2024高考生物二輪復(fù)習(xí)專題八生物技術(shù)實踐考點二微生物的分離培養(yǎng)及應(yīng)用學(xué)案

PAGE11-考點二微生物的分別、培育及應(yīng)用1.圖解識記微生物的培育、分別與計數(shù)2.熟記微生物分別與計數(shù)的兩個實例（1）土壤中分解尿素的細菌的分別與計數(shù)：①篩選菌株：利用選擇培育基篩選菌株。②測定微生物數(shù)量的常用方法：活菌計數(shù)法（或稀釋涂布平板法）和顯微鏡干脆計數(shù)。③過程：土壤取樣→樣品稀釋→微生物的培育與視察。④鑒定方法：含酚紅指示劑的以尿素為唯一氮源的培育基→細菌→指示劑變紅，則該菌能分解尿素。（2）分解纖維素的微生物的分別：①試驗原理：即：可通過是否產(chǎn)生透亮圈來篩選纖維素分解菌。②流程：土壤取樣→選擇培育→梯度稀釋→涂布平板→選擇菌落。3.理清微生物培育的“5”種基本技術(shù)（1）培育基的制備：計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板。（2）無菌技術(shù)：主要包括消毒和滅菌。（3）倒平板操作：待培育基冷卻至50℃左右時，在酒精燈火焰旁邊倒平板。（4）平板劃線操作：平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培育基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培育基的表面。留意劃線的方法（如圖）。（5）稀釋涂布平板法：先將菌液進行一系列的梯度稀釋然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培育基的表面，進行培育。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培育基表面形成單個菌落。1.微生物培育基主要含有碳源、氮源、水和無機鹽四類物質(zhì)。除此之外往往還需加入生長因子、調(diào)整pH等。加入瓊脂則為固體培育基。加入抗生素可抑制細菌生長。2.培育基按作用（功能）分為：選擇培育基和鑒別培育基；按物理屬性分為：固體培育基和液體培育基。補充：液體培育基可用于快速擴增微生物；而純化和計數(shù)必需用固體培育基。留意：獲得純凈微生物的關(guān)鍵是無菌技術(shù)（防止雜菌污染）。3.培育基用高壓蒸汽滅菌；接種環(huán)用灼燒滅菌；玻璃器皿用干熱滅菌。4.用伊紅美藍培育基可鑒定大腸桿菌，菌落呈現(xiàn)黑色。5.微生物的純化方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法。純化的目的：獲得單菌落。6.菌落的概念：由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體。7.菌落的特征：形態(tài)、大小、隆起程度和顏色等，都可以用于鑒定菌種。8.微生物的計數(shù)方法：（1）顯微鏡干脆計數(shù)法（比實際值偏大）→因為死菌和活菌都統(tǒng)計了；（2）稀釋涂布平板法（比實際值偏?。驗閮蓚€或多個細胞連在一起時，平板上只能視察到一個菌落（單菌落）。9.稀釋涂布平板法計數(shù)留意點：（1）計數(shù)時，每個稀釋濃度一般涂布3個平板；（2）計數(shù)所用平板中的菌落在30～300之間；（3）計算統(tǒng)計的菌落數(shù)不肯定是活菌數(shù)；（4）統(tǒng)計值比實際值偏小，計算公式：eq\f(每個平板計數(shù)平均值,涂布時所用稀釋液的體積)×稀釋倍數(shù)單位：個/mL留意：該公式基于原液為1mL。若原液為1L中取了1mL進行梯度稀釋，那么在總數(shù)上乘1000，單位為個/L。10.菌種的保存方法：臨時保藏→用試管的固體斜面培育基接種后保藏在4℃冰箱中；長期保存→用甘油管藏法。1.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？