漩渦混合儀。A.3.5恒溫水浴鍋：精度±0.1℃。A.3.6移液器：5mL、2.5mL、1mL和200μL。A.3.7玻璃試管：φ18mm×150mm。A.3.8離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。A.3.9磁力攪拌器。A.3.10計(jì)時(shí)器：精度≤5s/h。A.4樣品A.4.1固體劑型按照GB/T14699的規(guī)定進(jìn)行采樣，選取有代表性的樣品，用四分法縮分至250g，裝入密封容器中，備用。A.4.2液體劑型按照GB/T14699的規(guī)定進(jìn)行采樣，選取有代表性的樣品，混勻后，取250mL，裝入密封容器中，備用。A.5試驗(yàn)步驟A.5.1空白溶液的制備取1支玻璃試管，加入鄰聯(lián)茴香胺工作溶液（A.2.4）2.5mL、葡萄糖底物溶液（A.2.5）0.3mL、辣根過(guò)氧化物酶溶液（A.2.6）0.1mL，混勻，置于37℃恒溫水浴鍋（A.3.5）中平衡5min；加入三級(jí)水0.1mL，37℃準(zhǔn)確反應(yīng)3min；加入硫酸溶液（A.2.7）2.0mL，搖勻，制成空白溶液。A.5.2標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制取5支玻璃試管，加入鄰聯(lián)茴香胺工作溶液（A.2.4）2.5mL、葡萄糖底物溶液（A.2.5）0.3mL、辣根過(guò)氧化物酶溶液（A.2.6）0.1mL，混勻，置于37℃恒溫水浴鍋（A.3.5）中平8衡5min；分別加入過(guò)氧化氫系列標(biāo)準(zhǔn)工作液（A.2.9）0.1mL，37℃準(zhǔn)確反應(yīng)3min；加入硫酸溶液（A.2.7）2.0mL，搖勻。以空白溶液（A.5.1）為參比，用1cm比色皿，在540nm波長(zhǎng)處測(cè)定各溶液的吸光度，以過(guò)氧化氫濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，R2≥0.998。A.5.3試樣溶液的制備A.5.3.1固體劑型試樣溶液的制備平行做兩份試驗(yàn)。方法一：準(zhǔn)確稱(chēng)取1g試樣，精確至0.1mg,置100mL燒杯中，加入磷酸緩沖溶液（A.2.2）50mL，在磁力攪拌器(A.3.9)上攪拌30min，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用磷酸緩沖溶液（A.2.2）定容至刻度（V定容），搖勻。靜置5min,移取適量上清液按照附錄B表B.1中建議的稀釋倍數(shù)進(jìn)行稀釋。方法二：準(zhǔn)確稱(chēng)取1g試樣，精確至0.1mg,置碾缽中充分碾磨，加入磷酸緩沖溶液（A.2.2）溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用磷酸緩沖溶液（A.2.2）定容至刻度（V定容搖勻。靜置5min,移取適量上清液按照附錄B表B.1中建議的稀釋倍數(shù)進(jìn)行稀釋。A.5.3.2液體劑型試樣溶液的制備平行做兩份試驗(yàn)。精密量取1.00mL試樣，置100mL容量瓶中，用磷酸緩沖溶液（A.2.2）定容至刻度（V定容），搖勻。靜置5min,移取適量上清液按照附錄B表B.1中建議的稀釋倍數(shù)進(jìn)行稀釋。A.5.4試樣溶液的測(cè)定A.5.4.1試樣空白溶液的測(cè)定取1支玻璃試管，加入鄰聯(lián)茴香胺工作溶液（A.2.4）2.5mL、葡萄糖底物溶液（A.2.5）0.3mL、辣根過(guò)氧化物酶溶液（A.2.6）0.1mL，混勻，置于37℃恒溫水浴鍋（A.3.5）中平衡5min；加入硫酸溶液（A.2.7）2.0mL，混勻，加入待測(cè)試樣溶液（A.5.3）0.1mL，混勻，37℃準(zhǔn)確反應(yīng)3min。以空白溶液（A.5.1）為參比，用1cm比色皿，在540nm波長(zhǎng)處測(cè)定試樣空白溶液的吸光度（A0）。A.5.4.2試樣溶液的測(cè)定取1支玻璃試管，加入鄰聯(lián)茴香胺工作溶液（A.2.4）2.5mL、葡萄糖底物溶液（A.2.5）0.3mL、辣根過(guò)氧化物酶溶液（A.2.6）0.1mL，混勻，置于37℃恒溫水浴鍋（A.3.5）中平衡5min；加入待測(cè)試樣溶液（A.5.3）0.1mL，混勻，37℃準(zhǔn)確反應(yīng)3min；加入硫酸溶液（A.2.7）2.0mL，混勻。以空白溶液（A.5.1）為參比，用1cm比色皿，在540nm波長(zhǎng)處測(cè)定試樣溶液的吸光度（A試樣）。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出（A試樣-A0）對(duì)應(yīng)的試樣溶液中過(guò)氧化氫濃