數(shù)字PCR無創(chuàng)產(chǎn)前篩查技術應用于胎兒染色體病篩查初步實施的專家共識

樣本中21號染色體的整倍性。Fan等[10]應用微流控dPCR定量了21號染色體上淀粉為10%時也能夠準確地辨別出21三體胎兒。Tong等[11]利用母胎甲基化表達差異結蛋白基因表達量作為內參，準確檢測出5例21三體。ElKhattabi等[12]設計了用dPCR檢測孕婦外周血cffDNA含量來鑒別胎兒是否為染色體非整倍體的方法，并檢測了213例21三體。Lee等[13]利用已知的陰性與陽性樣本來確定dPCR檢測胎兒非整倍體的閾值，并對877例孕婦的血漿樣本進行了dPCR檢測。通過與介入性產(chǎn)前診斷的結果進行比對，證實dPCR檢測的準確率高達99.66%.Tan等[14]設計了通用的鎖定核酸探針鑒定胎兒非整倍體(21三體和18三體)的dPCR技術，利用60例臨床樣本評估了方法的準確性和臨床適用性，檢測結果與NIPT的一致率為100%。La?áková等[15]采用多重dPCR和鎖定核酸探針檢測了21號和18號染色體非整倍體，通過分析26例整倍體妊娠孕婦和16例21三體妊娠孕婦的血漿cfDNA,以確定樣本風險的切割值。對30例21三體風險為1/801~1/4的孕婦的血漿樣本進行了檢測，結果與侵入性診斷的結果完全一致(敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值均為100%)。Dai等[16]開發(fā)了通過單管反應同步Testing,dPCR-NIPT)技術，對樣品處理、cfDNA濃度富集、cffDNA占比富集、dPCR擴增試劑和設備、結果判讀原則以及技術原理進行了系統(tǒng)性闡述，利用283例臨床樣本證實了該方法的敏感性(100%)和特異性(95.12%)均優(yōu)于血清學篩查，同時成本遠低于NIPT.目前我國的醫(yī)療機構提供免費的血清學篩查，而昂貴的NIPT尚未完全納入公共保障體系，其費用的差別導致多數(shù)孕婦選擇血清學篩查.2015年的一份調查顯示，57.8%的孕婦更傾向于選擇血清學篩查而非NIPT[17]。從檢測性能和經(jīng)濟效益的角度看，dPCRGNIPT技術的檢測成本與血清學篩查相近，而陽性檢出率與NIPT相似，有望作為產(chǎn)前篩查的新工具.聯(lián)合NIPT篩查，將提供更好的胎兒染色體疾病篩查策略，值得在臨床推廣(圖1)。6編號與采集孕婦外周血分離血漿質控提取血漿游離DNA富集血漿游離DNA質控質控質控液滴生成質控質控質控質控②為了更合理、規(guī)范地將dPCR技術應用于產(chǎn)前篩查，中華醫(yī)學會醫(yī)學遺傳學會細胞與基因組學組專家共識討論組通過查閱國內外相關指南、共識和最新研究進展，收集意見形成初稿，再經(jīng)過反復討論和修改達成了本共識。對于臨床咨詢意見不一致的問題，通過德爾菲(Delphi)法進行投票達成。形成的推薦意見至少獲得50%的贊成比例，且持反對意見者的比例低于20%,至少獲得70%的贊同比例為強推薦意見。本共識內容主要涉及開展dPCR無創(chuàng)產(chǎn)前篩查技術應用胎兒染色體病篩查的基本要求、適用范圍、檢測前服務流程、檢測流程、報告解讀和遺傳咨詢以及技術的局限性等。1基本要求1.1機構要求醫(yī)療機構應具備臨床基因擴增檢驗實驗室的資質以開展dPCR-NIPT檢測項目，并且嚴格遵守《醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》《醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》等相關規(guī)定。1.2人員要求從事dPCR-NIPT檢測的實驗室人員應經(jīng)過省級及以上衛(wèi)生行政部門組織的臨床基因擴增檢驗技術培訓，并獲得培訓合格證，咨詢人員應為具有遺傳學背景的臨床醫(yī)師。1.3設備及試劑要求(1)醫(yī)療機構應具備開展dPCR-NIPT檢測的dPCR系統(tǒng)，建議配備NIPT檢測和染色體核2適用范圍2.1目標疾病2.1.1基礎版和13三體，其在活產(chǎn)兒中的發(fā)病率分別為1/800~1/600、1/8000~1/3500和1/10000。21三2.1.2升級版納綜合征(Turnersyndrome,45,X)和22q11.2缺失綜合征(22q11.2deletionsyndrome,22q11.2DS)等。45,X是唯一可以存活的染色體單體綜合征，發(fā)病率大約為1/4000~1/2500,患者臨床表現(xiàn)為身材矮小、性腺發(fā)育不良、智力障礙以及特殊5樣本檢測與質量控制5.1血漿分離及質量控制采用兩步離心法分離血漿.在轉移血漿的過程中應避免吸到底層殘留細胞.若不慎吸到5.2核酸提取與質量控制實驗室采用商品化或自配的核酸提取試劑盒提取4mL血漿中游離DNA,通過手工、半自動儀器、全自動儀器提取。提取后用30~40μL洗脫液洗脫，經(jīng)熒光光度計測定核酸濃度，濃度范圍控制在0.5~1.5ng/μL,低于0.5ng/μL的樣本可以濃縮或重新采樣，高于5.3液滴形成及質量控制液滴的粒徑應符合dPCR儀器要求，變異系數(shù)<5%,液滴生成后經(jīng)閱讀檢測，有效液滴率應>85.4PCR擴增及質量控制5.5結果判讀和質量控制率應≥40%.