提示：平板正置時，平板冷凝后，皿蓋上會凝聚水珠，將平板倒置，既可以避開培育基表面的水分揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培育基，造成污染。2.微生物的接種方法只有平板劃線法和稀釋涂布平板法嗎？微生物接種的核心是什么？提示：不是。微生物的接種方法還包括斜面接種、穿刺接種等，其核心是防止雜菌污染，保證培育物的純度。3.得到3個或3個以上菌落數(shù)在30～300的平板肯定正確嗎？提示：如得到3個平板，菌落數(shù)分別為230、34、240，雖然菌落數(shù)均在“30～300”，但由于34與另外兩個平板上的菌落數(shù)差異較大，應(yīng)找出緣由并重新進行試驗。微生物培育試驗中的常見的兩種比照組與一種重復(fù)組的作用分別是什么？提示：（1）若將未接種的選擇培育基與接種的選擇培育基一起培育——用于確認培育基滅菌是否徹底（制備是否合格）。（2）若將接種的一般培育基與接種的選擇培育基一起培育——用于確認選擇培育基是否起到“篩選”作用。（3）進行微生物計數(shù)時，每一稀釋度下涂布三個平板，即設(shè)置重復(fù)組，是為了求平均值，提高計數(shù)精確度。1.（2024·全國卷Ⅰ）某種物質(zhì)S（一種含有C、H、N的有機物）難以降解，會對環(huán)境造成污染，只有某些細菌能降解S。探討人員依據(jù)下圖所示流程從淤泥中分別得到能高效降解S的細菌菌株。試驗過程中須要甲、乙兩種培育基，甲的組分為無機鹽、水和S，乙的組分為無機鹽、水、S和Y?；卮鹣铝袉栴}：（1）試驗時，盛有水或培育基的搖瓶通常采納的方法進行滅菌。乙培育基中的Y物質(zhì)是。甲、乙培育基均屬于培育基。（2）試驗中初步估測搖瓶M中細菌細胞數(shù)為2×107個/mL，若要在每個平板上涂布100μL稀釋后的菌液，且保證每個平板上長出的菌落數(shù)不超過200個，則至少應(yīng)將搖瓶M中的菌液稀釋倍。（3）在步驟⑤的篩選過程中，發(fā)覺當(dāng)培育基中的S超過某一濃度時，某菌株對S的降解量反而下降，其緣由可能是（答出1點即可）。（4）若要測定淤泥中能降解S的細菌細胞數(shù)，請寫出主要試驗步驟_________________________________________________________________________。（5）上述試驗中，甲、乙兩種培育基所含有的組分雖然不同，但都能為細菌的生長供應(yīng)4類養(yǎng)分物質(zhì)，即。解析：（1）常用高壓蒸汽滅菌法處理盛有水或培育基的搖瓶，乙為固體培育基，故須要加入Y瓊脂；甲和乙培育基可以用于篩選能降解S的菌株，故均屬于選擇培育基。（2）若要在每個平板上涂布100μL稀釋液后的菌液，且每個平板上長出的菌落數(shù)不超過200個，則搖瓶M中的菌液稀釋的倍數(shù)至少為2×107÷1000×100÷200＝1×104倍。（3）當(dāng)培育基中的S超過某一濃度后，可能會抑制菌株的生長，從而造成其對S的降解量下降。（4）要測定淤泥中能降解S的細菌的細胞數(shù)，可以取淤泥加無菌水制成菌懸液，稀釋涂布到乙培育基上，培育后進行計數(shù)。（5）甲和乙培育基均含有水、無機鹽、碳源、氮源。答案：（1）高壓蒸汽滅菌瓊脂選擇（2）104（3）S的濃度超過某一值時會抑制菌株的生長（4）取淤泥加入無菌水，涂布（或稀釋涂布）到乙培育基上，培育后計數(shù)（5）水、碳源、氮源和無機鹽2.（2024·江蘇卷）產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株，科研人員開展了相關(guān)探討。請回答下列問題：（1）常規(guī)微生物試驗中，下列物品及其滅菌方法錯誤的是（填編號）。編號①②③④物品培育基接種環(huán)培育皿涂布器滅菌方法高壓蒸汽火焰灼燒干熱臭氧（2）稱取1.0g某土壤樣品，轉(zhuǎn)入99mL無菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)后，獲得細胞密度不同的菌懸液。分別取0.1mL菌懸液涂布在固體培育基上，其中10倍稀釋的菌懸液培育后平均長出了46個酵母菌落，則該樣本中每克土壤約含酵母菌個。（3）為了進一步提高酵母菌產(chǎn)酶實力，對分別所得的菌株，采納射線輻照進行育種。將輻照處理后的酵母菌涂布在以為唯一碳源的固體培育基上，培育一段時間后，依據(jù)菌落直徑大小進行初篩，選擇直徑的菌落，純化后獲得A、B兩突變菌株。（4）在處理含油廢水的同時，可獲得單細胞蛋白，實現(xiàn)污染物資源化。為評價A、B兩菌株的相關(guān)性能，進行了培育探討，結(jié)果如圖。據(jù)圖分析，應(yīng)選擇菌株進行后續(xù)相關(guān)探討，理由是________________________________________________________。解析：（1）培育基一般進行高壓蒸汽滅菌，接種環(huán)可用火焰灼燒滅菌，培育皿一般通過干熱滅菌，涂布器應(yīng)當(dāng)用酒精引燃滅菌；故①②③正確，錯誤的是④。（2）稀釋涂布平板法是將樣品進行一系列梯度稀釋后，獲得細胞密度不同的菌懸液，然后涂布到平板上。依據(jù)題意，1.0g土壤樣品轉(zhuǎn)入99mL無菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)系列梯度稀釋后，分別取0.1mL菌懸液涂布在固體培育基上，則稀釋的倍數(shù)為1000倍，其中10倍稀釋的菌懸液培育后長出了46個酵母菌落，則總的稀釋倍數(shù)為10000倍，故每克土壤中含酵母菌數(shù)為46×10000＝4.6×105個。（3）依據(jù)題意，欲提高酵母菌產(chǎn)酶實力，可對分別得到的產(chǎn)脂肪酶酵母菌菌株進行射線輻射，該育種方式為誘變育種。為了能篩選出符合要求的產(chǎn)脂肪酶酵母菌突變株，可配制以脂肪為唯一碳源的培育基，將輻射處理的酵母菌涂布在該固體培育基上，形成單菌落；產(chǎn)脂肪酶實力越強的酵母菌，分解利用脂肪的實力越強，菌落生長越好，一段時間后，依據(jù)菌落直徑大小進行初篩，選取直徑較大的菌落即可。（4）據(jù)題圖分析可知，相同時間內(nèi)，菌株B的細胞密度高于菌株A，而菌株B的脂肪剩余量低于菌株A的脂肪剩余量，故進行相關(guān)探討可選擇菌株B，緣由是菌株B增殖速度快，單細胞蛋白的產(chǎn)量也高，同時降解脂肪的實力強，凈化效果更好。答案：（1）④（2）梯度稀釋4.6×105（或460000）（3）誘變脂肪（或油脂）較大（4）B該菌株增殖速度快，單細胞蛋白產(chǎn)量高；降解脂肪實力強，凈化效果好熱點1微生物的試驗室培育與無菌技術(shù)1.（2024·廣州一模）現(xiàn)已知細菌的抑藻方式有干脆抑藻（細菌與藻細胞干脆接觸）和間接抑藻（細菌分泌胞外抑藻物質(zhì)）兩種方式。探討人員從養(yǎng)殖場簇新養(yǎng)殖廢水中篩選出了一株對某有害水華藻具高效抑藻實力的菌株，大致過程如下：制備養(yǎng)殖廢水稀釋液→接種于固體培育基→細菌純化培育→發(fā)酵液抑藻試驗→篩選菌株?；卮鹣铝袉栴}。（1）培育基中能同時供應(yīng)碳源、氮源的成分是（填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaCl”）。為避開由于微生物繁殖導(dǎo)致培育基，而不相宜運用，配制好的培育基要馬上進行滅菌。（2）制備不同濃度的養(yǎng)殖廢水稀釋液時每次都要更換無菌移液管，緣由是________________________。（3）為探究該菌株的抑藻方式，將適量去除菌體的發(fā)酵液（甲組）、含菌體的發(fā)酵液（乙組）和無菌培育基（丙組）分別加入到有害水華藻液中，適量條件培育一段時間，統(tǒng)計有害水華藻的數(shù)量。若，表明該菌株能進行間接抑藻。（4）對該菌株的胞外物質(zhì)進行透析，在截留分子量分別為1000Da、500Da和100Da（Da表示單位）的透析袋（作用與半透膜相像）透析后，發(fā)覺袋內(nèi)物質(zhì)抑藻實力分別是無、有和有。