若<40%,則建議對核酸樣本進行濃縮或重新采血進行檢測；(2)不同的染5~1.65之間時，可判定21三體、18三體、13三體、45,X和22q11.2DS為陰性；當Z值<-1.65或>1.65時，可判定21三體、18三體、13三體、45,產(chǎn)前診斷機構應當負責高風險病例的后續(xù)咨詢及產(chǎn)前診斷，臨床咨詢率應達到100%,產(chǎn)性，如胎兒具有21號、18號、13號染色體部分單體、部分三體、部分四體型綜合征和同NIPT方法類似，用dPCR-NIPT篩查21三體、18三體和13三體也具有下列局限性婦，所得出的21三體、18三體或13三體低風險結果表明胎兒發(fā)生這些疾病的可能性很(2)據(jù)文獻[23-24]報道，基于cffDNA的篩查結果可能受到孕婦和胎兒本身因素的【推薦意見3】參考血清學篩查和NIPT,可采用dPCRGNIPT技術同步篩查21三體、18三體和13三體.此外，鑒于45,X和22q11.2DS的發(fā)病率和負擔不亞于18三體和13三體，也可使用dPCR-NIPT技術對21三體、45,X和22q11.2DS組合進行同[2]AkutsuSN,FujitaK,TomiokanologyinresearchonchromosomeaneuploidydisorDOI:10.3390/cells9010239.[J].現(xiàn)代疾病預防控制，2023,34(9):641-645.DOI:10.13515/ki.hnjpm.1006-841LiJJ,NalisaDL,SunZL.Researchprogressonoffetuschromosomeaneuploidy[J].ModernDisControlPrev,2023,34(9):641-645.DOI:10.13515/ki.hnjpm.1006-8414.2023.09.001.前診斷雜志(電子版),2019,11(2):4-8.DOI:10.13470/ki.cTangXH,ZhuBS.ShouldNIPTbeu2019,11(2):4-8.DOI:10.13470/ki.cjpd.2019.02.002.ZhouXY,ZhouY,GuoW.DigitalPCRCongenitAnom(Kyoto),2022,62(5):188-197.DOI:10.1111/cga.12481.renataltesting[J].BriefFunctGenomics,2022,21(5):376-386.DOI:10.1093/bfgp/elac024.emoleculardiagnostictool[J].ClinChem,2015,61(1):79-88.DOI:10.1373/clincoffetalchromosomalaneuploidy[J]6-13121.DOI:10.1073/pnas.070576esrapidprenataldiagnosis00(5):541-543.DOI:10.1016/j.ajog.21byanepigenetic-geneticchromosome-dosageapproach[J].ClinChem,20(1):90-98.DOI:10.1373/clinche[12]ElKhattabifofconceptstudy[J].PLoSOne,2016,11(5):e0155009.DOI:10.1371/journal.pone.on-invasiveprenatalscreeningoftrisomy21[J].ClinChimActa,2018,476:75-80.DOI:10.1016/j.cca.2017.11.015.non-invasiveprenataltestingoffetalaneuploidies[J].Analyst,2019,144(7):2239-2247.DOI:10.1039/c8a(1):22948.DOI:10.1038/s41598-023-50330-x.[16]DaiP,YangYF,ZhaoGY,etamies21,18and13i (1):269.DOI:10.1186/s12967-[17]KouKO,PoonCF,TseWC,etal.KnowledgeandfuturepreewomeninamajorpublichospitalinHongKongafterundergoingnon-invarenataltestingforpositiveaneuploidys[18]ShankarKikkeriN,NeIsland(FL):StatPearlsPublishing,2024.https://2deletionsyndrome[J].Heart[20]/fys/s3581/201611/0e6fe5bac1664[21]DunganJS,KlugmanS,DarilekS,eomics(ACMG)[J].GenetMed,2023,25(2):100336.DOI:10.1016/j.g