這表明提取出來的抑藻物質(zhì)的分子量范圍最可能是。解析：（1）在細菌培育時，培育基中能同時供應(yīng)碳源、氮源的成分是蛋白胨。獲得純凈的培育基是探討和應(yīng)用微生物的前提，為避開由于微生物繁殖導(dǎo)致培育基污染，操作者需用酒精擦拭雙手消毒，對金屬用具、玻璃器皿、培育基等要進行滅菌，其中，培育基只能用高壓蒸汽滅菌。（2）制備不同濃度的養(yǎng)殖廢水稀釋液時須要運用移液管。洗凈后的移液管內(nèi)壁應(yīng)不掛水珠。移取溶液前，應(yīng)先用濾紙將移液管末端內(nèi)外的水吸干，每次運用時需更換無菌移液管，緣由是運用過的移液管中的殘留液會變更所移取溶液的濃度，影響試驗結(jié)果。（3）為探究該菌株的抑藻方式，自變量是抑藻物質(zhì)，因變量是水華藻細胞數(shù)量。其中甲、乙兩組加入的是含菌體的發(fā)酵液與水華藻細胞，為間接抑藻（細菌分泌胞外抑藻物質(zhì)）；丙組加入的是無菌培育基與水華藻細胞，為空白比照。若該菌株能進行間接抑藻，則甲、乙兩組水華藻細胞的數(shù)量均明顯低于丙組。（4）從題干信息可知，用截留分子量為1000Da的透析袋對該菌株的胞外物質(zhì)進行透析后，袋內(nèi)物質(zhì)無抑藻實力，說明菌株胞外物質(zhì)可以透過截留分子量為1000Da的透析袋；用500Da和100Da的透析袋對該菌株的胞外物質(zhì)進行透析后，袋內(nèi)物質(zhì)有抑藻實力，說明菌株胞外物質(zhì)不能透過截留分子量為500Da和100Da的透析袋。這表明提取出來的抑藻物質(zhì)的分子量范圍最可能在500Da～1000Da之間。答案：（1）蛋白胨污染高壓蒸汽（2）運用過的移液管中的殘留液會影響結(jié)果（3）甲組和乙組的水華藻數(shù)量均明顯低于丙組（4）大于500Da且小于1000Da（或“500Da～1000Da”）2.（2024·廣東六校聯(lián)考）海洋藻類上常附著有多種微生物，其中部分在生物醫(yī)藥和日用化工等生產(chǎn)領(lǐng)域具有重要的經(jīng)濟價值，而部分會產(chǎn)生某些毒素污染環(huán)境或毒害動物，人們須要對它們進行大量的探討。請回答下列問題：（1）若要將微生物采納平板劃線法進行分別操作，正確的是圖，其正確操作過程中，劃線工具至少要灼燒次。（2）長期保存菌種時，應(yīng)將培育的菌液與充分混勻后，放在－20℃的冷凍箱保存，丟棄已經(jīng)接種過微生物的培育基前，往往須要先行滅菌，以免_________________________________________________。（3）A、B兩組同學(xué)用稀釋涂布平板法測定某種微生物的數(shù)量，在同一稀釋倍數(shù)下每隔一段時間記錄數(shù)據(jù)（統(tǒng)計時間內(nèi)微生物總數(shù)在增長過程中），得到以下結(jié)果培育時間（小時）24487296A組菌落均值（個）18253632B組菌落均值（個）20283832計數(shù)時最好取72小時記錄的菌落數(shù)作為試驗結(jié)果，緣由是①_________________________________________；②_______________________________________。（4）發(fā)酵工程常常須要對某些微生物進行固定，最常用的方法是法。某真菌產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，可選用（填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”）從菌體中提取。解析：（1）由分析可知：若要將微生物采納平板劃線法進行分別操作，圖B是正確的，其正確操作過程中，由圖中的劃線區(qū)域共四個，取菌種前以及每次劃線前和最終劃線完畢都有灼燒，故劃線工具至少要灼燒5次。（2）菌種長期保存的方法是甘油管藏法，故應(yīng)將培育的菌液與甘油充分混勻后，放在－20℃的冷凍箱保存，為了避開污染環(huán)境或者對其他生物產(chǎn)生毒害，丟棄已經(jīng)接種過微生物的培育基前，往往須要先行滅菌。（3）為避開因為①培育時間不足，遺漏菌落數(shù)目，或培育時間過長，兩個或多個菌落連成一個菌落，影響計數(shù)的結(jié)果，故最好取72小時記錄的菌落數(shù)作為試驗結(jié)果。（4）對于細胞常常用包埋法進行固定，故對某些微生物進行固定，最常用的方法是包埋法。對于不易揮發(fā)的某真菌產(chǎn)生的油脂，可選用萃取法從菌體中提取。答案：（1）B5（2）甘油污染環(huán)境或者對其他生物產(chǎn)生毒害（3）①培育時間不足，遺漏菌落數(shù)目；②培育時間過長，兩個或多個菌落連成一個菌落（兩空位置可以互換）（4）包埋萃取法制備選擇培育基的3個常用方法（1）在基本培育基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。例如，加入青霉素可以分別出酵母菌和霉菌；加入高濃度的食鹽可以得到金黃色葡萄球菌。這里的加入是在主要養(yǎng)分成分完整的基礎(chǔ)上進行的。（2）變更培育基中的養(yǎng)分成分。例如缺乏氮源時可以分別出固氮微生物；石油作為唯一碳源時，可以分別出能消退石油污染的微生物。（3）變更微生物的培育條件。例如，將培育基放在高溫環(huán)境下培育，可以得到耐高溫的微生物。熱點2綜合考查微生物的培育、分別、計數(shù)及應(yīng)用3.（2024·深圳一模）某生物愛好小組探討從土壤中分別能夠分解纖維素的微生物。回答下列問題。（1）分解纖維素的微生物將纖維素水解后氧化分解的最終產(chǎn)物是。（2）該小組將富含纖維素的土壤作為土樣，加入至選擇培育基中進行振蕩培育，此階段培育目的是。吸取上述培育液，稀釋涂布到加入了（染料）的另一種培育基，以篩選出纖維素分解菌，并依據(jù)菌落周邊所出現(xiàn)的大小初步推斷纖維素分解菌分解實力的大小。（3）利用稀釋涂布平板法測定細菌數(shù)時，每個稀釋度至少涂布個平板。小組中甲同學(xué)在某稀釋濃度下篩選出150個菌落，其他同學(xué)在該濃度下只篩選出大約50個菌落。乙同學(xué)分析甲的試驗結(jié)果與其他同學(xué)差異的緣由可能是（答一項即可），為了驗證這一分析，進一步試驗的思路是__________________________________________________。解析：（1）分解纖維素的微生物將纖維素水解后得到葡萄糖，葡萄糖氧化分解的最終產(chǎn)物是二氧化碳和水。（2）振蕩可以增加溶氧量及微生物與養(yǎng)分物質(zhì)的接觸，此階段培育目的是增加所需微生物的的濃度（使目的微生物得到快速繁殖）。剛果紅能與培育基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，吸取上述培育液，稀釋涂布到加入了剛果紅（染料）的另一種培育基，以篩選出纖維素分解菌。并依據(jù)菌落周邊所出現(xiàn)透亮圈的大小初步推斷纖維素分解菌分解實力的大小，直徑越大，分解實力越強。（3）利用稀釋涂布平板法測定細菌數(shù)時，每個稀釋度至少涂布3個平板，以減小誤差。甲的菌落數(shù)過多，可能是培育基被污染。為了驗證這一分析，可以用甲同學(xué)配制的同批培育基在不加土樣的狀況下進行培育，作為空白比照或進行重復(fù)試驗。答案：（1）二氧化碳和水（2）增加所需微生物的的濃度（使目的微生物得到快速繁殖）剛果紅透亮圈（3）3①培育基被污染用甲同學(xué)配制的同批培育基在不加土樣的狀況下進行培育，作為空白比照（或②甲所選土壤樣品不一樣用與甲同學(xué)一樣的土壤進行重復(fù)試驗）4.（2024·南昌期末）為了分別和純化高效分解石油的細菌，科研人員利用被石油污染過的土壤進行如圖A所示的試驗。（1）配制好的培育基滅菌通常可以運用法。步驟③與步驟②中培育基成分的最大區(qū)分是。（2）同學(xué)甲進行過程④的操作，其中一個平板經(jīng)培育后的菌落分布如圖B所示。該同學(xué)的接種方法是；推想同學(xué)甲用此方法接種時出現(xiàn)圖B結(jié)果可能的操作失誤是；在接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培育了一段時間，這樣做的目的是。（3）同學(xué)乙也依據(jù)同學(xué)甲的接種方法進行了過程④的操作：將1mL樣品稀釋100倍，在3個平板上分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培育后，3個平板上的菌落數(shù)分別為56、58和57。據(jù)此可得出每升樣品中的活菌數(shù)為。（4）步驟⑤須要震蕩培育其目的是提高培育液溶氧量，同時使，提高養(yǎng)分物質(zhì)利用率。（5）步驟⑤后取樣測定石油含量的目的是__________________________________________________。解析：（1）依據(jù)題意，要分別和純化高效分解石油的細菌，配制好的培育基滅菌通常可以運用高壓蒸汽滅菌法。圖中步驟②是擴大培育來自被石油污染過的土壤中細菌，步驟③是利用添加石油擴大培育分解石油的細菌，步驟③與步驟②中培育基成分的最大區(qū)分是步驟③的培育基中石油是唯一碳源。（2）過程④是對分解石油的細菌進行分別，分析B圖可知，分解石油的細菌在培育基表面分布較為勻稱，說明同學(xué)甲進行過程④的操作中接種方法是稀釋涂布平板法；圖B中培育基表面左側(cè)的菌落數(shù)目明顯比右側(cè)多，推想同學(xué)甲用此方法接種時出現(xiàn)圖B結(jié)果可能的操作失誤是接種時涂布不勻稱；在接種前需隨機取若干滅菌后的空白平板先行培育了一段時間，這樣做的目的是檢測培育基平板滅菌是否合格。（3）同學(xué)乙也依據(jù)同學(xué)甲的接種方法進行了過程④的操作：將1mL樣品稀釋100倍，在3個平板上分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培育后，3個平板上的菌落數(shù)分別為56、58和57。據(jù)此可得出每升樣品中的活菌數(shù)為（56＋58＋57）÷3÷0.1×100×1000＝5.7×107。（4）步驟⑤須要震蕩培育其目的是提高培育液溶氧量，同時使菌體與培育液充分接觸，提高養(yǎng)分物質(zhì)利用率。（5）步驟⑤后取樣測定石油含量的目的是篩選出分解石油實力最好的細菌，其中石油剩余量最少的一組所含的細菌就是分解石油實力最好的細菌。答案：（1）高壓蒸汽滅菌石油是唯一碳源（2）稀釋涂布平板法涂布不勻稱檢測培育基平板滅菌是否合格（3）5.7×107（4）菌體與培育液充分接觸（5）篩選出分解石油實力最好的細菌5.（2024·陜西模擬）測定水樣是否符合飲用水的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，常用濾膜法測定大腸桿菌的總數(shù)。大腸桿菌在含有伊紅美藍的固體培育基（EMB培育基）上長出的菌落呈黑色。如圖所示；濾膜法的大致流程：用濾膜過濾待測水樣→水樣中的細菌留在濾膜上→將濾膜轉(zhuǎn)移到EMB培育基上培育→統(tǒng)計菌落數(shù)目。據(jù)圖回答問題。（1）過濾待測水樣須要用到濾杯、濾膜和濾瓶，其中須要經(jīng)過滅菌處理的是。與過濾有關(guān)的操作都要在酒精燈火焰旁進行。（2）待測水樣過濾完之后，還有部分細菌吸附在濾杯杯壁上，將這部分細菌也盡可能集中到濾膜上的操作為__________________________________________________________________________________。（3）將完成過濾之后的濾膜緊貼在EMB培育基上，這屬于微生物培育中的操作。從功能上看，EMB培育基屬于培育基。（4）無菌操作下將90mL無菌水加入到10mL待測水樣中，這樣就將待測水樣稀釋了倍，將稀釋后的菌液通過濾膜法測得EMB培育基上的菌落數(shù)為45，黑色菌落為5，則1升待測水樣中的大腸桿菌數(shù)目為個。（5）若要測定待測水樣中酵母菌的數(shù)目，應(yīng)更換上述過濾裝置中的濾膜，選擇孔徑（填“更